Диссертация (1174186), страница 19
Текст из файла (страница 19)
Через 30 мин концентрациярибофлавина при насыщении Риболинком превосходила показатели контроля на34% (р<0,05). В последующие 30-60 мин возросшая динамика содержаниявитамина В2 относительно препаратов сравнения в роговице сохранялась, приэтом выявленные отличия были статистически достоверны (р<0,05). Очевидно,чтоособенностисвойствполимеровдекстранаигидроксипропилметилцеллюлозы, входящих в состав препаратов Декстралинк иРиболинк, соответственно, обеспечивают различную доступность рибофлавинадля тканей роговицы.Раствор Хитолинк по количественному распределению рибофлавина всвиной роговице был близок к изоосмотичному раствору, который после 15 мининстилляций демонстрировал более активное проникновение в строму.
Впоследующем (до 60 мин) раствор рибофлавина и Хитолинк имели во многомсхожую динамику содержания витамина В2 в роговице, при этом статистическизначимых различий между ними установлено не было. Пенетрация рибофлавина всоставе средства Хитолинк с 15 мин по 60 мин достоверно обеспечивала болеевысокое – почти двукратное содержание интрастромального рибофлавина,относительно раствора Декстралинк (р<0,05).Такимобразом,приокулярныхинстилляцияхисследуемыхофтальмологических растворов на протяжении всего эксперимента (60 мин)кинетическиекривыесодержаниярибофлавинадемонстрировалиоднонаправленное и непрерывное нарастание концентрации фотосенсибилизаторав свиной роговице ex vivo. Диапазон концентраций рибофлавина в роговице после30 мин ее насыщения исследуемыми офтальмологическими растворами составилот 0,0142±0,0022 до 0,0330±0,0021 мг/г.
Корнеальный уровень витамина В2 прииспользовании изоосмотичного раствора был сопоставим со значениями,полученными при инстилляциях Хитолинка, тогда как применение Риболинка втечение всего срока наблюдений обеспечивало наибольший уровень рибофлавина97вроговице.ПосленасыщенияпрепаратомДекстралинккорнеальнаяконцентрация фотосенсибилизатора, начиная с 15 мин наблюдений, была меньшечем при использовании других растворов, это может быть связано со снижениемтолщины и, соответственно, объема роговицы.3.5.
Содержание рибофлавина в роговице кролика in vivo посленасыщения офтальмологическими растворами для УФ сшиванияЭксперименты по изучению динамики содержания фотосенсибилизатора вроговице in vivo призваны дать уточняющие сведения с учетом прижизненнойкинетики рибофлавина.Исследования проведены также в 4-х группах на 12 кроликах (24 глаза).После внутримышечного наркоза и местной анестезии метчиком выполнялиразметкуроговицыинауказанномучасткешпателемпроизводилидеэпителизацию диаметром 8-9 мм с использованием операционного микроскопа.Через 1, 5, 15, 30, 45 и 60 мин после инстилляций и летальной передозировкинаркоза выполнялась энуклеация глазного яблока, из которого выкраивалироговичный лоскут.
Проводили количественное определение (мг/г) рибофлавинав роговице. Средняя толщина роговиц кроликов по данным пахиметрии составила392±24 мкм.Количественноеопределениерибофлавинавдеэпителизированнойроговице кроликов in vivo также демонстрировало устойчивое повышение уровняфотосенсибилизатора во всех группах в течение всего срока регистрации (60мин). Одним из показателей, характеризующих степень насыщения роговицырибофлавином, является его концентрация в строме, которая через 15 и 30 мининстилляций для изоосмотического раствора составила 0,0398±0,0041 мг/г и0,0412±0,0019 мг/г, соответственно (Таблица 11).
При этом данные значенияпревышалирезультаты,полученныевэтомжевременномотрезкевэкспериментах ex vivo ~ на 40%. Максимальное содержание рибофлавина вроговице при использовании изоосмотического раствора определялось на 45 минисследований (0,0449±0,0022 мг/г), в последующем (на 60 мин) наблюдалосьснижение концентрации фотосенсибилизатора (Рисунок 7).98Уровень интракорнеального рибофлавина при применении средстваДекстралинк в течение всего срока эксперимента был меньше такового,относительно контроля – от 10% до 26%. Средство Декстралинк демонстрировалохарактерную кинетику рибофлавина в роговице in vivo и ex vivo, связанную ссодержанием полимера декстран в составе раствора.Таблица 11 - Концентрация рибофлавина в роговице кролика in vivo посленасыщения офтальмологическими растворами для УФ сшивания (мг/г, M±σ)Времянасыщения(мин)Растворы с 0,1% рибофлавиномРибофлавин(контроль)1 группаДекстралинкРиболинкХитолинк2 группа3 группа4 группа10,0053±0,00090,0042±0,00090,0037±0,00530,0044±0,000750,0243±0,00380,0180±0,00270,0217±0,00220,0220±0,0033150,0398±0,00410,0311±0,00340,0394±0,00280,0360±0,0029300,0412±0,00190,0331±0,0015* 0,0440±0,0027▲ 0,0407±0,0016▲450,0449±0,00220,0363±0,00200,0488±0,0015▲0,0427±0,0021600,0435±0,00190,0390±0,00230,0527±0,0029▲0,0473±0,0032* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с контролем.▲р<0,05 – достоверность различий при сравнении с группой 2.Риболинк также как и на модели ex vivo показывал максимальные значения,превышая с 30-ой мин наблюдений показатели группы 1 на 7% и группы 2 на 24%(р<0,05).
В последующие 30 мин инстилляций препарата Риболинк динамикароста концентрации рибофлавина в роговице сохранялась, хотя статистическизначимых различий с контролем не выявлено. Однако в этот же период уровеньвитамина В2 был достоверно выше значений 2-ой группы на 20-26% (р<0,05).Динамика насыщения роговицы при использовании средства Хитолинк напротяжении всего эксперимента не имела значимых отличий при сопоставлении споказателями 1-ой и 3-й групп, где использовался изоосмотический рибофлавин и99Риболинк, соответственно. При этом на 30 мин регистрировалась достовернаяразница значений в сравнении с группой 2, в которой концентрация рибофлавинабыла ниже таковой на 18,5% (р<0,05).0.060мг/г▲0.050▲0.0520.0450.0470.0480.044 ▲0.0430.041▲0.0390.0400.0420.0390.0400.0360.030*0.0360.0330.0310.0240.0220.0210.0200.0180.0100.0001515Рибофлавин (контроль)30Декстралинк4560ХитолинкминРиболинкРисунок 7 - Динамика уровня рибофлавина (мг/г) в роговице кролика in vivoпосле насыщения офтальмологическими растворами для УФ сшивания.* р<0,05 – достоверность различий показателя при сравнении с контролем.▲р<0,05 – достоверность различий при сравнении с группой Декстралинк.Несмотря на равную исходную концентрацию рибофлавина в растворахего уровень в роговице при применении средств Риболинк и Хитолинк былвыше, чем после инстилляций Декстралинка (Рисунок 7).
Более низкое, посравнениюсдругимирастворами,интракорнеальноесодержаниефотосенсибилизатора в группе Декстралинк может быть связано с декстранопосредованнымуплотнениемроговицы,соответственно,корнеальнойемкости,снижениемееобусловливающиетолщиныи,затруднениестромального транспорта гидрофильного рибофлавина мононуклеотида.100В абсолютном количественном выражении содержание рибофлавина намодели in vivo незначительно превосходило таковую, в сравнении сэкспериментами ex vivo, что может быть связано с разницей в гидратациистромы и организации коллагеновой структуры роговицы. Следует такжеотметить, что, в отличие от полимерных препаратов (Риболинк, Хитолинк,Декстралинк), недостатком применения изоосмотичного водного рибофлавинаявляется нестойкая прекорнеальная рибофлавиновая пленка, что в условияхпрактического применения требует его частых инстилляций.3.6.
Влияние площади деэпителизации роговицы на динамикусодержания рибофлавина во влаге передней камеры глаза кролика in vivoпосле насыщения роговицы офтальмологическими растворами для УФсшиванияСостоятельность насыщения стромы фотосенсибилизатором являетсяодним из основных факторов, который определяет как эффективность, так ибезопасность ультрафиолетового воздействия. Продолжительные инстилляциирибофлавина, имеющие место при проведении процедуры УФ сшиванияроговицы, способствуют не только диффузии фотосенсибилизатора в строму,но и в переднюю камеру глаза. В свою очередь, определение рибофлавина вовлаге передней камеры глаза кролика служит косвенным доказательством егосодержания в строме.Данные исследования предприняты с целью оценки влияния площадикорнеальной деэпителизации на степень насыщения роговой оболочкиизучаемыми растворами рибофлавина и динамики его выведения из роговицы.В эксперимент in vivo последовательно включены 56 кроликов.
Эпителийудаляли на площади роговицы 3, 6 и 9 мм, отмеченной трепаном (метчиком).Насыщениерастворамиинстилляцийвтечениерибофлавина60мин.Срокпроизводилисьнаблюденийпосредствомсоответствовалпродолжительности стандартной процедуры УФ сшивания роговицы (30 мин –насыщение стромы рибофлавином и 30 мин – ультрафиолетовое воздействие с101продолжающимися периодическими инстилляциями фотосенсибилизатора). Увсех животных в течение 60 минут с интервалом в 10 минут выполняли заборпереднекамерной влаги.
Закапывания раствора изоосмотического растворарибофлавина производились из расчета 2 капли в минуту, остальныепрепараты – по 1 капле каждые 2 мин. Распределение животных указано втаблице 12.Таблица 12 - Распределение животных в группахДиаметр деэпителизации роговицыРаствор для УФ сшивания роговицы3 мм6 мм9 ммИзоосмотический рибофлавин (n=15)ИР-3ИР-6ИР-9Декстралинк (n=15)Д-3Д-6Д-9Риболинк (n=15)Р-3Р-6Р-9Хитолинк (n=15)Х-3Х-6Х-9При инстилляциях изоосмотического рибофлавина (ИР) была выявленапрямая зависимость роста содержания фотосенсибилизатора в ВПК во всехисследуемых группах в первые 40 мин наблюдений, причем на 20-50 мин онадостоверно отличалась от таковой на 5 мин (р<0,05). Максимальные значениявитамина В2 в группе ИР-3 наблюдались на 50 мин, тогда как придеэпителизации в 6 мм (группа ИР-6) и 9 мм (группа ИР-9) – на 30 - 40 миннасыщенияроговицы(Таблица13).60-яминвовсехгруппахИРхарактеризовалась незначительным падением концентрации рибофлавина.Очевидно, что на уровень витамина В 2 во ВПК в исследуемых группах влиялаплощадь деэпителизации: отмечена статистически достоверная разница вконцентрации фотосенсибилизатора в группе ИР-3 по сравнению с таковыми вгруппах ИР-6 и ИР-9.102Таблица 13 - Концентрация рибофлавина во влаге передней камеры глаза кроликаin vivo после насыщения роговицы офтальмологическими растворами для УФсшивания в зависимости от площади деэпителизации (мкг/л, M±σ)Растворы с 0,1% рибофлавиномВремяПлощадьнасыщения деэпителизации Изоосмотический Декстралинк(мин)РиболинкХитолинк34(диаметр, мм)(контроль)3190±12,587,5±7,5*155±8,2140±6,86310±15,0120±11,7*370±19,9▲▲320±13,19405±22,0155±8,9*545±37,5▲▲425±29,4▲3350±16,1100±9,7**335±12,7▲▲320±12,8▲6477,5±21,5135±10,5**9492,5±31,5277,5±14,6*550±28,2▲▲510±24,1▲▲3375±19,2190±12,1*340±10,8▲335±14,5▲6580±26,2195±16,4*550±28,6▲▲520±21,1▲▲9605±26,2355±21,2*607,5±34,5▲▲ 585,5±29,8▲3415±23,5255±18,1*467,5±22,3▲▲420±24,2▲6610±27,2280±19,6*587,5±38,9▲▲535±31,3▲9620±24,0385±26,1*665±28,0▲▲610,5±30,4▲3442±26,8392,5±23,4440±20,4475,5±16,26570±21,5405±28,1*630±36,4▲605±25,5▲9625±19,9450±31,3*675±31,5▲640±28,1▲3520±31,5410±21,2575±34,7▲525,5±30,6▲6542,5±17,2425±23,9*650±35,2▲620±31,5▲9585±21,1492,5±35,5700±45,9▲670±34,3▲3435±19,5425±20,5495±31,2535±38,5▲6440±18,4435±31,5660±40,1▲640,5±37,6▲9570±20,5477,5±31,0780±42,2▲695±35,2▲510203040506012522,5±33,7▲▲ 457,5±19,2▲▲* р<0,05; ** р<0,01– достоверность различий показателя при сравнении с контролем.▲р<0,05; ▲▲ р<0,01 – достоверность различий при сравнении с показателями Декстралинк.На 30-ой мин от начала инстилляций, когда в соответствии со стандартнымпротоколомсшиванияроговицыпредусмотренэтапУФвоздействия,103концентрация витамина В 2 в ВПК в группах ИР-6 и -9 находилась на одномуровне – 610-620 мкг/л, тогда как в группе ИР-3 содержание рибофлавинабыло на 23% ниже (р<0,05).ПрименениепрепаратаДекстралинкдлянасыщенияроговицыхарактеризовалось постепенным ростом содержания рибофлавина в ВПК смаксимальными значениями на 50-60 мин эксперимента во всех исследуемыхгруппах(Д-3,Д-6иД-9).Однакоабсолютныезначенияуровняфотосенсибилизатора в соответствующие дискретные интервалы времениимели более низкие значения при всех вариантах удаления эпителия, всравнении с инстилляциями ИР.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
