Диссертация (1173246), страница 20
Текст из файла (страница 20)
3)После направленной контактной диатермии (рис.1214) во всех образцах в собственной пластинке слизистой оболочки влагалища обнаружены множественные эластические волокна, образующие многочисленныесеточки и имеющие змеевидный ход. Индекс васкуляризации умеренный, выявлены кровеносные сосуды с признаками пролиферации эндотелия. По сравнениюс образцами, взятыми до терапии, основное вещество стало более компактным, агладкие миоциты расположились упорядоченными пучками, вокруг которых регулярно встречались эластические волокна.Рисунок 4 — Стенка влагалища. Окраска: гематоксилин и эозином, увелич.×200По результатам специфической гистохимической реакции на аморфный иволокнистый компоненты основного вещества (по Ван-Гизону, Массону) в биоптатах стенки влагалища до, после диатермического лечения и в контрольнойгруппе также были обнаружены явные различия (рис.
5). В образцах, взятых докурса контактной диатермии (рис. 5А), отмечено преобладание коллагеновыхпротофибрилл и коллагеновых волокон с незначительным количеством разобщенных эластических волокон, число которых возросло значительно после тера122пии (4,8 ± 0,1% против 11,7 ± 0,3%, р < 0,05), при этом число эластических волокон у женщин без НМТД составило 13,0% ± 0,2%. В части образцов до леченияобращало на себя внимание практически полное отсутствие эластического каркаса в стромальных структурах влагалищной стенки, исключения составляли тольковнутренние оболочки кровеносных сосудов.
В биоптатах, взятых у обследованныхженщин после лечения (рис. 5Б), мы выявили, напротив, преобладание тонковолокнистых и эластических структур (9,2 ± 0,2%, р< 0,05 при сравнении с результатами до терапии), при этом в группе морфологического контроля количествотаких структур составило 10,3 ± 0,3%.баРисунок 5 — Стенка влагалища.Окраска: по Массону, увелич.
×200. а — I группа, б — II группаПо результатам ИГХ исследования биоптатов тканей, взятых как до, так ипосле лечения, нами была выявлена иммунопозитивную реакцию на антитела кколлагену III и I типов, однако прослеживалась достоверная разница в степени ихиммунореактивности и распределения в стенке влагалища (рис. 6). Согласно данным морфометрии в образцах, взятых до терапии (рис. 6А), антитела и иммунопозитивные компоненты к коллагену I типа в основном веществе собственной пластинки и в клетках фибробластического ряда отличались умеренной реакцией,оцененной в 2 балла.123После курса терапии позитивная реакция была существенно интенсивнее(рис. 6Б), что позволило оценить её показатель иммунореактивности в 3 балла.Этот результат подтвержден и компьютерной морфометрией: площадь активногосвечения коллагена I типа, равная до лечения 22,1 ± 1,7%, увеличилась в 2,4 раза— до 54,2 ± 2,4% (р < 0,05), при этом площадь активного свечения коллагена I типа в группе морфологического контроля составила 65,4% ± 1,5%.В ходе исследования был получен обратный корреляционный результат приоценке иммунопозитивной экспрессии на антитела к коллагену III типа (рис.
7).До воздействия направленной диатермии на ткани влагалища и промежности интенсивность иммунореактивности к «молодому» коллагену III типа была оцененав 3 балла (рис. 7А), после лечения происходило значительное уменьшение интенсивности его свечения — до умеренной реакции, оцененной в 2 балла (рис. 7Б).баРисунок 6 — Стенка влагалища.
ИГХ-метод с антителами к collagen I, докрашивание — гематоксилином, увелич. ×200. а — I группа, б — II группа124абРисунок 7 — Стенка влагалища. ИГХ-метод с антителами к collagen III, докрашивание — гематоксилином, увелич. × 200. а — I группа, б — II группаРезультаты компьютерной морфометрии объективизировали визуальнуюоценку, продемонстрировав уменьшение площади активного свечения с 44,5 ±0,3% до лечения до 27,5 ± 0,7% после курса терапии (p < 0,05), а в группе морфологического контроля площадь положительной реакции составила 20,3% ± 0,4%*.В образцах тканей соотношение количества коллагена I типа и III типа до лечениясоставляло 0,5, а после применения контактной диатермии — 2,0. Эти результатыговорят об на активации пластических процессов соединительно-тканного волокнистого компонента влагалищной стенки на фоне проведенной терапии.
Помимоколлагеновых структур, в образцах тканей изучению подверглась иммунореактивность гладкомышечных клеток (рис. 8).*Оразов М.Р., Демяшкин Г.А., Кампос Е. и соавт. Ультраструктурные характеристики тканей тазового днакак патогенетическое обоснование применения направленной контактной диатермии при пролапсе тазовых органов. Доктор.ру.
Гинекология. Эндокринология, 2017. № 8. С.40-47125абРисунок 8 — Стенка влагалища. ИГХ-метод с антителами к SMA, докрашивание — гематоксилином, увелич. ×200. а — I группа, б — II группаИммунопозитивные гладкие миоциты с сильной реакцией на антитела к αSMA, оцененной в 3 балла, определялись в образцах как до (53,7 ± 2,7%), так ипосле терапии (63,7 ± 3,1%), а в образцах морфологического контроля обнаружены в количестве 68,2 ± 2,1%. Важно, что на первый взгляд незначительные, ностатистически значимые изменения (р <0,05) были подтверждены очевидной разной организацией мышечных волокон в изученных препаратах.
Если до курса лечения наблюдалась значительная дезорганизация гладкомышечных клеток, деформированных в ходе разрастания соединительной ткани, что, по-видимому,обусловлено нарушением всей архитектоники мышечной оболочки влагалищнойстенки при НМТД, то после лечения нами была выявлена типичная локализациягладких миоцитов стенки влагалища с компактной организацией, умеренным ихраспределением, и отчетливыми циркулярными и продольными слоями.Интересные результаты дал анализ экспрессии генов методом ПЦР-РВ. Приоценке экспрессии генов матриксных металлопротеиназ, а также их ингибиторовпосредством измерения количества мРНК соответствующих генов в маткриалестенок влагалища до и после лечения найдены статистически значимые различиямежду исследованными образцами (Таблица 76).126Таблица 76 — Относительная экспрессия генов при недостаточности тазового днадо и после терапии, у.е.
± SEMГеныДо терапииПосле терапииКонтрольMMP-11,85 ± 0,171,15 ± 0,11*0,93 ± 0,12*MMP-2MMP-3MMP-9TIMP-1TIMP-4PDGF-βTNXB2,10 ± 0,192,89 ± 0,211,94 ± 0,140,61 ± 0,050,45 ± 0,040,61 ± 0,131,62 ± 0,141,27 ± 0,13*1,77 ± 0,15*1,24 ± 0,17*1,13 ± 0,12*0,41 ± 0,050,29 ± 0,02*1,11 ± 0,09*1,2 ± 0,09*,1,45 ± 0,15*,1,1 ± 0,02*,1,34 ± 0,17*,1,24 ± 0,05*,0,20 ± 0,02*,1,05 ± 0,09*,Примечание: * статистически значимое различие (p < 0,05)Также статистически значимые различия относительной экспрессии геновбыли выявлены и для PDGF-β, тенасцина X, кодируемого геном TNXB.
Экспрессия генов TIMP-1, MMP-1, MMP-2, MMP-3, MMP-9, TNXB и PDGF-β в биоптатахстенок влагалища до лечения была статистически значимо больше таковой вгруппе морфологического контроля и после курса направленной контактной диатермии.Экспрессия генов всех изученных металлопротеиназ статистически значимоуменьшилась после проведенного лечения — в 1,50–1,65 раза*.
Наиболее яркимоказалось уменьшение экспрессии MMP-2 и MMP-3. Логичным на этом фоне оказалось увеличение экспрессии генов-кодировщиков ингибиторов металлопротеиназ. Статистически значимо возросла (в 1,8 раза) экспрессия TIMP-1, однако осталась неизменной после проведенной терапии таковая TIMP-4.Согласно результатам, экспрессия каспаз 3 и 9, которые могли бы говоритьоб интенсивности апоптоза в ремоделируемых по причине недостаточности тка*TR-therapy in case of inconsistency of the pelvic floor / M. Orazov, V.
Radzinskiy, E.Kampos, E.Silantyeva [et al.] // International Journal of Pharmaceutical Research. – 2019. – Vol. 11. №3. – p. 1007-1010.127нях тазового дна, к нашему удивлению, она статистически значимо не измениласьи не даже не превысила уровень фона. После лечения экспрессия генакодировщика фактора ангиогенеза PDGF-β, снизилась в 1,8 раз, а экспрессия генакодировщика TNXB, кодирующего гликопротеин ЭЦМ тенасцин X, — в 1,5 раза(p < 0,05 для обоих показателей), что явилось интересной исследовательской находкой, требующей обсуждения. Полученные в ходе исследования результаты позволяют дополнить современное представление о патогенезе НМТД и определитьважные ультраструктурные механизмы, связывающие изменения на молекулярном уровне и развитие нарушений архитектоники тазового дна и расположенияорганов малого таза на макроуровне при НМТД.
Нами было продемонстрировано,что у женщин с недостаточностью тазового дна существуют стойкие морфологические изменения в структурах задней и передней стенок влагалища с характерным нарушением архитектоники мышечной оболочки, что, по-видимому, вызванометаболическими повреждениями ЭЦМ.Ключевыми особенностями гисто-биохимической картины стенки влагалища при НМТД стали: неравномерные границы эпителия с рыхлым, отечным ЭЦМ,содержащим большое количество фибробластов и тучных клеток; множествополнокровных сосудов и соответствующее этому увеличение экспрессии генаPDGF-β, отвечающего за производство тромбоцитарного фактора роста сосудов;нарушение архитектоники гладкомышечных клеток, их дезорганизация, разобщение, общее снижение абсолютного числа; незначительное количество эластических волокон вплоть до их отсутствия; коллагенизация рыхлой волокнистой соединительной ткани, большое число протофибрилл с недостатком коллагеновыхволокон I типа и избыточным количеством коллагена III типа; большая активность металлопротеиназ (деградация коллагеновых молекул и других белковЭЦМ) на фоне низкой экспрессии такого их ингибитора, как TIMP-1; умеренноеувеличение по сравнению с нормой синтеза гликопротеина тенасцина X во ЭЦМ.Все эти факты не противоречат друг другу и создают единую картину патогенеза,отражающую деградацию тканей тазового дна, растягиваемых при НМТД.
Из128вестно, что под действием какого-либо повреждающего фактора на клетки и ткани организма, в том числе и на органы и поддерживащие структуры малого таза,первично, в ответ на избыточное механическое воздействие, будет развиватьсяиндуцированный окислительный стресс, о чем говорится в ряде недавних исследований [76].Возникает предположение, что в процессе оксидативного стресса под действием образующихся активных форм кислорода в клетках фибробластическогоряда возникает нарушение метаболизма эластина и коллагенов — типичный патофизиологический механизм.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
