Диссертация (1155054), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Со сравнением ИК-спектр стандартного образца, в полученном ИКспектре (рис. 3.1) видно, что взаимодействие действующего вещества - VCR совспомогательным веществом отсутствует. Лактоза не мешает определению ТИАв лекарственных формах методом ИКС.Таким образом, установлена подлинность исследуемых препаратов VCR и93VLB в готовых лекарственных формах в виде лиофилизата.3.2. УФ-спектральные характеристики исследуемых VCR и VLB в различных растворителяхХимически чистые VCR сульфат и VLB сульфат имеют характерные пикипоглощения в УФ-области при определенных длинах волн. Британская, Японская и др. фармакопеи утверждают, что VCR сульфат имеет 3 характерных пика(λ max – (222, 256, 298 ±2 нм ) и VLB сульфат имеет два характерных пика (λ max –214, 266 ±2 нм) поглощения в УФ-спектре в метаноле (B.Ph.
2105; J.Ph XVII ст.2219-20).В данном эксперименте для изучения спектральных характеристик ТИА вкачестве растворителя применяли очищенную свежеприготовленную воду; 0,1 МNaOH; 0,1 М HCl; фосфатный буфер (pH-5); этанол 95%; хлороформ.Для изучения спектральных характеристик VCR и VLB были сняты спектры поглощения в ультрафиолетовой области (200-320 нм) стандартных растворов с концентрацией 25 мкг/мл, приготовленных в выше указанных растворителях на спектрофотометре Hitachi Ratio Beam Spectrophotometer U-1900 (Япония)в кюветах с толщиной рабочего слоя 1,0 см при 20 0С.
Полученные спектры иданные представлены на рис. 3.2 и в приложении Б в таблицах 1 и 2.Установлено, что максимумы поглощения λ(max) для водного раствора VCRсульфата находились при 295 ± 1 нм, 254 ± 1 нм и 219 ±1 нм. Для водного раствора VLB сульфата – при 268 ± 1 нм, 214 ± 1 нм соответственно. Из данных,представленных в приложении Б (таблицы 2, 3 и рис. 3.2) видно, что в разныхрастворителях максимумы поглощения VCR и VLB изменяются по сравнению сλ(max) в метаноле (растворитель, который применяют в B.Ph.8; J.Ph. XVII).Это потверждает, что полярность растворителя и pH среды могут влиять наэлектронный переход молекулы при поглощении энергии электромагнитного излучения. Например, полярность растворителя может влиять на π----> π*, n----> π*электронные переходы, в кислой среде могут исчезать n----> π* электронные переходы.
Гиперхромный эффект наблюдается в 95% этаноле у VCR при 297 нм и94VLB при 265 нм по сравнению с максимумом поглощением в воде очищеннойпри 295 нм и 268 нм соответственно (рис.3.3, 3.4).Рис. 3.2. УФ-спектры поглощения VCR сульфата и VLB сульфата в различныхрастворителях (концентрация исследуемых растворов - 25 мкг/мл)32,752,52,2521,751,51,2510,750,50,250Abs195 205 215 225 235 245 255 265 275 285 295 305 315 325нмРис. 3.3.
УФ-спектр раствора VCR сульфата в воде очищенной (40 мкг/мл)952,42,221,81,61,41,210,80,60,40,20Abнм195 205 215 225 235 245 255 265 275 285 295 305 315 325 335Рис. 3.4. УФ-спектр раствора VLB сульфата в воде очищенной (40 мкг/мл)Таким образом, в качестве оптимального растворителя для разработки методики количественного определения была выбрана вода очищенная, как наиболее дешевый, безопасный и доступный растворитель. Длины волн в максимумахпоглощения λ(max) в водном растворе при 295 нм для VCR и 268 нм для VLB быливыбраны для дальнейшей разработки методики количественного определения.3.3. Разработка методики количественного определения ТИА препаратовVCR и VLBРазработка спектрофотометрической методики количественного определенияисследуемой субстанции в лекарственной форме включала в себя решение рядазадач:1.
Изучение спектра основного вещества (VCR и VLB) в воде очищенной,определение максимумов поглощения и их интенсивности, выбор рабочей длиныволны (раздел 3.2);2. Определение аналитических пределов обнаружения, при которых наблюдается линейная зависимость оптический плотности от концентрации вещества ссоблюдением закона Бугера-Ламберта-Бера;3. Определение аналитической области исследуемых препаратов, при которыхоптическая плотность находится в пределах 0,1 ~ 1,0, которые удовлетворяют закону Бугера – Ламберта – Бера с наименьшей погрешностью;964. Изучение влияния вспомогательных ингредиентов, входящих в состав готовых лекарственных форм на спектральные характеристики определяемого вещества (маннитол, лактоза);5. Изучение стабильности исследуемых веществ в стандартных растворах дляспектрофотометривания и выбор оптимальных условий измерения;6.
Установление точности разработанного аналитического метода в соответствии с критериями, описанными в ОФС.1.1.0012.15 ГФ РФ XIII издания [15;16; 26; 109].Приготовление стандартных растворовВ качестве стандартных образов применяли чистую субстанцию VCRсульфата виде порошка (производитель: Guangzhou Person Pharmaceutical Co.,Ltd (Китай), (CAS №-2068-78-2), степень чистоты 99,5%) и чистую субстанциюVLB сульфата виде порошка (производитель: Wuhan Vanzpharm Inc. (Китай;www.vanzpharm.com), (CAS №-143-67-9) степень чистоты 99,5%).Приготовление стандартного раствора VCR сульфата (раствор А – из чистойсубстанции). 5,0 мг (точная навеска) порошка VCR сульфата (99,5%) аккуратноперемещали в мерную колбу объёмом 50 мл и разводили свежеприготовленнойводой очищенной до метки при комнатной температуре (20 0С), получали раствор А(VCR) с концентрацией 100 мкг/мл.Для приготовления стандартного раствора VCR сульфата (раствор А - ГЛФ)применяли «Винкристин-Рихтер» 1,0 мг лиофилизат для внутривенного введения, который содержит в составе лиофилизата: 100% активное вещество VCRсульфата 1,0 мг (в пересчете на безводное вещество) и вспомогательное вещество - лактоза.
Cодержимое 5 флаконов (точная навеска) аккуратно перемещалив мерную колбу объёмом 50 мл и разводили водой очищенной до метки прикомнатной температуре (20 0С), получали раствор А(VCR) с концентрацией 100мкг/мл.Приготовления стандартного раствора VLB сульфата (раствор А - чистая субстанция). 5,0 мг (точная навеска) порошка VLB сульфата (99,5%) аккуратно пе97ремещали в мерную колбу объёмом 50 мл и разводили свежеприготовленной водой очищенной до метки при комнатной температуре (20 0С), получали растворА(VLB) с концентрацией 100 мкг/мл.Для приготовления стандартного раствора VLB сульфата (раствор А-ГЛФ)применяли «Винбластин-ЛЭНС» 5 мг лиофилизат для приготовления растворадля внутривенного введения.
В составе 1 флакона содержится: 5,0 мг активноговещества VLB сульфат (в пересчете на безводное вещество). 5,0 мг лиофилизатаVLB (точная навеска) аккуратно перемещали в мерную колбу объёмом 50 мл иразводили водой очищенной до метки при комнатной температуре (20 0С), получали раствор А(VLB) с концентрацией 100 мкг/мл.Стандартные растворы хранили в темной склянке в холодильнике при +40С до времени использования (не более 10 суток).3.3.1. Определение аналитических пределов обнаруженияПри установлении аналитических пределов, которые удовлетворят законуБугера – Ламберта – Бера с наименьшей погрешностью, выбрали те концентрации анализатов, которые имели значение оптической плотности при выбраннойаналитической длине волны в пределе 0,1 ~ 1,0. Для исследования аналитической области готовили ряд рабочих растворов (раствор Б- ГЛФ) из стандартногораствора (раствор А-ГЛФ), концентрация которых составляла 250 мкг/мл, 100мкг/мл, 50 мкг/мл, 20 мкг/мл, 10 мкг/мл, 5 мкг/мл и 1 мкг/мл.
Оптическую плотность полученных растворов измеряли на приборе Hitachi Ratio BeamSpectrophotometer U-1900 в кварцевых кюветах толшиной 10 мм при комнатнойтемпературе (20 0С) и сканирующей скорости 400 нм/мин с выборочным интервалом 0,5 нм при чувствительности 1 с пороговой величиной 0,01 относительноводы очищенной. Полученные результаты представлены в таблице 3.2.В полученных результатах показано, что показатель оптической плотностиу растворов с концентрацей от 5 до 50 мкг/мл находится в пределе 0,1~ 1,0. Наоснове результатов в качестве оптимальной аналитической области для количе-98ственного определения выбрали интервал концентраций растворов Б от 5 мкг/млдо 50 мкг/мл.Таблица 3.2.
Значение оптической плотности растворов VCR и VLB при определении аналитического диапазонаКонцентрацияVCR sulfate Abs λ 295 nmVLB sulfate Abs λ 268 nmРаствора Б (мкг/мл)2503,253 ± 0,0043,268 ± 0,0031001,568 ± 0,0031,859 ± 0,002500,987 ± 0,0020,970 ± 0,002200,400 ± 0,0010,398 ± 0,001100,274 ± 0,0010,202 ± 0,00150,104 ± 0,0010,102 ± 0,00110,038 ± 0,0020,039 ± 0,002* Общее количество выборок (N) – 21. Все значения Abs представляют среднее значения ± SDДля разработки более достоверного аналитического метода изучали характеристики оптической плотности растворов VCR сульфата и VLB сульфата впределе аналитической области методики, которые были приготовленны из ГЛФи чистой субстанции.
Для экасперимента готовили ряды рабочих растворов изстандартных растворов (раствор А - чистая субстанция) и (раствор А - ГЛФ),концентрация которых составляла от 5 до 50 мкг/мл. Оптическую плотность полученных растворов измеряли, как описно выше. Полученные результаты представлены в таблице 3.3.Таблица 3.3. Значение оптической плотности растворов VCR и VLB в диапазоне аналитической области методикиКонцентрацияраствора Б(мкг/мл)VLB sulfate– ГЛФAbs λ 268 nm*VLB sulfate – чистаясубстанция (99,5%)Abs λ 268 nm*VCR sulfate– ГЛФAbs λ 295 nm*VCR sulfate – чистаясубстанция (99,5%)Abs λ 295 nm*51015202530354045500,105 ± 0,0010,200 ± 0,0010,298 ± 0,0010,403 ± 0,0010,498 ± 0,0010,593 ± 0,0010,681 ± 0,0010,782 ± 0,0020,874 ± 0,0040,971 ± 0,0020,106 ± 0,0010,203 ± 0,0010,299 ± 0,0020,404 ± 0,0030,501 ± 0,0010,595 ± 0,0010,684 ± 0,0030,790 ± 0,0030,880 ± 0,0040,976 ± 0,0030,109 ± 0,0020,208 ± 0,0010,304 ± 0,0010,405 ± 0,0010,502 ± 0,0010,588 ± 0,0020,694 ± 0,0010,803 ± 0,0020,893 ± 0,0010,984 ± 0,0050,110 ± 0,0020,210 ± 0,0020,307 ± 0,0020,408 ± 0,0020,503 ± 0,0010,592 ± 0,0010,698 ± 0,0050,807 ± 0,0050,898 ± 0,0050,989 ± 0,003n-3 ; *- Abs (ср.
знач.) ± - SDВ полученных результатах видно, что показатель оптической плотности урастворов с концентрацией от 5 до 50 мкг/мл, приготовленных из ГЛФ, имеет99очень близкие значения по сравнению с растворами, приготовленными из чистых субстанций VCR сульфата и VLB сульфата. Рассчитанные отклонения оптической плотности растворов, приготовленных из ГЛФ, от растворов, приготовленных из чистых субстанций, представлены в таблице 3.4.Таблица 3.4. Отклонение оптической плотности растворов VCR и VLB, приготовленных из ГЛФ и из чистой субстанцииVLB sulfate – чистаясубстанция (99,5%)Abs λ 268 nm0,1060,2030,2990,4040,5010,5950,6840,7900,8800,976Уравнение регрессиилинейной зависимостиVCR sulfate – чистаясубстанция (99,5%)Abs λ 295 nm0,1100,2100,3070,4080,5030,5920,6980,8070,8980,989Уравнения регрессии линейной зависимостиVLB сульфатVLB sulfate Отклонение Отклонение– ГЛФAbsAbsAbs λ 268 nm(%)0,1050,2000,2980,4030,4960,5930,6810,7820,8740,9710,0010,0030,0010,0010,0050,0020,0030,0080,0060,0050,941,480,330,251,201,331,021,010,680,51y = 0,0193x + 0,0113VCR сульфатVCR sulfate Отклонение Отклонение– ГЛФAbsAbsAbs λ 295 nm(%)0,1090,2080,3040,4050,4980,5880,6940,8030,8930,9840,0010,0020,0030,0030,0050,0040,0040,0040,0050,005МетрологическиеХарактеристики.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
