Диссертация (1154700), страница 3
Текст из файла (страница 3)
Праймеры были синтезированы в компании «Евроген». Списокпраймеров, синтезированных для проведения ПЦР:WIF1 -M13F5’- gttttcccagtcacgacGAGTGATGTTTTAGGGGTTT -3’13WIF1 -M13R5’- ggaacagctatgaccatgCCTAAATACCAAAAAACCTAC -3’ESR1α-M13F5’- gttttcccagtcacgacTTTTATTGTATTAGATTTAA -3’ESR1α-M13R5’- ggaacagctatgaccatgCCAAATAATAAAACACCTACTAACC -3’PR-B-M13F5’- gttttcccagtcacgacGGGGAGTTTTTTAAGAGAGTTTTTTAA -3’PgR-B-M13R5’- ggaacagctatgaccatgCATTCTCAATAAAAACTAACTTCACTTATCA -3’Секвенирование проводили в центре коллективного пользования “ГЕНОМ”на базе Института молекулярной биологии им. В.А. Энгельгардта РАН постандартному протоколу с использованием прямых праймеров и набора реактивовABI PRISM® BigDye™ Terminator v.
3.1.Статистическийанализрезультатовсеквенированияпроводилисиспользованием программного обеспечения DNA Sequencing Analysis Softwareверсии 5.1 и ресурса QUMA: quantification tool for methylation analysis [167].Уровень ДНК-метилирования оценивали качественно (наличие/отсутствие).Положение сайтов метилирования на приведенных рисунках отмечали числами,которые соответствуют положению цитозина в паре CpG, считая от началасинтезированного участка ДНК.Положения, выносимые на защиту:1.
Математическое прогнозирование служит эффективным инструментомстратификации пациенток, перенесших миомэктомию в репродуктивном возрасте,по группам риска рецидива миомы матки. Предикторами рецидива(р<0,05)являются: клинические проявления; наличие миомы матки в семейном анамнезе;сахарный диабет; хронический стресс и склонность к неврозам; нереализованноеили позднее деторождение; хронические воспалительные заболевания органовмалого таза; ожирение; выскабливания слизистой полости матки в анамнезе;курение; нарушения в интранодулярном кровотоке при допплерометрии; ДНК-14метилирование гена эстрогенового рецептора ERS1; ДНК-метилирование генапрогестеронового рецептора PRB; ДНК-метилирование гена WNT-ингибирующегофактора-1 (WIF1).2.
Эпигенетическими детерминантами миомы матки следует рассматриватьДНК- метилирование генов ERS1, PRB, WIF1, отсутствующее в ткани интактногомиометрия. Характер ДНК-метилирования зависит от гистологического вариантамиомы матки. Гены ERS1 и PRB характеризуются гипометилированием, болеевыраженным при пролиферативной миоме, что может быть расценено как вариант«пролиферативного покоя». При этом в опухолевой ткани преобладают рецепторыкпрогестерону.ДлягенаWIF1вопухолевойтканихарактерногиперметилирование. Частота аномального ДНК-метилирования гена WIF1возрастает в ряду «простая миома—пролиферативная миома», что позволяетсчитать его значимым маркером и возможным триггером ранних стадийпролиферативных изменений при миоме матки.3.
Миома матки является WNT-зависимой опухолью. Гиперметилированныйген WNT-ингибирующего фактора-1 (WIF1) не способен блокировать WNT-каскад,отвечающий за передачу пролиферативного сигнала. Когда он становитсяактивным, происходит запуск «пролиферативной» ветви этого пути: чем большечисло митозов в опухоли, тем выше ДНК-метилирование гена WIF1.4. Разработанный алгоритм лечебно-диагностических мероприятий уженщинрепродуктивноговозраста,перенесшихмиомэктомию,позволяетперсонализировать тактику ведения пациентки с учетом ее фертильных планов ириска рецидива заболевания, оценить который позволяет математическая модельиндивидуального прогноза с использованием эпигенетических детерминант миомыматки.Степеньдостоверностииапробациярезультатовработы.Длястатистической обработки массива данных использовались статистическиепрограммы Microsoft Excel 2007 (Microsoft Corp., США), Statistica 6.0 (Stat Soft Inc.,США).Для определения достоверности непараметрических количественных данных15использовалсякритерийМанна-Уитни,дляопределениядостоверностиколичественных нормально распределенных данных - критерий Стьюдента.
Методранговой корреляции Спирмана использовали для сравнения количественных ипорядковых показателей.В таблицах приведены следующие сокращения: М – среднее значение, m –среднеквадратичное отклонение, n – объем анализируемой подгруппы, р –вычисленный уровень значимости. За критическое значение уровня значимостипринимали р<0,05.С помощью метода Katz рассчитан относительный риск (ОР) развитияагрессивного течения миомы матки на основании клинико-анамнестическихданных:анамнеза,нарушенийменструальнойфункции,перенесенныхгинекологических и экстрагенитальных заболеваний, УЗИ с допплерометрией,данныхиммуногистохимических,гистологическихиэпигенетическихисследований.Для того, чтобы исследовать корреляцию нескольких независимыхпеременных и одной зависимой, применялся метод бинарной логистическойрегрессии.
При этом преимуществом данного метода является то, что независимыепеременные могут иметь любой вид шкалы (количественные, порядковые,дихотомические). Группе пациенток с пролиферативной миомой присвоенакодировка 1, а с простой миомой матки — 0.Вероятность наступления события (быстрый рост миомы матки) длянекоторого случая (конкретной пациентки) рассчитывается по известной формулегде “z=b1*X1 + b2хХ2+ ...+ bnxXn+ a”, при этомX1 представляет значения независимых переменных,b1 – это результаты бинарной логистической регрессии,а - свободный коэффициент,е - 2,71828182845904 (натуральный логарифм)16С помощью последовательного включения в модель в первую очередьнаиболее существенных факторов, выявленных с помощью однофакторныхметодов (корреляционного анализа, выявления показателей и перебора оставшихсяпеременных — прямая модель построения) нами была выбрана комбинацияпеременных, чтобы построенная модель была достоверной (р<0,05) и компоненты,входящие в нее, были независимыми между собой и также достоверными (р<0,05).В полученной в результате построения уравнения бинарной логистическойрегрессиивклассификационнойтаблиценаблюдаемыепоказателипринадлежности к группе (1=пролиферативная миома, 0=простая миома)противопоставляются предсказанным (р) на основе рассчитанной модели.Принимается принадлежность к группе с негативным прогнозом (пролиферативнаямиома) — при р>0,5, а принадлежность к группе с положительным прогнозом —при р<0,5.Бинарная регрессионная модель, с одной стороны, позволяет нам выделитьнаиболее важные факторы, влияющие на ухудшение тяжести заболевания, а сдругой — позволяет прогнозировать у конкретной пациентки вероятность развитияболее «худшего» или «лучшего» прогноза.ДляанализаиспользовалиопределениемклиническойReceiverOperatingинформативностиCharacteristicчувствительности,клиническихanalysisспецифичности,тестов(ROC-анализ)правдоподобиясидиагностического порога.
При этом за «чувствительность» принята вероятность«положительного результата исследуемого диагностического теста» при наличииболезни, а за «специфичность» принята вероятность отрицательного результататеста при отсутствии болезни.Экспериментысоответствовалиэтическимстандартам биоэтическогокомитета НИИМБиБ СО РАМН, Хельсинкской декларации «Этические принципыпроведения научных медицинских исследований с участием человека», «Правилклинической практики в РФ».Апробация диссертации состоялась на заседании кафедры акушерства игинекологии с курсом перинатологии медицинского факультета Медицинского17института Российского университета дружбы народов 27 июня 2017 года.Основные положения работы доложены и обсуждены на II Всероссийскомсеминаре «Репродуктивный потенциал России: версии и контраверсии. Московскиечтения» (14–16 апреля 2016 г., Москва); IV научно-практической конференции смеждународным участием «РЭМ-2016.
Рак, эндометриоз, миома. Пролапсгениталий» (20–21 октября 2016 г., Нижний Новгород), «17th World Congress onHuman Reproduction» (15–18 марта 2017, Рим, Италия), «25th World Congress onControversies in Obstetrics, Gynecology & Infertility (COGI)» (30 ноября–2 декабря2017, Вена, Австрия), «25th World Congress on Controversies in Obstetrics, Gynecology& Infertility (COGI)» (30 ноября–2 декабря 2017, Вена, Австрия).Участие автора в сборе и обработке материала — более 90%, резюмированиии анализе результатов работы — 90%. Научные выводы, положения диссертацииполучены автором лично.По результатам исследования опубликовано 8 печатных работ, из них 5 — врецензируемых изданиях, рекомендуемых Высшей аттестационной комиссиейРоссийской Федерации.18ГЛАВА 1.
СОВРЕМЕННЫЕ АСПЕКТЫ ЭТИОЛОГИИ И ПАТОГЕНЕЗАМИОМЫ МАТКИ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)Миома матки — моноклональная гормоночувствительная доброкачественнаяопухоль неизвестной этиологии, происходящая из фенотипически измененныхгладкомышечных клеток и соединительнотканной стромы миометрия [224]. Вмировой литературе это заболевание обозначается различными терминами:лейомиофиброма, фиброид, фибролейомиома, фибромиома, миофиброма и миома.Миома матки — самое частое гинекологическое заболевание у женщинрепродуктивного возраста, с частотой, по разным данным, до 25% [40]. По даннымнекоторых авторов, миома встречается у 25% женщин старше 35 лет [75, 84].
Приэтом сложно определить истинную распространенность заболевания в силу того,что лейомиома часто протекает бессимптомно и только у 20% пациентокзаболевание клинически проявляется болью в области малого таза, дисменорреей,меноррагией, анемией, бесплодием, дефектом имплантации эмбриона [40, 147].Большинствотакихмоноклональныхгормонозависимыхматочныхнеоформаций диагностируют у 60% женщин репродуктивного возраста и у 80%женщин в течение жизни [172]. По данным Вихляевой Е.М., миому матки впервыевыявляют в возрасте 32–33 лет [20]. В зависимости от возраста заболеваемостьизменяется следующим образом: 4% в группе от 20 до 30 лет, 11–18% в группе от30 до 40 лет, 33–40% в группе от 40 до 60 лет [116].К 50 годам около 70% представительниц европеоидной расы и более 80%представительниц негроидной расы имеют хотя бы один миоматозный узел, приэтом у 15–30% пациенток наблюдают серьезные клинические проявления [98, 147].По данным других авторов, распространенность миомы матки у женщиневропейского происхождения достигает до 70% и до 80% у женщин африканскогопроисхождения [147].
У представительниц негроидной расы миома развивается вболее молодом возрасте, имеет большие размеры, протекает тяжелее и имеет болеедлительный период роста [129, 143, 239].Существуют различные классификации миомы матки. По локализации19выделяютследующиемежмышечная),видымиомы:подбрюшиннаявнутристеночная(интрамуральная,(субсерозная), подслизистая(субмукозная),педункулярная, интралигаментарная, паразитирующая. В 1997 г.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
