Диссертация (1154338), страница 27
Текст из файла (страница 27)
В этой группе через 30 суток, определялисьтолько единичные очаговые перивазальные лимфогистиоцитарные инфильтраты.Исключительно в глубоких отделах гипертрофических рубцов определялосьочаговое набухание с гомогенизацией коллагеновых пучков. Между пучкамисформированных коллагеновых волокон определялись фиброциты (фибробластыединичные). В эпидермисе реакцией на рубцовую перестройку подлежащейсоединительной ткани был акантоз легкой степени.
Альтеративные изменения вэпителиальных клетках проявлялись вакуольной дистрофией и, как следствиеэтих изменений, повышенной пролиферативной активностью базальныхэпителиоцитов. В поверхностных отделах рубцов наблюдались единичныеконволюты тонкостенных деформированных капилляров с пролиферирующимэндотелием и многочисленные капилляры с расширенным просветом и180структурно сформированными стенками. В глубине рубца сосуды были менеемногочисленными, с широким просветом. В составе стенки – эндотелиоциты и 23 слоя гладкомышечных клеток.Результаты настоящего гистологического исследования позволили сделатьвывод о возможности целенаправленной трансформации гипертрофическихпатологических рубцов в нормотрофические под воздействием верапамила. Этовыражалось в более раннем структурном созревании сосудисто-стромальныхэлементов без гипертрофии.
Использование верапамила усиливало репаративныепроцессы, укорачивало все фазы воспаления, блокировало гипертрофию и, врезультате, приводило к преимущественному формированию физиологическихрубцов.181ГЛАВА 8ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЯПроблема избыточного образования соединительной ткани в медицинезатрагивает фактически все сферы: актуальна в клинике внутренних болезней,хирургии, комбустиологии, косметологии, офтальмологии. Почти 45% всехслучаев смерти в развитых странах мира приходится на хроническиефибропролиферативныезаболевания[561].Частнымслучаемфибропролиферативных состояний являются послеоперационные спайки игипертрофические/келоидныерубцы[478,570].У55—70 % пациентов после абдоминального хирургического вмешательства в брюшной полости развивается спаечный процесс, способный привести к такомугрозному осложнению, как острая спаечная кишечная непроходимость [34,230].
После гинекологических операций внутрибрюшинные спайки формируютсяу55-100%пациентов[444,558].Распространенностьгипертрофических/келоидных рубцов после ожогов составляет около 67% [302].Спаечный процесс, появление патологических рубцов после хирургическихопераций и ожогов продолжают оставаться одной из сложнейших и нерешенныхпроблем медицины, и даже при наличии многочисленных исследований,патогенезспайкообразования,келоидныхигипертрофическихрубцов182недостаточно изучен, а поэтому терапия мало эффективна [230, 234, 236].Несмотря на изобилие предложенных к настоящему времени средств ирекомендаций для предотвращения послеоперационного спайкообразования,надежного и действенного средства пока не найдено [150].
Большинствоприменяемыхвнастоящеевремяметодовпрофилактикиспайко-ирубцовообразования недостаточно эффективны [143, 155, 234, 364, 540].Прогресс современной фармакологии и клинической медицины во многомопределяется как открытием новых биологически активных веществ, так ирасширением возможностей и перспектив применения хорошо известных ипопулярных лекарственных средств [71, 145]. Разработка и внедрение впрактическое здравоохранение новых лекарственных средств является одной изактуальных и приоритетных задач [81].
Процесс разработки новых препаратов,начиная с момента поиска перспективных биологически активных соединений изаканчивая клинической апробацией является длительным, сложным и требуетпривлечения значительных ресурсов [170]. Поиск новых областей использованияуже применяемых лекарственных препаратов имеет ряд преимуществ передвнедрением новых органических соединений: определены физико-химическиесвойства, изучены метаболические превращения и пути элиминации из организма,известна острая и хроническая токсичность, эмбриотоксичность, отрицательныепобочные эффекты и пути их снижения. Все вышеперечисленное делает областьизучения новых фармакологических свойств известных препаратов чрезвычайнопривлекательным и экономически выгодным [195].Обнаружено, что широко используемые в кардиологической практикеБМККобладаютгораздоболееширокимспектромдействия,нежелипредполагалось раньше.
У БМКК описаны фармакологические эффекты,реализуемые модификацией избыточного роста соединительной ткани собразованием послеоперационных эпидуральных и внутрисуставных спаек игипертрофических/келоидных рубцов [147, 418, 420, 507]. Однако, механизмыдействия антагонистов кальция на процессы фиброгенеза остаются недостаточноизученными, литературные данные, свидетельствующие о наличии у БМКК183фармакологическихэффектоввотношениифункциональнойактивностифибробластов - клеток-эффекторов при построении соединительнотканных спаек,немногочисленны; а, следовательно, и возможность применения БМКК дляпрофилактики и лечения спайко- и рубцовообразования требуют дальнейшихисследований.Однойизважныхзадачэкспериментальныхбиомедицинскихисследований является то, в какой степени результаты, полученные налабораторных животных можно экстраполировать на организм человека.
От того,насколько модель на лабораторных животных будет адекватна патологическимпроцессам в организме человека, зависит формирование представлений омеханизмах физиологических процессов, ответственных за реализацию действияфармакологических препаратов [165].Разработаннаянамиоригинальнаяэкспериментальнаямодельспайкообразования (патент 2260854 РФ) позволила стандартно воспроизвестипроцесс образования спаек в брюшной полостикрыс и кроликов, оценитьвыраженность спаечного процесса, макро- и микроскопические характеристикиспаек, общие закономерности реагирования перитонеальных фибробластов иклетокихдальнейшемумикроокруженияпроведениюнааутогемоперитонеумиспособствовалафармакологических исследований по выявлениюновых свойств у БМКК по регуляции роста соединительной ткани приспайкообразовании.Спаечный процесс у крыс и кроликов моделировалсяоднотипно путем однократного инъекционного внутрибрюшинного введенияэкспериментальному животному аутокрови через прокол в каудальной третибелой линии живота после ее забора в количестве 1% массы тела из дорсальнойхвостовой вены крысы, или изгемоперитонеумаприводилокраевой вены уха кролика.
Моделированиекобразованиюмножественныхсоединительнотканных спаек: тяжевых, плоскостных, пленчатых, паутинных исмешанных на 7-10 сутки с момента введения аутокрови, количество которыхбылосопоставимовэкспериментальныхгруппахкрысикроликов.184Микроскопически спайки были представлены волокнистой соединительнойтканьюсупорядоченнымрасположениемколлагеновыхволокон,гдеприсутствовали гомогенные участки и волокнистые структуры. Клеточный составбылпредставленфиброцитами,фибробластами,мононуклеарами,2/3поверхности спаек было покрыто мезотелиоцитами.Изучение клеточно-матриксных механизмов, реализующихся в процессеспайкообразования, выявило наличие чрезмерной активности основных клетоксоединительнойткани–фибробластов,являющихсяпродуцентамимежклеточного вещества.
Фибробласты синтезируют как основные волокнистыеструктуры, в том числе и коллаген, специфической маркѐрной меткой которогоявляется оксипролин, так и основные компоненты аморфного вещества, в томчисле гликозаминогликаны к которым относится гиалуроновая кислота [276]. Какпоказали наши исследования, росту соединительной ткани способствовалаинтенсификация выработки фибробластами коллагена и гликозаминогликанов.Определение в перитонеальной жидкости кроликов с гемоперитонеумомбелковосвязанного оксипролина демонстрировало его 7-кратный рост и наличиесвязимеждусодержаниемисследуемогобиохимическогосубстратаиколичеством спаек (r=0,95, p<0,05). Это согласуется и с имеющимися влитературе единичными сообщениями о влиянии повышенной продукцииоксипролина и гидроксипролина на гиперпродукцию соединительной ткани [304].Одновременно выявлено и 3-кратное увеличение содержания гиалуроновойкислоты и наличие сильной прямой связи данного показателя с числом спаек(r=0,93, p<0,05).
Более того, изменения синтеза активированными фибробластамиколлагена и гиалуроновой кислоты было однонаправленными и взаимосвязаными(r=0,86, p<0,05). В условиях нашего опыта уровни оксипролина и гиалуроновойкислоты в перитонеальной жидкости кроликов характеризовали выраженностьанаболической активности фибробластов.Чрезмернаяактивацияспайкообразования приперитонеальныхфибробластовнаэтапахгемоперитонеуме сопровождалась моделированиемфункциональной активности их микроокружения, прежде всего – макрофагов,185основных продуцентов провоспалительных цитокинов. Именно они приводят ксинтезу новых коллагеновых структур и заживлению дефекта путем цитокиновойрегуляциифункциональнойактивностифибробластов.
Провоспалительныецитокины TNF- и IL-1 являются индукторами хемотаксиса фибробластов, ихпролиферации, продукции коллагеназы и синтеза коллагена, других компонентовматрикса. Эти цитокины принято считать главной причиной негативныхпоследствийвоспалительногопроцесса,например–усиленногоспайкообразования [118].Проведенные исследования свидетельствуют очрезмернойпродукцииактивацииперитональнымимононуклеарамипровоспалительных цитокинов к 10 суткам разрешающегося гемоперитонеума иучастиеданныхпатофизиологическихмеханизмоввизбыточномспайкообразовании. Более чем 25-кратный рост уровня TNF- и 3-кратноеповышение содержания IL-1 регистрировались в перитонеальной жидкостикрыс.Связьизмененийсодержанияцитокиновсвыраженностьюспайкообразования подтверждена результатами корреляционного анализа междусодержанием TNF- и числом спаек (r= 0,55; р<0,05),(r=0,87;р<0,01).Согласнополученнымданным,IL-1 и числом спаекпредложеннаянамиоригинальная экспериментальная модель асептического перитонита с исходом враспространенный спаечный процесс в брюшной полости экспериментальныхживотных двух видов (белая крыса и кролик) является адекватной, посколькуполучены функциональные и морфологические эквиваленты спаечного процесса.Создание адекватной экспериментальной модели спайкообразования не толькодает возможность воспроизведения и достоверной оценки спаечного процесса, нои является основой для его фармакологической регуляции, в том числе и, сиспользованием БМКК.Рабочая гипотеза настоящего исследования базировалась на представленииоб ионизированном внутриклеточном кальции (Са2+) как ключевом вторичноммессенджере внешних стимулирующих воздействий на фибробласт – основнуюфункционально активную клетку соединительной ткани.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
