Диссертация (1154338), страница 29
Текст из файла (страница 29)
Обнаруженные единичные фибринозные наложения не могутбыть охарактеризованы как спайки в связи с отсутствием в их микроструктуреупорядоченных, собранных в пучки волокон. Уменьшение под влияниемверапамила числа перитонеальных спаек является основныминтегративнымпоказателем нормализующего действия препарата на коллагенсинтезирующуюфункцию фибробластов. Введение верапамила предотвращало и повышениесодержания ФНО- и ИЛ-1, что явилось одной из составляющих механизмаподавления препаратом коллагенсинтезирующей функции фибробластов. Поддействием верапамила отмечалось также достоверное снижение содержания191основных метаболитов соединительной ткани - оксипролина и гиалуроновойкислоты в перитонеальной жидкости крыс и кроликов.На основании полученных экспериментальных данных установлено, чтоверапамил обладает антипролиферативной и антианаболической активностью вотношении перитонеальных фибробластов.
Данный вид фармакологическойактивностиреализуетсяугнетениемдвигательной,пролиферативнойиметаболической активности как собственно перитонеальных фибробластов, так иклетокмикроокружениямоноцитарно-макрофагальногоряда.Доказанаоднотипность воздействия верапамила на молекулярные механизмы активацииперитонеальных фибробластов крысы и дермальных фибробластов человека.Это явилось предпосылкой подтверждения универсальности действияверапамила в качестве регулятора образования соединительной ткани и придругих видах патологии - формировании келоидных и гипертрофических рубцовкожи, лечение которых является важной проблемой медицины. В1994 году былопубликован первый клинический отчет о лечении гипертрофических ожоговыхрубцов верапамилом путем введения препарата в ткани рубца [438].
В 2015 году вобзоре литературы суммированы результаты лечения (в том числе верапамилом)гипертрофических и келоидных рубцов [420], применение верапамила включено впрактические рекомендации International Society for Burn Injury [416]. Однако,данный способ лечения имеет существенные недостатки, это чрезмернаяболезненность инъекций препарата в ткани рубца, неравномерность воздействиялекарственного средства на рубцовые и перифокальные ткани, опасностьразвития резорбтивных эффектов препарата, нарушение микроциркуляции итрофики тканей вследствие тугой инфильтрации вводимого раствора.ПолученныефармакологическогонамидоказательстваэффектаналичияпредотвращенияуБМККизбыточноговерапамилаформированиязаместительной соединительной ткани с учетом литературных данных послужилиоснованием для создания новой лекарственной формы для местного применения –антирубцового крема с верапамилом.
Рецептура крема была подобрана втехнологическом эксперименте по показателям оптимальных скорости и полноты192высвобождения входящих в ее состав лекарственных веществ, стабильности,пластичности.Набиофармацевтическихоснованииисследованийрезультатовбылоптимальной концентрации верапамила иВпервыесконструированамягкаятехнологическихосуществленвыборинаиболеепредпочтительной основы крема.лекарственнаяформадлянаружногоприменения - антирубцовый крем, содержащий в качестве базового компонентаверапамил, сопутствующего - димексид, в качестве основы – вода-ланолинвазелин в соотношении 30:60:10.Оценка эффективности оригинального антирубцового крема на основеверапамила проведена в эксперименте.
Патологические кожные рубцы крысаммоделировали путем иссечения полнослойного лоскута кожи площадью 5х4 см2 вцентре спины. После полной эпителизации гранулирующей поверхности раны иформирования патологических рубцов в течение двух месяцев проводилосьежедневное 2-кратное втирание в область рубцевания крема, содержащего вкачестве базового компонента верапамил.Нанесение антирубцового крема на неповрежденную кожу крыс послещадящего удаления волосяного покрова не вызывало признаков ее изменения. Втечение всего периода наблюдения на месте контакта верапамил-содержащегокрема с кожей признаки воспаления и/или аллергических реакций: покраснение,отечность, папулы, микровезикулы и т.д.
отсутствовали. Цвет кожи оставалсярозовым, без признаков шелушения, кожа имела гладкую поверхность, хорошосмещалась относительно подлежащих тканей, легко образуя складку, припальпации была безболезненной. Состояние кожных покровов интактных крыс икрыс, на здоровую кожу которых длительно наносился исследуемый крем сверапамилом, не разнилось.Экспериментальная терапия крыс с патологическими рубцами коживерапамил-содержащим кремом позволила получить стойкий клиническийрезультат, заключающийся в уменьшении площади рубца на 25 %, формированиифизиологического рубца, улучшении консистенции и изменении цвета рубца дохарактерного для окружающей коже, его размягчении и уплощении, исчезновении193болевых ощущений, в то время как в группе крыс, которым наносили основукрема без верапамила, площадь гипертрофических рубцов уменьшилась лишь на7% от исходной, в 75% случаев наблюдались признаки гипертрофических рубцов(цвет рубцов розовый, местами красный, рубцы плохо смещались относительноподлежащих тканей).
При оценке результатов лечения в баллах в группесистематически получавшей верапамил средняя сумма баллов составила 2,5 балла- хороший результат, тогда, как в группе сравнения данная сумма продолжаласоставлять11биомикроскопиибаллов-неудовлетворительныйремоделированиерезультат.патологическогорубцаПоданнымприближалопоказатели к уровню здоровой кожи у 93% крыс.
Наиболее значимый в динамикеболезни клинический эффект применения оригинального антирубцового крема наоснове верапамила наблюдался у экспериментальных животных через 60 днейпосле лечения.Морфологические исследования показали, что при экспериментальнойтерапии антирубцовым кремом с верапамилом, уже через 10 суток появляласьтенденция трансформации патологических рубцов в физиологические. Этовыражалось в более раннем структурном созревании сосудисто-стромальныхэлементов без гипертрофии. Использование верапамила усиливало репаративныепроцессы, укорачивало все фазы воспаления, блокировало гипертрофию и, врезультате, приводило к преимущественному формированию физиологическихрубцов.
Через 30 и 60 суток процессы трансформации патологических рубцов вфизиологическиесущественноусиливались.Приэтом,вгруппекрыс,получавших лечение без верапамила даже через 60 суток сохранялось большоеколичество массивных грубых гипертрофических и незначительное количествокеллоидных рубцов с толстыми коллагеновыми волокнами, имеющими очаговыепризнаки фибриноидного набухания и гиалиноза.Предложенная лекарственная форма в виде оригинального крема,содержащего 0,25% раствор верапамила гидрохлорида в водно-жировой основепри местном щадящем способе доставки верапамила в толщу гипертрофическихрубцов обладает выраженным антирубцовым действием. Способ является194безболезненным, безопасным и не оказывает влияния на окружающие ткани, чтоподтверждаетсяустойчивымклиническимрезультатом,наблюдаемымуэкспериментальных животных через 60 дней после лечения.Таким образом, обоснована возможностей фармакологической регуляцииформирования перитонеальных спаек и гипертрофических/келоидных рубцовБМКК, нами изучены механизмы действия классических БМКК верапамила,дилтиазема, нифедипина на образование соединительной ткани в экспериментахна животных и культурах клеток при перитонеальном спайкообразовании иформировании келоидных рубцов с использованием оригинальной моделиперитонеального спайкообразования у животных (патент 2260854 РФ), первичнойкультуры фибробластов крыс с гемоперитонеумом и перевиваемой культурыдермальных фибробластовчеловека.
Установлены связи между дозами,концентрациями и эффективностью лекарственных средств. Выявлен наиболееэффективный препарат – верапамил, на основе которого создана новаялекарственная форма – антирубцовый крем (патент 2290919 РФ) и проведена егооценка в качестве средства предупреждения избыточного фиброгенеза в клинике.195ЗАКЛЮЧЕНИЕВажнейшим итогом настоящей работы является экспериментальнообоснованнаяконцепцияновойобластимедицинскогоприменениялекарственных средств группы блокаторов медленных кальциевых каналов длярегуляции образования соединительной ткани при спайко- и рубцовообразовании.Проведенное фармакодинамическое исследование доказывает наличие уБМКК групп фенилалкиламинов (верапамил) и бензотиазепинов (дилтиазем)свойств регулирующих активность фибробластов; при этом местное применениеверапамила эффективно предотвращает у крыс и кроликов формированиеперитонеальных спаек (в дозах, не влияющих на кардио- и гемодинамику) ипатологических рубцов кожи.Изучены и уточнены компоненты патогенеза спаечного процесса иобразованияпатологическихверапамила,дилтиазема,рубцовнифедипинакожи,механизмынаформированиедействияБМККзаместительнойсоединительной ткани in vivo и in vitro.
Исследования in vitro проведены впервичной культуре перитонеальных фибробластов крыс с гемоперитонеумом иперевиваемой культуре дермальных фибробластов человека (производства AxolBioscience). Способы in vivo основаны на запатентованной нами моделиасептического перитонеального спайкообразования у крыс и кроликов, а такжевоспроизведении модели формирования патологических рубцов кожи. Наличиеспаечного процесса, патологических рубцов кожи было подтверждено макро- имикроскопически.
Получены равнозначные морфологические и функциональныеэквиваленты формирования спаечного процесса в брюшной полости разных видовлабораторных животных.196Оценено влияние разных доз БМКК верапамила, дилтиазема, нифедипинана функции фибробластов и макрофагов, процессы пролиферации и ингибицииапоптоза, синтеза коллагена и цитокинов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
