Диссертация (1151601), страница 7
Текст из файла (страница 7)
В заражённыхклетках часто наблюдают маргинацию хроматина и вирусные капсиды приэлектронной микроскопии. Геном Cyprinid HV 3 самых крупный в семействеAlloherpesviridae [75, 124, 145, 192].Диагностика болезни проводится на основании гистологических данных,электронно-микроскопических исследований, ПЦР [164], ИФА [84]. Дляпрофилактики используется вакцина КоVаx [61].2.3.5 Распространение, течение и патоморфологические изменения пригерпесвирусной болезнях осетровых рыбСреди осетровых в настоящее время официально установлены два типагерпесвирусных инфекций: на Американском континенте и одна герпесвируснаяинфекция в РФ у сибирского осетра.Герпесвирусная болезнь белого осетра, возбудитель – герпесвирусосетровых 1 типа.Вирус герпеса был выделен от молоди белого осетра,Acipenser transmontanus в период большой смертности на рыбоводной ферме вКалифорнии в США в конце 80-х [88].
Позже от того же вида осетровых, впервый и единственный раз AciHV1 выделили в Европе, в Италии [74, 166]. Дляизоляции вируса использовалась клеточная культура WSSK-1, полученная изклеток кожи белого осетра. ЦПЭ выражался в образовании через 3 дня синцития,через 5 дней поражался весь клеточный монослой, через 7 дней погибшие клеткиотделялись от поверхности. Репликация вируса происходит при температуре 10200С, при этом оптимальная температура для инкубации– 150С [88].33Кумулятивная гибель молоди (1-3 г) больных осетров составила 35%, приэтомявныхсимптомовотмеченонебыло.Привскрытиивидимыхпатологических изминений внутренних органов не выявлено, только в кишечникенаблюдалось повышенное скопление слизистой жидкости [88].
При патологогистологических исследованиях выявляли очаговый дерматит, сопровождавшийсяакантозом и межклеточным отёком, гипертрофией мальпигиевых клеток иразрушениеммежклеточныхконтактов.Впоражённыйклеткахядранезначительно увеличены, отмечена маргинация хроматина, которая иногдасочетается с неявно выраженными, несвязанными с ядерной мембранойвключениями.Приэлектронноймикроскопииинфицированныхтканейвыявлялись нуклеокапсиды 110 нм и вирионы 230 нм в диаметре.
Диагноз наAciHVD1 ставится на основании ЦПЭ в культуре клеток WSSK-1 и ПЦР [74, 88,166].Герпесвирусная болезнь белого осетра, возбудитель герпесвирусосетровых 2 типа. Впервые Acipenserid herpesvirus 2 был выявлен у взрослыхбелых осетров Acipenser transmontanus, в США. Вирус был изолирован в культуреклеток cелезёнки белого осетра WSS-2 из овариальной жидкости взрослыхосетров [197]. Вскоре после этого AciHV2 был повторно выделен из кожи сязвенными поражениям, полувзрослых белых осетров, выращенных в осетровомхозяйстве, в котором отмечалась высокая заболеваемость и смертность[82, 198].Позже AciHV2 был обнаружен у тупорылого осетра, Acipenser brevirostrum наСеверо-востоке Канады [40, 74, 166].При экспериментальном заражении молоди белого осетра методом ваннкумулятивная смертность составила 80% в течение 6 недель [198].
У больных рыбнаблюдалось нарушение координации движения, апатия, слизистые, сферическиебляшки на поверхности тела, гиперемия жучек, покраснения в области рта и ануса[197]. При патолого-гистологических исследованиях выявляли гиперплазиюэпидермиса, изъязвления кожи в области головы [198].Впервые герпесвирус в Европе выделен в Европейской части России отсеголетков сибирского осетра, Acipenser baeri в период максимального подъема34эпизоотии в одном из осетровых хозяйств [68]. В начале для изоляциивозбудителя использовали культуры клеток осетровых рыб SSO-1, SSO-2, SSO-3,SSF-1, SSF-1, SSF-2, SSF-3 и WSSK-1, но в дальнейшем применялись наиболеечувствительные к вирусу герпеса SSO-2, SSF-2, WSSK-1 а также WSS-2,предоставленную профессором Рональдом Хедриком из Калифорнийскогоуниверситета .
Наилучшая репликация вируса наблюдалась при температуре 15 0С.ЦПД на третьи сутки выражался в округлении клеток, на 2-9 монослой полностьюразрушался [84].Герпесвирусная болезнь сибирского осетра, возбудитель - герпесвируссибирского осетра (SbSHV) преимущественно поражает сибирского осетра, новирус также выделен у гибрида белуги и стерляди – (бестера), гибрида русского исибирского осетров и стерляди [18]. Вирус герпеса выделенный в России получилназвание Siberian sturgeon herpesvirus, (SbSHV). Исследования его генома,молекулярных и биологических свойств показали, что данный тип вируса близокканадскому типу AciHV-2, [57]. При этом по данным литературы существуетбольшая разница в патолого-анатомических изменениях внутренних органов приAciHVD-2 канадского типа и SbSHVD.
Если у SbSHV-инфицированныхсибирских осетров наблюдаются значительные патологические изменениявнутренних органов, то у белых и тупорылых осетров больных AciHVD-2заметных патологий внутренних органов не выявлено [40, 68, 198].В экспериментальных условиях при заражении сеголеток сибирского осетраметодом ванн при температуре 14- 160С первые симптомы отмечали через 6 дней,на 9 день появлялись первые погибшие рыбы.
Больные рыбы малоподвижны чащележат на дне аквариума, у них наблюдается учащённое дыхание. Периодическирыба двигается хаотично и беспокойно. Некоторые особи плавают у поверхностиводы, перевернувшись вверх брюшком, или принимают вертикальное положение.На 10-11 день после заражения на коже обнаруживались полупрозрачные бляшкиот 1 до 4 мм. Отмечали некроз плавников. В местах образования бляшекразвивалась сапролегния и миксобактерии.
За 1-2 дня до гибели рыб на коже,особенно на каудальной стороненаблюдали множественные петехии. При35вскрытии в брюшной полости обнаруживалась асцитная жидкость соломенножёлтого, а у некоторых больных рыб кровавого красного цвета. Печень бледная,почти белая, желчный пузырь увеличен, переполнен желчью. Кишечник часто безпищевых масс, а его задний отдел с признаками геморрагического воспаления сполупрозрачным слизеподобным содержимым желтоватого или кровянистогоцвета [18, 68,84].В экспериментах длительностью20 дней наступала 100% гибельподопытных рыб.
Клинические признаки и патолого-анатомические изменения уэкспериментально заражённых и естественно больных осетров были сходны [67].Кнастоящемувремениопределено2типаSbSHV[71,112],различающимися по ЦПЭ в культуре клеток WSS-2 и по продолжительностиинкубационного периода. Герпесвирус первого типа (9 изолятов) вызывает вкультуре клеток образование больших многоядерных синцитий, инкубационныйпериод составляет 10-14 дней. ЦПЭ в культуре клеток, заражённой герпесвирусомSbSHV второго типа (2 изолята) выражается в округлении клеток во всёммонослое, инкубационный период инфекции достигает 1 месяца.
По даннымлитературы при экспериментальном воспроизведении болезни с применением 1 и2 типов SbSHV заболеваемость и смертность у подопытных рыб, а такжеклиническиепризнаки,патолого-анатомическиеизменения,наблюдалисьсходные [72].С помощью электронной микроскопии в ядрах заражённых клетокобнаруживают капсиды экосаэдрической формы 100-110 нм. и вирионы вцитоплазме 200-250 нм в диаметре [68].2.4 Заключение по обзору литературыДанныелитературысвидетельствуетоширокомраспространениигерпесвирусных инфекций рыб в условиях аквакультуры и частично в дикихпопуляциях.Некоторыеболезни,вызываемыеэтимивирусамиширокораспространены в мире (CyHV1, CyHV2 CyHV3), другие ( IcHV1, IcHV2,SalmHV2) – носят локальный характер.36Тяжесть течения герпесвирусных болезней зависит от вида вируса, возраста,физиологического состояния и вида восприимчивых рыб, температуры воды.Нередко остро протекающие болезни вызывают большую смертность у молодирыб, которая часто достигает 100%.Как правило, наиболее выраженными, являются патологические изменениякожи, которые выражаются в гиперплазии эпидермиса, геморрагиях и внекоторых случаях образовании язв.
По заключению многих авторов подобноепроявление свидетельствуетотропностиданныхгерпесвирусов рыб кэпидермальным клеткам кожного покрова. Некоторые герпесвирусы рыбвызывают папилломы (Salm 2, Salm 4, CyHV1, SbSHV) но при герпесвируснойболезни Американской корюшки отмечено образование карциномы. При остромтечении некоторых болезней наблюдаются генерализованные формы инфекции,выражающиеся дистрофическими и некротическими изменениями в другихжизненно важных органах: печени, почках, кишечнике, жабрах.В настоящее время в мире активно проводятся исследования по разработкечувствительных методов молекулярной диагностики данных болезней, многиегерпесвирусы выявляются пока только с помощью гистологических и электронномикроскопических исследований.Особенно слабо изучены патоморфологические изменения герпесвируснойинфекции осетровых рыб, хотя они приобретают особую актуальность внастоящее время в связи с интенсивным развитием аквакультуры осетровых рыб внашей стране.В связи с этим перед нами поставлена цель – изучить патоморфологическиеизменения и основные стороны патогенеза герпесвирусной инфекции сибирскогоосетра, на основе чего усовершенствовать диагностику данной болезни.373.
СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ3.1 Материалы и методыРабота выполнена в 2011 – 2016 гг. на кафедре мелкого животноводстваМГАВМиБ – МВА имени К.И. Скрябина и частично на базе лабораторииздоровья гидробионтов ГНУ ВНИИВВиМ РАСХН и ФГБУН ИБВВ им. И.Д.Папанина РАН в порядке творческого сотрудничества.Материал для патолого-морфологических исследований был собран отэкспериментально заражённых и естественно больных герпесвирусной инфекциейсеголеток сибирского осетра и его гибрида с русским осетром.
Дляэкспериментального воспроизведения герпесвирусной болезни поставлено 3варианта опытов. Эксперименты проводили в аквариальной ГНУ ВНИИВВиМ поединой схеме (рис.2). Опыт №1 поставлен нами самостоятельно с проведениемвсегокомплексаисследований:экспериментальных,вирусологических,патоморфологических, бактериологических, электронно – микроскопических,гидрохимических. В опытах № 2 и 3, поставленных совместно с сотрудникамилабораторииздоровьягидробионтов,намиотобранпатматериалдляпатоморфологических исследований.3.1.1 Схема постановки опытовОпыт 1В опыте №1 использованы сеголетки гибрида русского и сибирскогоосетров (Acipenser gueldenstaedti х Acipenser baeri) возрастом 6 мес.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
