Диссертация (1151601), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Подопытныхрыб в возрасте малька доставляли из благополучного по инфекционным болезнямхозяйства - НПЦ «Биос» Астраханской области, после транспортировкидоращивали в аквариальной ФГБОУ ВО МГАВМиБ – МВА имени К.И. Скрябина.Подрощенных сеголетов в возрасте 3 месяцев и средней массой 50 г. доставляли ваквариальную лаборатории здоровья гидробионтов ГНУ ВНИИВВиМ дляпроведения опыта и адаптировали в течение 1 месяца в аквариуме ёмкостью 100л.Далее формировали контрольную (6 экз.) и опытную(20 экз.) группы рыб,помещали их в отдельные аквариумы объёмом 100 литров с проточной (со38скоростью 100л/ч) отстоянной артезианской водой.
Рыб заражали штаммомSK1/0406 методом ванн [11] в течение 1 часа. Для этого в отдельный аквариумпомещали подопытных рыб в соотношении общей ихтиомассы к массе воды 1:10,добавляли культуральную вируссодержащую жидкость из расчёта созданияразведения 1/100 к объёму воды в аквариуме, что обеспечивало конечнуюконцентрацию вируса 104 ТЦД50/мл. После заражения рыб пересаживали в те жепроточные аквариумы с артезианской водой. Опыт проводили при температуре14-16 0С, с содержанием кислорода 7-9 мг/л.Рыб кормили форелевым комбикормом 2 раза в день. Количество кормарассчитывали по поедаемости в течение 5 минут.
Ежедневно в журналерегистрировалиотклонениявповедениирыб,описывалисимптомы,патологоанатомические изменения кожи, жабр и плавников, учитывали погибшихрыб. Для более детальной оценки поражений кожи, жабр и плавниковиспользовался ручной микроскоп МС – 40. Сеголетков с выраженнымиклиническими признаками болезни отсаживали для патологоанатомическоговскрытия, отбора проб патологического материала для гистологических,вирусологическихиэлектронно-микроскопическихисследований.Продолжительность эксперимента составила 50 суток.Качество воды определяли один раз в неделю по гидрохимическимпоказателям: общей жёсткости, содержанию растворенного кислорода, аммонийиона, нитрит-иона, железо-иона, с помощью гидрохимических тестов компанииSera.Опыт 2Опыт поставлен, по той же методике, что и опыт №1. Бактериологические,гидрохимические, клинические и патоморфологические исследования выполненынами самостоятельно.
Вирусологические исследования выполнены сотрудникамилаборатории. В опыте использованы подрощенные в условиях аквариальнойсеголетки сибирского осетра, Acipenser baeri возрастом 2 мес., полученные изблагополучного по инфекционным заболеваниям ООО «Рыботоварная фирма«Диана». Рыб заражали изолятом SIz6/0311. Количество рыб в опытной группе39было 40 экз., контрольной – 10 экз. Рыб опытной группы размещали в 2аквариума по 20 экз.Опыт 3Опыт поставлен по той же методике, что и опыт №1, 2. Клинические,патоморфологические,бактериологические,гидрохимическиеисследованиявыполнены нами самостоятельно. Вирусологические исследования выполненысотрудниками лаборатории. В опыте использованы сеголетки сибирского осетра,Acipenser baeri возрастом 2 мес. из благополучного по инфекционнымзаболеваниям осетрового рыбоводного хозяйства Электрогорской ГРЭС.
Вопытной группе использовали 40, контрольной – 10 рыб. Подопытных рыбразместили в два аквариума емкостью 100 л по 20 экз., а контрольных - в одинаквариум емкостью 100 л. Для заражения использовали штамм SK1/0406.Материалы для исследований при спонтанной герпесвирусной болезнив рыбоводном хозяйствеВ рыбоводном хозяйстве, в котором была выявлена герпесвируснаяинфекция осетровых, нами было проведено клиническое обследование ипатологоанатомическое исследование больных сеголеток сибирского осетравозрастом 50 – 70 суток. Обследованию подвергнуты предварительно отсаженныев лотки 100 рыб с явными клиническими признаками герпесвирусной болезни.При этом от 10 рыб собран патматериал для вирусологических и патологогистологических исследований.40Объекты исследованийГибрид русского исибирского осетровСибирский осётрОпыт 2Опыт 1Контрольнагруппа ( n=6)Контрольнаягруппа ( n=10)Опытнаягруппа (n=20)Заражение(штамм SK1/0406)Опыт 3Опытнаягруппа (n=40)Заражение (изолятSIz6/0311), опыт 2Заражение (штаммSK1/0406), опыт 3Ежедневное наблюдение, регистрация симптомов и патизмененийОтбор больных рыб для патолого-анатомическоговскрытия и фиксации патматериалаМетоды исследованийОпыт 1Опыт 2Опыт 3Патоморфологические исследованияПатоморфологические исследованияВирусологические исследованияВирусологические исследованияБактериологические исследованияЭлектронно – микроскопические исследованияБактериологические исследованияисследованияРис.
2 - Схема проведения исследованийЕстественнобольныерыбы (n=100)413.1.2 Клинические наблюденияКлиническому осмотру ежедневно подвергали всех подопытных рыб. Приэтом оценивали поведение рыб, сохранение или потерю рефлексов, угнетение ивозбудимость, нарушение равновесия и координации движения, по движениюжаберных крышек определяли частоту дыхательных движений, обращаливнимание на реакцию на свет и звук.
При осмотре рыб отмечали прижизненныеизменения в кожном покрове, плавниках, количество слизи, пигментацию,наличие папиллом и некротических участков, язв, состояние жучек. Приподнимаяжаберные крышки, осматривали жабры. Обращали внимание на их окраску, навозможное наличие геморрагий и очагов некроза. При осмотре области ртаоценивали состояние кожного покрова. Рыб с явными клиническими признакамиотсаживали для проведения патолого-морфологических исследований.3.1.3 Патоморфологические исследованияПатологоанатомическое вскрытие погибших и вынужденно убитыхсеголетковосуществляливлаборатории.Живыхрыб,предварительнообездвиживали путём разрушения спинного мозга разрезом позвоночниканожницами. При осмотре органов брюшной полости, обращали внимание наналичие и количество асцитной жидкости, её цвет, консистенцию.
Далееоценивали состояние внутренних органов; форму, размер, цвет, консистенцию,наличие в них кровоизлияний, отёка. Затем внутренние органы извлекали иосторожно отделяли друг от друга. Исследовали: печень, почки, кишечник,сердце, селезёнку. Кишечник расправляли и делали продольный разрез, обращаливнимание на наличие пищи, цвет, состояние слизистой, наличие кровоизлияний,истончений, отёчности. При осмотре сердца обращали внимание на состояниелимфоидной железы [5]. Перед вскрытием черепной коробки предварительноудаляли пластинчатые кости костного черепа (dermocranium): парные лобные,медиальные, теменные и чешуйчатые. После этого вскрывали мозговую частьхрящевого черепа (chondrocranium).
Головной мозг сначала осматривали, затемизвлекали из черепа, подрезая ножницами вентральные нервы.42Для патолого-гистологических исследований отбирали кусочки печени,почек, селезёнки, средней кишки, сердца, мозга, жабр, кожи, плавников размером0,5х 1,0 см., фиксировали в 10% забуференном растворе формалина. Длягистологическихзамороженныеисследованийсрезы.готовилиГистологическуюпарафиновые,обработкуцеллоидиновыематериалаипроводилиобщепринятыми методами с применением некоторых модификаций с учётомособенностейтканейрыб.Дляобезвоживанияматериалаиспользовалиизопропиловый или этиловый спирт возрастающей крепости по следующейсхеме:600 cпирт, экспозиция 40 мин700 спирт, экспозиция 40 мин800 спирт, экспозиция 40 мин900 спирт, экспозиция 40 мин1000 - I спирт, экспозиция 30 мин1000 - II спирт, экспозиция 30 минДля приготовления замороженных срезов материал заливали в желатинуобщепринятымиметодами[10].Декальцинациючешуек,жаберныхдугпроводили с применением 10% раствора трихлоруксусной кислоты в течение 3часов, с последующей отмывкой в 960 спирте в течение 1 суток при смене спиртачерез каждые 8 часов.Как промежуточная среда при заливке в парафин применялся хлороформ.Пропитывались объекты гомогенизированным парафином-парапластом.
Заливкув парафин и изготовление парафиновых блоков осуществляли в станциях заливкиMicrom EC 350. Заливку в целлоидин проводили общепринятым методом [10].Дляприготовлениягистологическихсрезовиспользовали:ротационныймикротом МПС – 2; санный микротом МС – 2, ротационный микротом HM – 440;микротом – криостат МК – 25.Для окрашивания гистосрезов применяли гематоксилин и эозин пообщепринятой методике [4,10] с использованием гематоксилина Майера, Эрлиха43и водного – спиртового раствора эозина, липиды выявляли суданом – III, суданомчёрным.В связи с недостатком научных данных по гистологическому строению рядаорганов осетровых оценку патоморфологических изменений при герпесвируснойинфекции проводили путем сравнения их с состоянием органов контрольных(здоровых) рыб.3.1.4 Вирусологические и бактериологические методы исследованийДля постановки экспериментов использовали герпесвирус сибирскогоосетра (SbSHV), штамм SK1/0406, выделенный от осетров в одном из хозяйствЕвропейской части РФ и изолят SIz6/0311, полученный от сеголеток в осетровомхозяйстве Удмуртии, с конечной концентрацией вируса 104 ТЦД50/мл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
