Диссертация (1151595), страница 13
Текст из файла (страница 13)
4020),разогретый до 115°С, выдерживали в течение 1 часа до полного растворенияпробы. Растворенный образецколичественно переносили в мернуюполипропиленовую пробирку, троекратно смывая со стенок цилиндра, идоводили деионизированной водой до 10 мл. Герметично закрывализащитной лабораторной пленкой, перемешивали и проводили элементныйанализ.
Данные об объеме аликвотной части и объеме разведения вводили впрограммное обеспечение спектрометра вместе с названием и навескойобразца.Чтобыскомпенсироватьпогрешностьразбавления,передразложением в пробу добавляли внутренний стандарт (In или Rh), чтобыконцентрация внутреннего стандарта в конечном растворе, направляемом наанализ, составляла примерно 10 мкг/л.Раствор внутреннего стандартадобавляли во все холостые и калибровочные растворы. Раствор холостойпробы готовили с выполнением всех указанных выше операций, заисключением операции взятия навески.3. Приготовление стандартных градуировочных растворов для АЭСИСП.
Стандартные градуировочные растворы готовили разбавлениемстандартных опорных много элементных растворов. Опорные стандартыприготавливали, смешивая определенные количества одно элементныхстандартных растворов Perkin-Elmer для атомной спектрометрии серииEssentials. При этом учитывались матрицы исходных растворов дляисключения потерь элементов вследствие соосаждения или сорбции.Пропорции и концентрации элементов в опорных растворах подбирали такимспособом, чтобы после разбавления в 20-50 раз, получались концентрации60одного порядка с верхними границами диапазона содержания элементов врастворе биосубстрата.
Приготовленные опорные растворы сохраняли вполипропиленовых или полистироловых контейнерах.Приготовление рабочих стандартов проводили с помощью доведенияаликвотной части опорного раствора до требуемого объема разбавленнойазотной кислотой или деионизованной водой (для водных растворов).Расчетныеконцентрацииприготовленныхрастворов,статистическуюобработку данных проводили с помощью программного пакета WinLab32. Вготовый рабочий стандарт добавляли внутренний стандарт- растворазотнокислого индия с концентрацией 1000 мг (In/л) из расчета 100 мкл накаждые 10 мл стандарта.4.
Сущность метода. Методоматомно-эмиссионнойспектрометриисиндуктивно связанной плазмой в кожном и волосяном покровах пушныхзверей были определены следующие элементы: железо, калий и фосфор спомощьюпоследовательного атомно-эмиссионногоспектрометратипаOptima 2000TMDV с полупроводниковыми детекторами типа CCD и синдуктивно связанной плазмой в качестве источника возбуждения спектров,и с рабочим диапазоном длин волн165-800 нм при спектральномразрешении 0,007 нм (при 193 нм).
Спектральная полоса пропускания частот0,009 нм на 200 нм, 0,027 нм на 700 нм, монохроматор Эшелле. Экспозицияспектров осуществляется автоматически в интервале 0,01-500 с, количествореплик – произвольное. В спектрометре реализуется спектральная коррекцияфона с помощью алгоритма мультиспектральной фильтрации (MSF). Работаспектрометра полностью управляется и контролируется программнымобеспечениемWinLab32воперационнойсистемеWindows2000.Программное обеспечение позволяет осуществить полную автоматизациюизмерений, управление системами ввода проб, сохранения измерений (в видефайла)истатистическойобработки.Аналитическиесигналыобрабатываются при помощи программного обеспечения спектрометра,использующих градуировочные зависимости, рассчитываемые методом61наименьших квадратов, учет и коррекцию фона, при необходимости – учетвзаимноговлиянияизмеряемыхэлементов.Результатопределенияконцентрации элемента отвечает среднему арифметическому значению изнескольких параллельных измерений анализируемого элемента.
Обработкарезультатов измерений соответствует ГОСТ 8.207.Методикаосновананаокислительно-кислотной"мокрой"минерализации проб исследуемых биосубстратов, проб фаршаи напоследующем анализе их на требуемые химические элементы методоматомно-эмиссионной спектрометрии с использованием в качестве источникавозбуждения высокочастотной индуктивно связанной аргоновой плазмы.Метод основан на резонансном поглощении света определенной длиныволны атомами металла, находящихся в виде атомного пара, в основномневозбужденном состоянии. Роль пламени заключается в переводе атомовметаллавсостояниеатомногопара,атомыкоторого,находясьвневозбужденном состоянии, поглощают свет определенной длины волны,соответствующей резонансному переходу атомов в возбужденное состояние.Цель пробоподготовки состоит в переведении пробы в растворенную форму,удобную для ввода в спектрометр.
Полного предварительного разрушенияорганической матрицы не требуется, поскольку это не сказывается напротекающей в плазме при высоких температурах атомизации пробы и напроцессы возбуждения эмиссионных спектров определяемых элементов.Применение схемы последовательного сканирования позволяет задатьнеобходимыйсписоктребуемыхопределяемым элементам.спектральныхлиний,отвечающихИнтенсивность спектральной линии элементаопределенным образом связана с его концентрацией в пробе, что позволяет сиспользованием сопровождающего спектрометр программного обеспеченияполучатьнадежныеградуировочныехарактеристики,прямопропорциональные в интервале пяти-шести порядков. Сочетание высокойизбирательности и последовательного по длинам волн способа измерения62позволяет определять сразу несколько элементов из одной подготовленнойпробы.2.1.2.2.
Биометрическая обработка данных Данные,полученныевопытах, подвергали биометрической обработке (Е.К. Меркурьева, 1970; Г.Ф.Лакин, 1990) с вычислением общепринятых констант с использованиемпрограммного обеспечения MS Office 2003, с использованием пакетапрограмм Microsoft Office 2003, Clarity Chrom 305.3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙГлубокое и всестороннее познание биологических закономерностейпостнатального развития пушных зверей в условиях клеточного содержанияпозволяетиспользовать болееэффективные методывоздействиянаразвивающийся организм животного в целях повышения его продуктивностии устойчивости к неблагоприятным, вредным факторам внешней среды.
Всвязи с этим вопрос об обеспеченности макро- и микроэлементами органов итканей организма животных на протяжении всего физиологического цикла,особенно в условиях промышленного производства продолжает оставатьсяактуальным.Контрользаминеральнойобеспеченностьюосуществлять по содержанию минеральных веществможнов органах и тканяхорганизма животных, например, в крови или кожно-волосяном покрове.В этом аспекте особый интерес представляет сравнительное изучениевозрастных изменений физиолого-биохимических показателей органов итканей, например, таких как минеральных составов крови, кожно-волосяногопокрова, а также установление взаимосвязей между ними в зависимости отсоставов кормовых рационов в условиях промышленных технологийсодержания пушных зверей в различные фазы их роста.Минеральные вещества не могут синтезироваться в организме идолжны поступать с кормом или водой.Для поддержания нормальнойжизнедеятельности, здоровья и получения красивого меха пушным зверямнеобходимо, чтобы с суточным рационом они получали в достаточном63количестве не только определенное количество белков, жиров, углеводов,витаминов, но и минеральных веществ.3.1.
Рационы стандартных норок племзверосовхоза «Салтыковский» иих минеральный состав1. Структура кормовых рационов. Кормление стандартных норокплемзверосовхозанормами,«Салтыковский»приведеннымивосуществлялосьприложенииврационамисоответствии(таблицыс1-15).Среднемесячные рационы для лактирующих самок и молодняка приведены втаблицах1-3Приложения.Приэтомонразличаетсядляразныхфизиологических состояний животных: I - рацион для беременныхлактирующих самок с марта по май; II - рацион для молодняка июнь-июль;III - рацион для молодняка в августе; IV - рацион для молодняка в октябре; V- рацион приведен в таб. 2 Приложения и был предназначен для племенныхнорок с января по октябрь.
В таблице 1 Приложения приведены рационы длянорок с января по декабрь 2008 г., в котором уровень протеина составлял от6,22 (август) до 10,39 г в апреле месяце.2. Минеральный состав кормовых рационов стандартных норок.Проведенные исследования показали, что в кормовых рационах,применявшимсяприкормлениипостнатального онтогенеза вмолодняканороквбольших концентрацияхразныефазысодержалисьмакроэлементы (P, Ca, K, Na, Mg), железо, марганец и цинк, концентрацияостальных элементов не превышала 1 ммоль/кг.
Из таблицы 3.1.1. видно, чтоконцентрации макроэлементов: магния, натрия, фосфора, кальция и калия врационах племзавода «Салтыковский» изменялись в 1,3; 1,4; 1,45; 1,8 и 2,5раза, соответственно; жизненно важных элементов: кобальта, хрома, йода имарганца 1,7 раза, селена и железа – в 2,1 раза; меди и цинка – в 3,4 и 5,4раза, соответственно. При этом концентрация всех изучаемых элементовбыла максимальной в рационе мес. щенков норок, по составу и структуретакому же, что и для лактирующих самок.
Во всех кормовых рационовнорок концентрация макроэлементов: кальция, натрия, фосфора и магния64мало изменяется (р≤0,05); калия максимальная в I, минимальная – в III и Vрационах (различия между I и II рационами не достоверны).Таблица 3.1.1. Кормовой рацион для молодняка норок в мае (I), в июнеиюле (II), июль-сентябре (III), октябре-декабре (IV) 2008 г.
и племенныхсамцов в январе-марте (V) 2009 г. (ммоль /кг в расчете на сухое вещество)ЭCaCoCrCuFeIKMgMnNaPSeZnI2900±4000,0115±0,0060,20±0,020,58±0,0430±20,20±0,02950±60200±201,7±0,1530±401600±2000,044±0,0044,5±0,3IIIII2000±300٭, ٭0,0115±0,0006 ٭, ٭0,117±0,01**,***0,17±0,34±0,02*** 0,01***,***24±2*16±1**,***0,12±0,18±0,02٭0,01*,***850±60٭500±30***,***190±20٭,160±10٭, ٭,1,2±0,1**1,1±0,1٭, **480±40٭430±40٭, *2100±300٭0,0114±0,0006٭0,19±0,02٭1300±100 ٭, ٭0,024±0,035±0,004 ٭0,002*,***3,7±0,2*3,6±0,2٭, *IV2100±300٭, ٭, ٭,0,0075±0,0004***,***,***0,17±0,02*,٭, ٭1600±200 ٭, ٭, ٭,**0,0066±0,0003٭,***,***,***0,12±0,01*,٭, **,***0,47±0,03***,***,*14±1٭, ***,***0,18±0,01***,٭,***,***21±1***,**,٭, ***0,15±0,01*,٭, *620±30**,***,***150±10٭, ٭, *1,00±0, 1 ٭, ٭,**370±30٭, *,**0,17±0,02 ٭, ٭,*,٭, ٭1100±100٭, ٭, ٭0,022±0,002 ٭,**,***2,1±0,1***,***,***Достоверность - * - р<0,05; ** - р<0,01; *** -р<0,001;1300±100٭V380±30***,**,***,***180±10 ٭, ٭, ٭, ٭,1,2±0,1 ٭, ٭, ٭, **470±40*, ٭, ٭, ٭1300±100 ٭, ٭, ٭, ٭0,029±0,003*, ٭, ٭,***0,84±0,06***,***,***,***Концентрация жизненно необходимых элементов в кормовых рационахнорок: кобальта максимальная - в I, II и III (различия не достоверные),минимальная в IV и V (различия не достоверные); хрома – в I, II, и IV(различия не достоверные), минимальная – в III и V рационах (различия недостоверные); меди максимальная в I (р<0,001), и минимально – в III и Vрационах (различия не достоверные); железа – максимальная в I иминимальная в III и IV (различия не достоверные); йода максимальная – в I,II и V (различия не достоверные), минимальная – в IIIи IV рационах,максимальная концентрация марганца – в I рационе, в остальных егоконцентрация изменяется мало (р≤0,05); максимальная концентрация селена- в I , II и V (различия между I и II, а также между II и V рационами не65достоверные),минимальная – в III и IV (различия не достоверные),максимальная концентрация цинка – в I, минимальная в V рационе, (различиямежду II и III рационами не достоверные).Чтобы сбалансировать рацион по минеральному составу, необходимоточно знать потребность организма в макро- и микроэлементах.