Диссертация (1151292), страница 30
Текст из файла (страница 30)
Изменения изученных параметров относительно контроля в образцах, окрашенных флуорохромом, передоблучением, были выражены в меньшей степени, чем в облученных, но безокрашивания.После инкубации (в течение 3 часов при Т=380 С) облученных образцовспермы, обнаруженные сразу после облучения изменения, сохранялись практически на том же уровне (рис.
31).Рис. 31. Изменения относительно контроля параметровсперматозоидов после воздействия некогерентного излучения405 нм 0,125 мкВт/мм2 в проточном режиме и инкубации (38ºС)в течение 3 ч.При переходе на длину волны 365 нм с использованием того же излучателяИ-3 и тех же условий проведения эксперимента было обнаружено, что характер177негативного воздействия УФ-излучения на сперматозоиды соответствовал таковому при воздействии излучения 405 нм (рис. 32).Рис.
32. Изменения относительно контроля параметровсперматозоидов сразу после воздействия некогерентного излучения365 нм 0,125 мкВт/мм2 в проточном режимеПри этом отмечено, что при инкубации негативные изменения по отношению к контролю прогрессировали (рис. 33).Рис. 33. Изменения относительно контроля параметровсперматозоидов после воздействия некогерентного излучения365 нм 0,125 мкВт/мм2 в проточном режиме и инкубации (38ºС)178в течение 3 ч.Рис. 34. Изменения относительно контроля параметровсперматозоидов сразу после воздействия некогерентного излучения405 нм 2 мкВт/мм2 в проточном режимеУвеличение мощности излучения (405 нм в 8 раз с помощью излучателяИ-4 (до 2 мкВт/мм2) приводило к резкому проявлению фотосенсибилизирующего действия флуорохрома, хотя количественный характер измененийпри облучении без флуорохрома соответствовал таковому излучателя И-3 (Рис.34).С другой стороны, действие излучения при 365 нм (излучатель И-4, (2мкВт/мм2) сразу после воздействия привело к резким негативным изменениямисследованных параметров (рис.
35).179Рис. 35. Изменения относительно контроля параметровсперматозоидов сразу после воздействия некогерентного излучения3655 нм 2 мкВт/мм2 в проточном режимеИнкубация тех же образцов спермы в течение трех часов в термостате (380)привела к полной потере подвижности 90% -- 95% клеток, следовательно, последний вариант облучения приводит, вероятно, к гибели клеток, которая, однако наступает не сразу, а в течение 3 –4 часов после лучевого воздействия.Таким образом, воздействие лазерного УФ-излучения (365 нм) губительнодля сперматозоидов даже при кратковременной (0,02 – 0,07 с) экспозиции.На основании проведенных исследований разработаны и утверждены вустановленном порядке методические рекомендации «Биологический мониторинг качества спермы, разделенной по полу быков-производителей.
Методы исследований физических, биологических свойств и морфофункциональный анализ сексированного семени» (№ МЭ 1/0025, от 16 октября 2017 года). Классифицированные полученные данные наших исследований подвергали биометрической обработке.Результаты расчетов представлены в Таблицах 20, 21, 22.Таблица 20 – Результаты расчётов по сексированному семениСредняя арифметическаяКонцентрация мл/дозеОбщая подвижность (анализатор), %Критерийдостоверности2,32±0,10*23,9836,58±1,20*30,420,82±0,04*23,11Количество с ППД (анализатор)млн/дозе180Выживаемость, %11,60±1,12*10,3217,17±0,73*23,55Целостность акросомы, %95,96±0,48*201,69Аномальные формы, %9,13±0,82*11,10Индекс фрагментация ДНК, %6,10±0,53*11,44Скорость движения (быстрые),%Статистическая значимость: *p-значение <0,001.
Следовательно, полученные средние арифметические имеют высокую достоверность.Величина критерия достоверности для средней арифметической всех показателей больше третьего порога достоверности ( p≤0,001).Таблица 21 – Результаты расчётов биомеханических показателей отечественного семениСредняя арифметическаяКонцентрация мл/дозеОбщаяподвижность(анализатор), %Критерий достоверности37,02±0,53*70,4540,23±0,27*151,7116,68±0,22*75,9615,53±0,41*38,1220,75±0,23*90,2994,76±0,32*291,718,14±0,32*25,573,94±0,25*16,00Количество с ППД (анализатор)млн/дозеВыживаемость, %Скоростьдвижения(быстрые), %Целостностьакросомы,%Аномальные формы, %ИндексДНК, %фрагментация181Статистическая значимость: *p-значение <0,001.
Следовательно, полученные средние арифметические имеют высокую достоверность.Величина критерия достоверности для средней арифметической всех показателей больше третьего порога достоверности ( p≤0,001).Далее проводили оценку достоверности разницы между средними двух выборок. Для этого определяли разность между двумя средними арифметическимии среднюю ошибку разности.Фактически полученные значения критерия достоверности рассчитываютсяпо формуле (1):(1),Где t d – это критерий достоверности;Х 1 – это большая величина из двух средних арифметических;Х 2 – это меньшая величина из двух средних арифметических;m1, m2 – квадраты ошибок средней арифметической по каждой выборкеЧисло степеней свободы ν=n1+n2-2=53+109-2=160.Стандартное значение критерия достоверности (по Стьюденту) определялипри трёх уровнях вероятности с учётом числа степеней свободы ν=160:- при p=0,95 tтабл=1,96- при p=0,99 tтабл=2,56- при p=0,999 tтабл=3,29182Таблица 22– Сравнение фактически полученных значений критерия достоверности со стандартным значениемДостоверностьT наблT набл по модулю-64,9664,96p≤0,001-2,962,96p≤0,01-71,2971,29p≤0,001-3,293,29p≤0,01-4,684,68p≤0,012,082,08p≤0,051,131,13p>0,13,673,67p≤0,001различийТаким образом, при сравнении фактически полученных значений критериядостоверности со стандартным значением, видно, что по показателям: Концентрации мл/дозе, Количества с ППД (анализатор) млн/дозе, Индексу фрагментация ДНК, % разность достоверна при p> 0,999 (или p< 0,001); по показателям:общая подвижность, %, выживаемость, %, скорость движения (быстрые), % разность достоверна при p> 0,99 (или p< 0,01); по показателю целостности акросомы, % разность достоверна при p> 0,95 (или p< 0,05), по показателю аномальныеформы, % - разность недостоверна.Полученные данные позволяют заключить, что данная выборка являетсярепрезентативной, так как достаточно точно представляет количественные соотношения генеральной совокупности – по всем показателям, кроме одного, разность между средними значениями двух выборок достоверна при p>0,95 (или p<0,05).1832.7 Заключение по разделуПолучение животных заданного пола и желательных генотипов на основедостижении современной биотехнологии в области животноводства можно рассматривать в качестве инструмента для последовательного улучшения генофонда разводимых пород крупного рогатого скота.
В решении этого вопроса значительную и все возрастающую роль играют новые молекулярно-генетические методы исследований, которые могут принципиально изменить подходы к раннемупрогнозированию продуктивных качеств животных и диагностике наследственных заболеваний. Проведенные исследования дают все основания полагать, чтовоздействие лазерного УФ-излучения (365 нм) губительно для клеток эякулята,и даже при очень кратковременном его воздействии (0,02-0,07 с), скорость сперматозоидов падает в семь раз. Данный факт дает нам основание полагать о недоброкачественности сексированного семени, что сопряжено с данными, поступающими из ежегодных отчетов по воспроизводству из хозяйств системы АПКРоссии.Изучение проблемы скрытого генетического груза у крупного рогатого скота рассматривают в качестве перспективного приема оздоровления генофондаплеменного поголовья и повышения сохранности молодняка.
Интенсивное использование в современном скотоводстве лучших быков-производителей различных пород позволяет не только значительно повысить генетический потенциал поголовья, но и способствует распространению различных генетическихдефектов в рамках пород, при которых наблюдается снижение воспроизводительной способности и плодовитости племенных животных, резистентности ремонтного молодняка, продолжительности хозяйственного использования животных.
Все это, в конечном счете, оказывает отрицательное влияние на рентабельность отрасли.Контроль генетического материала крупного рогатого скота (спермодоз быков - производителей) на наличие мутантных аллелей и исключение спермы носителей из племенной работы позволит снизить распространенность генетиче-184ских аномалий в отечественной популяции животных и не допустить их массового распространения.Полученные результаты исследования спермопродукции, разделенной пополу, используемой для искусственного осеменения по морфофункциональнымпоказателям, скрининговые исследования не разделенной по полу спермопродукции, направленные на оценку частоты встречаемости возбудителей инфекционных болезней крупного рогатого скота молекулярно-генетическими методами,станут ключевыми механизмами в процедуре оценки генетического материала вцелях обеспечения должного ветеринарно-санитарного контроля спермопрдукции, как импортного, так и отечественного производства.185ГЛАВА 3. Усовершенствование методов выявления и идентификациивозбудителей инфекционных болезней животных в генетическомматериале, поступающем в Российскую Федерацию из-за рубежа3.1.
Изучение контаминации спермы крупного рогатого скотаотечественного и зарубежного производства возбудителями бактериальныхинфекцийПоловые клетки в обязательном порядке исследуют на ряд инфекционных испецифических патологий. При указании информации о наличии генетическиханомалий, список пополняют по мере поступления сведений о новом наследственном дефекте и методах его выявления.
Перечень инфекционных агентовпостоянно актуализируют с учетом потенциальных рисков распространения болезней, большое внимание уделяют при этом биологическим параметрам качества спермы.В отношении оценки качества и безопасности как зарубежной, так и спермыбыков в России в настоящее время действует ГОСТ 26030, согласно которомуопределение патогенных и условно-патогенных бактерий и грибов в спермодозах производят микробиологическим методом по ГОСТ ISO 8607 и ГОСТ 32198,а методы определения вирусов и микоплазм не регламентированы. Для оценкисуществующих рисков и, следовательно, необходимости усовершенствованияправил контроля спермопродукции актуальным является проведение её исследований бактериологическим способом и методом ПЦР для выявления инфекционных агентов.Возбудителей инфекционных болезней животных выявляли как в образцахотечественной спермопродукции, так и в спермопродукции, ввезенной на территорию РФ из стран Европы и Америки.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
