Диссертация (1145911), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Д. О. Отта». Оценивали качество эмбрионов на 4 - 5 суткиразвития (в день переноса эмбрионов в полость матки) и частоту появления эмбрионов схромосомным дисбалансом с учетом кариотипа супруга. Показатель качества эмбрионоврассчитывался как отношение числа эмбрионов на стадии бластоцисты на 5 сутки развития(бластоцисты класса 2AA и лучше (Gardner et al., 1999)), или на стадии морулы на 4 сутки(класса Grade 4 (Tao et al., 2002), к количеству эмбрионов, для которых была проведенапроцедура биопсии бластомеров на третьи стуки развития, выраженное в %.
Частотуэмбрионов схромосомнымдисбалансомрассчитываликакотношениечисла 63 несбалансированных по анализируемым хромосомам или анеуплоидных эмбрионов к числуэмбрионов, для которых была проведена процедура биопсии бластомеров на третьи стукиразвития, выраженное в %.Таблица 7.
Качество эмбрионов и частота появления эмбрионов с хромосомнымдисбалансом в протоколах ЭКО с предимплантационной генетической диагностикой взависимости от кариотипа супруга при нормальном кариотипе супруги и ее возрасте ≤35 летЧислоКариотип супругаэмбрионов(n)Эмбрионы высшегоЭмбрионы cкачества на 4-5 суткихромосомнымразвитиядисбалансомn%n%47,XYY3266,67133,3346,XY,t(1;2)(q41;q34)12216,671210046,XY,t(2;9)(q11.2;q34)7114,29710045,XY,der(14;21)(q10;q10)11436,36763,6446,XY,inv(7)(p22;q11.2)50048046,XY6583,3335046,XY8337,545046,XY44100250Доля эмбрионов высшего качества у пациентов со структурными аномалиямикариотипа составляла 16,83±7,48% и была достоверно ниже таковой в группе пациентов снормальными кариотипами (73,61±18,69%) (p≤0,05, t критерий Стьюдента) (рисунок 5).
Приэтом доля эмбрионов высшего качества на 4-5 сутки развития у пациента с дисомиейхромосомы Y была выше таковой у носителей структурных перестроек и соответствовалатаковой у пациентов с нормальными кариотипами.Доля эмбрионов с хромосомным дисбалансом в группе пациентов со структурнымианомалиями составила 85,91±8,79% и была выше таковой в группе пациентов снормальными кариотипами (50%) (рисунок 5).
Следует отметить, что у пациента скариотипом 47,XYY доля анеуплоидных эмбрионов не отличалась от таковой у пациентов снормальными кариотипами. 64 А)Б)Рисунок 5. А) доля эмбрионов высшего качества и Б) соотношение эмбрионов сосбалансированнымкариотипомихромосомнымдисбалансомупациентовсоструктурными аномалиями и нормальным кариотипами3.4. Анализ морфологии головок эякулированных сперматозоидов пациентов снарушением фертильности Анализ морфологии головок сперматозоидов проведен на препаратах эякулята 224пациентов. Согласно «строгому критерию Крюгера» выделяли следующие формы головок:нормальная, с небольшой патологией, маленькая, большая, удлиненная, грушевидная,вакуолизированная, аморфная, двойная, точечная, округлая, с патологией акросомы (Krugeret al., 1986) (рисунок 6). Для каждого пациента анализировали не менее 300 головоксперматозоидов (приложение А таблица 5).
65 нормальнаябольшаямаленькаяаморфнаягрушевиднаяс патологией акросомыудлиненная головкадвойнаяРисунок 6. Формы головок сперматозоидов вакуолизированнаяокруглая 66 В эякуляте пациентов с нарушением фертильности наиболее часто встречалисьсперматозоиды с аморфными и грушевидными головками – 24,05±0,98% и 23,64±1,28%,соответственно. Сперматозоиды с патологией акросомы и с вакуолизированной головкойвстречались в 14,34±1,28% и 12,07±0,81%, соответственно. Сперматозоиды с маленькимиголовками наблюдались в 5,63±0,63%, с удлиненными – в 5,55±0,45%, округлыми –4,91±0,75%, большими – 1,58±0,14%, точечными – 1,43±0,51%.
Наименее часто встречалисьсперматозоиды с двойными головками – 0,44±0,05%. Сперматозоиды с нормальнымиголовками и головками с небольшой патологией встречались в 2,80±0,28% и 3,56±0,21%,соответственно (рисунок 7).Рисунок 7. Частота встречаемости различных форм головок сперматозоидов в эякулятепациентов с нарушением фертильностиПримечание: н – нормальная, н/п – небольшая патология, б – большая, м – маленькая, окр –округлая, ам – аморфная, гр – грушевидная, уд – удлиненная, дв – двойная, вак –вакуолизированная, т – точечная, п/ак – с патологией акросомыУ 33,48% пациентов доминирующей формой головки сперматозоидов былагрушевидная, у 29,91% - аморфная. У 17,86% пациентов преобладали сперматозоиды спатологией акросомы, у 8,04% - с вакуолизированной, у 3,57% - с округлой головкой, у3,313% - с маленькой, у 2,23% - с удлиненной, у 1,34% - с точечной.
У одного пациента вэякуляте преобладали сперматозоиды с небольшой патологией головки (0,45%) (рисунок 8). 67 Рисунок8.Долипациентовсразличнымидоминирующими формамиголовоксперматозоидов.В эякуляте доноров спермы в среднем наиболее часто встречались сперматозоиды спатологией акросомы (29,5±3,97%), с аморфной головкой (18,33±4,87%), нормальнойголовкой (16,17±1,62%) и небольшой патологией головки (11,17±1,87%). Сперматозоиды сгрушевидной, удлиненной, вакуолизированной головкой встречались в среднем в 8,5±2,62%,7,33±1,31% и 5,17±1,4%, соответственно. Наименее часто встречались сперматозоиды сточечной, маленькой, округлой, двойной головками – 2,17±1,22%, 0,83±0,65%, 0,17±0,16%,0,17±0,16%, соответственно.В эякуляте пациентов с аномалиями кариотипа наиболее часто встречалисьсперматозоиды с грушевидными и аморфными головками - 25±4,36 и 22,8±2,93%,соответственно.
Сперматозоиды с удлиненными и маленькими головками, а также спатологией акросомы встречались в 10±3,21%, 9,69±4,13%, 9,06±3,61%, соответственно.Сперматозоиды с вакуолизированными, округлыми, большими и точечными головкамивстречались в 4,69±1,39%, 3,81±1,05%, 3±1,01% и 2,38±0,99%, соответственно.
Наименеечасто встречались сперматозоиды с двойными головками – 1,88%±1,04%. Сперматозоиды снормальными головками и головками с небольшой патологией встречались в 2,81±0,77% и4,94±1,23%, соответственно (рисунок 9) (приложение А таблица 6). 68 Рисунок 9. Частота встречаемости различных форм головок сперматозоидов в эякулятепациентов с нарушением фертильностиПримечание: н – нормальная, н/п – небольшая патология, б – большая, м – маленькая, окр –округлая, ам – аморфная, гр – грушевидная, уд – удлиненная, дв – двойная, вак –вакуолизированная, т – точечная, п/ак – с патологией акросомыУ 43,75% пациентов с аномалиями кариотипа доминирующей формой былисперматозоиды с грушевидными головками, у 37,5% - с аморфными. У 6,25% пациентовдоминировали сперматозоиды с удлиненными, у 6,25% - с маленькими головками, и у 6,25%- сперматозоиды с патологией акросомы.
Рисунок 10. Доли пациентов с аномалиями кариотипа с различными доминирующимиформами головок сперматозоидовПриповторныхспермограммахисходнаяпреобладающаяформаголовоксперматозоидов сохранялась в 46,15% случаев. При этом, во всех случаях смены результатов 69 спермограммы отмечалась и смена доминирующей формы головки сперматозоидов. Однако,если при повторном анализе результаты спермограммы не менялись, то в 66,67% случаяхдоминирующая форма головок сперматозоидов оставалась прежней (приложение А таблица7).3.5. Анализ фрагментация ДНК сперматозоидов при нарушении фертильности С помощью метода флуоресцентного мечения одно- и двунитевых разрывов ДНК –метода TUNEL (Terminal deoxynucleotidil transferase (TdT) – mediated dUTP Nick andLabelling) – был проведен анализ фрагментации ДНК сперматозоидов для 91 пациента снарушением фертильности (рисунок 11) (таблица 8) (приложение А таблица 8).
А)Б)Рисунок 11. Флуоресцентное мечение разрывов ДНК сперматозоидов. Сперматозоиды сА)фрагментированнойфрагментированнойДНК(флуоресцирует(флуоресцируетвзеленомвзеленомспектре)спектре)ииинтактнойБ)сДНК(флуоресцируют в синем спектре)В качестве контроля использовались образцы эякулята доноров спермы (n=12). Долясперматозоидов с фрагментированной ДНК в контрольной группе составила 0,19±0,03(варьировала от 0% до 0,35%).
70 Таблица 8. Фрагментация ДНК сперматозоидов пациентов с нарушением фертильностиДоля сперматозоидов сРезультат спермограммыЧисло пациентов (n)Нормозооспермия90,39±0,12Тератозооспермия530,79±0,08Олигоастенотератозооспермия110,51±0,16Астенотератозооспермия130,50±0,11Астенозооспермия21,04±0,28Олигоастенозооспермия10,1Олиготератозооспермия20Доноры спермы120,19±0,03Поданнымстатистическогоанализапоказателифрагментированной днк (%)долисперматозоидовсфрагментированной ДНК всех групп пациентов, за исключением группы ОАТ, А, ОА и ОТимелинормальноераспределение(критерийКолмогорова-Смирнова).Спомощьюдисперсионного анализа (ANOVA, критерий Краскела-Уоллиса) было показано достовернозначимое отличие средних значений в исследуемых группах (p≤0,05).
Доля сперматозоидов сфрагментированной ДНК у пациентов с нормозооспермией не отличалась от таковой вконтрольной группе доноров спермы. Достоверно значимые отличия обнаружены присравнении доли сперматозоидов с фрагментированной ДНК в группе пациентов стератозооспермией и контрольной группы,и в группе с тератозооспермией инормозооспермией. В остальных случаях при попарном сравнении средних исследуемыхгрупп достоверных отличай обнаружено не было. Принимая во внимание нормативы ВОЗ 2010 года (WHO, 2010) долю сперматозоидов сфрагментированной ДНК также сравнивали в 5 группах: контрольная группа доноровспермы, нормозооспермия (по нормам ВОЗ 1999 г.), нормозооспермия (по нормам ВОЗ 2010г.), тератозооспермия (по нормам ВОЗ 1999 г.), тератозооспермия (по нормам ВОЗ 2010 г.).Результаты представлены в таблице 9.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
