Диссертация (1145911), страница 17
Текст из файла (страница 17)
При этом, инверсии хромосом 1, 3,5, 6, 10, как показано, наиболее часто ассоциированы с нарушением фертильности (Krauszand Forti, 2000). В нашем исследовании, у пациента, в кариотипе которого обнаруженаинверсия хромосомы 1, наблюдалась ОАТ. Большинство описанных в литературы случаевносительства инверсии хромосомы 1 ассоциировано с нарушением фертильности (Meschedeet al., 1994; Krausz and Forti, 2000). Хотя, следует отметить, что, не смотря на то, что вбольшинстве описанных случаев размеры инвертированных фрагментов совпадали, точкиразрыва ДНК были уникальными.Снижение подвижности и доли морфологически нормальных сперматозоидов, но неконцентрации, было отмечено и у пациента с двумя перицентрическими инверсиями вкариотипе(кариотип46,XY,inv(4)(p12;q21),inv(10)(p11;q21)).Вероятно,вобеихинверсионных петлях кроссинговер не препятствует нормальному расхождению хромосом ипрохождению мейоза.Интересноотметить,чтовслучаеинверсиихромосомы7(кариотип46,XY,inv(7)(p22;q11.2)), наблюдалось лишь снижение доли морфологически нормальныхсперматозоидов, а концентрация и подвижность оставались в норме.
При этом результатыпервичного и повторного спермиологических анализов совпадали. Тем не менее, у данногопациента доля сперматозоидов с фрагментированной ДНК была значительно выше таковой удоноров спермы. Кроме того, для данного пациента была проведена ПГД в цикле ЭКО.Отмечена высокая доля эмбрионов с хромосомным дисбалансом и отсутствие эмбрионоввысшего качества на 5 сутки культивирования in vitro.
Возможно, наличие инверсии вданномслучаенеснижаяпродуктивностимейозаприводиткобразованиюнесбалансированных гамет, которые, скорее всего, попадают в эякулят путем абортивногоапоптоза.Хромосомные аномалии повышают частоту образования эмбрионов с хромосомнымдисбалансом (Chantot-Bastaraud et al., 2008; Pylyp et al., 2013). Во всех проанализированных вданной работе эмбриологических протоколах в циклах ЭКО с последующим ПГД дляносителей хромосомных перестроек отмечено увеличение доли эмбрионов с хромосомнымдисбалансомвзаимосвязано,иснижениеи,доливозможно,эмбрионовпредставляетвысшегособойкачества,процессчто,естественнойнесбалансированных и/или анеуплоидных эмбрионов (Baltaci et al., 2006).
по-видимому,селекции 85 Аномалии кариотипа, как числовые, так и структурные, затрудняющие расхождениехромосом в мейозе, помимо снижения спермопродукции, могут являться причиной массовойгибели клеток в результате апоптоза. В случае нормальной концентрации сперматозоидов вэякуляте наиболее вероятен феномен абортивного апоптоза, при которым клетки, в которыхзапускается программа программируемой клеточной гибели, смогли ее избежать. Именнопоэтому мы проанализировали уровень фрагментации ДНК сперматозоидов у пациентов снарушениями кариотипа.
За исключением отдельных случаев, описанных выше, общая долясперматозоидов с фрагментированной ДНК была выше таковой в контрольной группедоноров спермы, при этом наибольшая доля сперматозоидов с фрагментированной ДНКнаблюлась у носителей робертсоновских транслокаций между хромосомами 13 и 14 иперицентрической инверсии хромосомы 7.Для пациентов с аномалиями кариотипа был характерен широкий диапазонварьирования параметров спермиологического анализа и уровня фрагментации ДНКсперматозоидов. Таким образом, аномалии кариотипа не всегда приводят к нарушениюсперматогенеза. Однако у носителей структурных аномалий кариотипа повышается частотаобразования несбалансированных гамет, которые могу принять участие в оплодотворении,увеличивая вероятность появления эмбрионов с хромосомным дисбалансом.Варьирование показателей спермиологического анализа было отмечено и дляпациентов с нормальным мужским кариотипом, к которому относят и полиморфныеварианты хромосом, стабильно наследуемые в ходе делений клетки, сохраняющиеся вонтогенезе, не влияющие на фенотип различия между гомологичными хромосомами,представляющие собой нормальную изменчивость хромосом (Баранов и Кузнецова, 2007).Вопрос влиянии тех или иных вариантов хромосом на репродуктивную функцию человекаостается открытым (Sahin et al., 2008; Chopade et al., 2012).
В настоящем исследовании средипациентов из бесплодных супружеских пар доля носителей полиморфных вариантовхромосом составила 11,28%. По данным других исследователей, доля носителейполиморфных вариантов хромосом среди мужчин с нарушением фертильности составляет от10 до 17% (Chopade et al., 2012).В нашем исследовании нарушение фертильности наиболее часто сопровождалосьснижениемдолиморфологическинормальныхформсперматозоидов,илитератозооспермией.
При этом, нормальные показатели спермиологического анализа былиотмечены у 5,18% пациентов. При использовании для интерпретации результатовспермограмм нормативов ВОЗ 2010 года, в которых были пересмотрены референсныезначения основных параметров, доля пациентов с нормозооспермией составила 26,7%, хотя,так же как и при использовании нормативов ВОЗ 1999 года, в большинстве случаев 86 нарушение фертильности сопровождалось снижением доли морфологически нормальныхсперматозоидов. Таким образом, в трети случаев при использовании разных нормативов ВОЗодинаковые результаты спермограмм были интерпретированы по-разному.Также мы показали, что показатели спермограммы, особенно концентрация иподвижность сперматозоидов, могут меняться со временем.
Концентрация сперматозоидовявляется одним из важнейших параметров оценки эякулята, однако многочисленные данныепоказывают значительные колебания этого параметра у одного и того же мужчины в течениевремени (WHO, 1999, 2010). Существуют данные о зависимости концентрации иподвижности сперматозоидов от возраста мужчины, времени года и даже времени суток(Jorgensen et al., 2001).
В нашем исследовании было показано, что в половине случаев при повторномпроведении результат спермограммы изменился. При этом, наиболее часто менялисьпоказатели концентрации и подвижности, а снижение доли морфологически нормальныхсперматозоидов оставалось относительно постоянным. Так, практически всегда приповторном анализе эякулята доля морфологически нормальных сперматозоидов не менялась.Возможно, варьирование концентрации и подвижности сперматозоидов в большей мереопосредовано действием внешних факторов, в то время как морфология сперматозоидовявляется наиболее стабильным параметром, и, вероятнее всего, зависит от ряданаследственных факторов.
Исходя из этого мы проанализировали формы головоксперматозоидов в эякуляте. Было показано, что в эякуляте как пациентов с нарушениемфертильности, так и доноров спермы, наиболее часто встречаются сперматозоиды саморфной и грушевидной головками, а также сперматозоиды с патологией акросомы..Сперматозоиды с морфологически нормальными головками, а также с головками снебольшой патологией встречались в среднем с частотой 2,80±0,28% и 3,56±0,21%,соответственно. В контрольной группе доноров спермы доля сперматозоидов с нормальнойголовкой и головкой с небольшой патологией была выше - 16,17±1,62% и 11,17±1,87%,соответственно.
Помимо ряда физически и психических характеристик, доноры должныиметьзначительноболеевысокиепоказателиспермограммы,чемпациентыснормозооспермией. Дело в том, что для оплодотворения используют не нативный эякулят, акриоконсервированныеобразцыдонорскойспермы,показателикоторыхпослеразмораживания значительно снижаются.Следует учитывать тот факт, что морфологически нормальные сперматозоиды могутиметь различные генетические дефекты. Частота анеуплоидии в сперматозоидах снормальными головками варьирует от 1,3% (Lee et al., 1996) до 3,9% (Martin and Rademaker,1990), а частота структурных перестроек от 6.9% (Lee et al.,1996) до 8,6% (Martin et al, 1992).
87 Действительно, в настоящем исследовании, при анализе частоты образования анеуплоидныхэмбрионов в циклах ЭКО с ПГД у пациентов с нормальными кариотипами было показано,что, в среднем несбалансированные эмбрионы появляются в половине случаев. При этомследует отметить, что оплодотворение в таких протоколах проводится методом ICSI, то естьоператор выбирает морфологически нормальные сперматозоиды или, в случае их отсутствия,сперматозоиды с наименьшими дефектами.Помимо наследственных к нарушению сперматогенеза приводят и экзогенныефакторы. Инфекционные агенты, физические и химические факторы, к которым относятметаллы и их соединения, органические химические вещества, токсины вызываютокислительный стресс, в результате которого нарушается окислительно-восстановительныйстатус клетки, происходит образование АФК, мишенью которых являются липиды инуклеиновые кислоты.
Показано, что действие АФК является основной причинойповреждения ДНК сперматозоидов (Shamsi et al., 2008). В свою очередь, с нарушениемцелостности ДНК сперматозоидов связано до 30% случаев идиопатического, то есть безвидимой причины, мужского бесплодия (SCASA, 2005). В настоящем исследовании былапроведена оценка уровня фрагментации ДНК сперматозоидов пациентов с нарушениемфертильности с учетом результатов спермиологического анализа. Наибольшая долясперматозоидов с фрагментированной ДНК была характерна для пациентов группы Т.Интересно отметить, что при сравнении доли сперматозоидов с фрагментированнойДНК в группах с Т и нормозооспермией, сформированных согласно нормативам ВОЗ 1999 и2010годов,быливыявленыотличия.Так,наименьшаядолясперматозоидовсфрагментированной ДНК отмечена у пациентов с нормозооспермией, установленнойсогласно ВОЗ 1999 года.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
