Автореферат (1144819), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Провести анализ метилирования промоторного региона гена H19 в тканях плаценты убеременных с гестозом и в контрольной группе.Методология исследования. Методология исследования заключалась в применениикомплексного подхода при изучении МФЗ. В работе использованы новые и стандартные методымолекулярной генетики человека, статистики и биоинформатики, а также разработаны новыеподходы для скрининга мутаций на основании технологии биологических микрочипов.Научная новизна исследования. На основании исследования генов-кандидатов, анализа генныхсетей и изучения полногеномных, транскриптомных и эпигеномных характеристик впервые данакомплексная оценка риска гестоза у женщин, артериальной гипертензии и метаболическогосиндрома с ожирением у детей.Показано, что комбинации C/T (rs1801133) по гену MTHFR, 5G/4G (rs1799768) по генуSERPINE1, а также сочетание комбинаций APOE (E3/E3, rs429358, rs7412) x AGTR2 (C/A,rs11091046) являются маркерами повышенного риска гестоза.Впервые установлено, что сочетание комбинаций AGTR2 (A/A, rs11091046) x NOS3 (T/C, илиT/T, или C/C, rs2070744) являются маркерами повышенного риска артериальной гипертензии удетей; комбинация A/A, аллель А гена AGTR2 (rs11091046), а также сочетание комбинаций APOE(E3/E3, rs429358, rs7412) x NOS3 (T/C или T/T, rs2070744) являются маркерами повышенногориска артериальной гипертензии у мальчиков, а сочетание комбинаций AGT (M/T, rs699) x NOS35(C/C, rs2070744) - фактором риска артериальной гипертензии у девочек.
Впервые показано, чтосочетание комбинаций APOE (E2/E3, rs429358, rs7412) x BR1 (BDKRB2) (C/C, rs1799722) x LPL(C/C, rs328) является маркером повышенного риска метаболического синдрома и ожирения удетей; сочетание комбинаций APOE (E3/E3, rs429358, rs7412) x AGT (M/M, или M/T, rs699) –характерно для мальчиков, а сочетание APOE (E2/E3, rs429358, rs7412) x BR1 (BDKRB2) (C/C,rs1799722) и аллель А гена AGTR2 (rs11091046) и С гена LPL (rs328) – для девочек.Впервые установлено, что линейные модели на основе генетических и клинических данныхв сочетании с показателями преморбидного фона обладают наибольшей сбалансированнойточностью предсказания риска мультифакторных заболеваний.Показано, что метод GLM позволяет формировать группы риска развития гестоза иартериальной гипертензии у мальчиков на основании моделей, учитывающих только генетическиеданные: ~0,533 - 0,284*AGTR2 (rs11091046) + 0,333*MTHFR (rs1801133) - 2,210*F2 (rs1799963)(гестоз) и ~ 0,370 - 0,438*AGTR1 (rs5186) + 0,297*AGTR2 (rs11091046) - 0,330*MTHFR (rs1801133)(артериальная гипертензия).Впервые установлено, что модели, рассчитанные с учетом возраста, гипертоническойболезни, тромбозов в анамнезе, желчекаменной болезни, ожирения, эндокринной патологии иполиморфизма генов REN (rs2368564) + F2 (rs1799963) позволяют предсказывать риск гестоза свероятностью до 94%.
Модели, учитывающие возраст, вес, рост, наличие повышенного АД уматери и полиморфизм генов AGTR1 (rs5186) + MTHFR (rs1801133) + ACE (rs4340) позволяютпредсказывать риск артериальной гипертензии у мальчиков с вероятностью около 85%.Установлено, что ассоциативные сети позволяют выявлять общие и специфичные факторыриска сочетанных патологий.Впервые показано, что секвенирование отдельных генов (на примере гена ACVR2A пригестозе) может быть использовано для поиска аллелей риска мультифакторных заболеваний.Установлено, что значимыми молекулярными маркерами риска гестоза являются аллелиrs145399059С, rs17692648С, инсерция insAA в позиции 148642724 гена ACVR2A. Протективныммаркером гестоза является аллель rs17742573G гена ACVR2A.Впервые показано, что при гестозе на фоне гипертонической болезни изменяется уровеньследующих микроРНК плаценты: miR-135b-5p, miR-195-5p, let-7f-5p, miR-34c-5p, miR-1-3p, miR98-5p, miR-223-3p (снижение) и miR-515-3p, miR-31-5p, miR-210-3p, miR-518a-3p, miR-524-3p,miR-518c-3p, miR-520a-3p, miR-515-5p, miR-516a-5p, miR-519e-5p, miR-193b-3p, miR-4532, miR518f-3p, miR-518a-5p, miR-518e-3p (повышение).Теоретическая и практическая значимость результатов исследования.
Теоретическаязначимость работы заключается в получение новых знаний в области патогенеза гестоза,артериальной гипертензии и метаболического синдрома с ожирением у детей. В результате работыустановлены общие механизмы возникновения изученных заболеваний, основанные наприсутствии в генотипе специфических вариантов генов ренин-ангиотензиновой системы, обменагомоцистеина и метаболизма липидов. Разработана новая методология исследования рискамногофакторных заболеваний на основании комплексного подхода с применением молекулярнобиологических, биоинформатических и статистических методов.
Показана значимостьисследования последовательности генов-кандидатов и проведения анализа уровня микроРНК дляпрогноза риска развития многофакторных заболеваний.Практическая ценность работы состоит в том, что:- разработана и внедрена в практику лечебно-профилактических учреждений биочиповаятехнология диагностики наследственной предрасположенности к многофакторным заболеваниям;- разработаны оригинальные алгоритмы выделения с помощью генных сетей общих испецифичных факторов риска многофакторных заболеваний;- предложены и апробированы новые GLM и MDR модели для объективизации результатовкомплексных генетических и клинико-лабораторных исследований с целью формирования группповышенного риска многофакторных заболеваний (гестоз, артериальная гипертензия,метаболический синдром и ожирение);- результаты работы могут служить основой для профилактики, диагностики иперсонализированной терапии гестоза, артериальной гипертензии, метаболического синдрома иожирения у детей.Основные положения, выносимые на защиту.1.Разработанные биочипы обладают высокой чувствительностью и специфичностью длядиагностики наследственной предрасположенности к мультифакторным заболеваниям.62.Определенные аллели генов ренин-ангиотензиновой системы, свертывания крови иметаболизма липидов являются факторами риска гестоза, артериальной гипертензии иметаболического синдрома с ожирением у детей.3.Молекулярно-генетическими маркерами, ассоциированными с риском гестоза, являютсяаллели: rs11091046 гена AGTR2, rs1801133 гена MTHFR, rs1799768 гена SERPINE1, rs1799963 генаF2, rs7412 гена APOE, rs rs2368564 гена REN; артериальной гипертензии у девочек - rs7412 генаAPOE, rs1799983 гена NOS3, rs699 гена AGT, артериальной гипертензии у мальчиков - rs11091046гена AGTR2, rs5186 гена AGTR1, rs7412 гена APOE, rs1799983 гена NOS3, rs1801133 гена MTHFR,rs4340 гена ACE; ожирения и метаболического синдрома у девочек - rs11091046 гена AGTR2, rs328гена LPL, rs7412 гена APOE и rs1799722 гена BR1 (BDKRB2), метаболического синдрома иожирения у мальчиков - rs7412 гена APOE, rs699 гена AGT.4.При отсутствии анамнестических и клинических данных предпочтительно использоватьметод множественного снижения размерности (MDR), а при их наличии - более адекватнолинейное моделирование (GLM).
Тестирование определенных аллелей генов-кандидатов,дополненное расчетами коэффициента соотношения шансов (OR), и оценкой риска на основанииMDR и GLM моделей позволяет сформировать группу риска по мультифакторным заболеваниям.5.Ассоциативные сети позволяют выявлять общие и специфические факторы рискасочетанных патологий.6.Целевое NGS секвенирование позволяет идентифицировать новые маркеры заболевания.Значимыми молекулярными маркерами риска гестоза являются аллели rs145399059С,rs17692648С, инсерция insAA в позиции 148642724 гена ACVR2A.
Протективным маркеромгестоза является аллель rs17742573G гена ACVR2A.7.Маркером гестоза на фоне гипертонической болезни является изменение уровня микроРНКв плаценте: miR-135b-5p, miR-195-5p, let-7f-5p, miR-34c-5p, miR-1-3p, miR-98-5p, miR-223-3p(снижение) и miR-515-3p, miR-31-5p, miR-210-3p, miR-518a-3p, miR-524-3p, miR-518c-3p, miR520a-3p, miR-515-5p, miR-516a-5p, miR-519e-5p, miR-193b-3p, miR-4532, miR-518f-3p, miR-518a5p, miR-518e-3p (повышение).Степень достоверности и апробация результатов работы. Работа проведена адекватнымисовременными методами на обширном экспериментальном материале (более 1100 образцовбиоматериала пациентов).
Все полученные результаты подвергнуты корректной статистическойобработке, которая позволяет подтвердить их достоверность. Обоснованность выводов, сделанныхавтором, определяется высоким методическим уровнем работы с использованием современногопакета программ для статистической обработки результатов с применением достоверного уровнязначимости.Материалы диссертационной работы были представлены и обсуждены на следующихроссийских и международных конференциях и конгрессах: «XI Конгресс педиатров России«Актуальные проблемы педиатрии», 2007, Москва; «Фундаментальная наука и клиническаямедицина», 2007, Санкт-Петербург; «1-ая Международная научная школа «Наноматериалы инанотехнологии в живых системах», 2009, Пансионат «Заря», Московская область, Ступинскийрайон; «Российский конгресс с международным участием «Молекулярные основы клиническоймедицины – возможное и реальное», 2010, 2015, Санкт-Петербург; «Постгеномные методыанализа в биологии, лабораторной и клинической медицине», 2010, Москва; «II всероссийскаянаучно-практическая конференция с международным участием «Медико-биологические аспектымультифакториальной патологии», 2011, Курск; «Всероссийская конференция с международнымучастием «Пренатальная диагностика и генетический паспорт – основа профилактическоймедицины в век нанотехнологий», 2012, Санкт-Петербург; «Workshop The 3rd OpenGENE YoungInvestigator Workshop in The Baltic Region «Biobanking, New Technologies, Complex Genetic Traitsand Personalized Medicine», 2012, Tartu, Estonia; «7-ая Всероссийская научно-практическаяконференция с международным участием «Здоровье – основа человеческого потенциала:проблемы и пути их решения», 2012, Санкт-Петербург; «XX Российский национальный Конгресс«Человек и Лекарство», 2013, Москва; «ДОНОЗОЛОГИЯ-2013», 2013, Санкт-Петербург; «VIIIВсероссийская научно-практическая конференция с международным участием «Молекулярнаядиагностика-2014», 2014, Москва; «VI съезд Вавиловского общества генетиков и селекционеров»,2014, Ростов-на-Дону; «X научная конференция «Генетика человека и патология: проблемыэволюционной медицины», 2014, Томск; «VII съезд Российского общества медицинскихгенетиков», 2015, Санкт-Петербург; «III Национальный конгресс «Дискуссионные вопросысовременного акушерства», 2015, Санкт-Петербург; «Международная научная конференция7НаучногоПаркаСПбГУ«Трансляционнаябиомедицина:современныеметодымеждисциплинарных исследований в аспекте внедрения в практическую медицину», 2015, СанктПетербург; и на научных семинарах лаборатории пренатальной диагностики ФГБНУ «НИИ АГиРим.Д.О.Отта» и кафедры генетики и биотехнологии СПбГУ.Кроме того, результаты работы были представлены в виде постерных докладов наЕвропейских конгрессах по генетике человека (European Congress of Human Genetics Conference(ESHG), 2006, Amsterdam, The Netherlands; 2007, Nice, France; 2008, Barcelona, Spain; 2010,Gothenburg, Sweden; 2011, Amsterdam, Netherland; 2013, Paris, France; 2015, Glasgow, Scotland,United Kingdom); на конференции по перспективным исследованиям в биологии (BiologieProspective - Santorini Conference), 2008, Santorini Island, Greece; V съезде ВОГиС, 2009, Москва;международной конференции «Генетика в России и мире», посвященной 40-летию Институтаобщей генетики им.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
