Диссертация (1144791), страница 43
Текст из файла (страница 43)
В нашем исследованиибыло показано, что повторные ишемические стимулирующие воздействияприводят к изменению характера динамики летальности у крыс и песчанок.Таким образом, в нашем исследовании проведена оценка влиянияразличных вариантов применения ИПреК в острую фазу ишемическогоповреждения головного мозга у крыс и после обратимой глобальной ишемиипереднегомозгаумонгольскихпесчанок.Эффектишемическогостимулирующего воздействия, предшествующего повреждающей ишемии, можетобладать как нейропротективным, так и повреждающим действием.
Это действиесущественным образом зависит от количества ишемических стимулирующихвоздействий и их продолжительности. Не исключено, что формированиюкумулятивного повреждения структур и тканей головного мозга под действиемповторных ишемических стимулирующих воздействий ИПреК в большей степениспособствуют короткие периоды реперфузии, разделяющие ишемическиестимулы. В нашем исследовании на нескольких экспериментальных моделяхишемии-реперфузии головного мозга было установлено, что наибольшейнейропротективной активностью обладает один прекондиционирующий эпизодишемического стимулирующего воздействия, выполненный за 24 часа доповреждающей ишемии, в то время как применение нескольких ишемическихстимулов непосредственно перед тестовой ишемией может приводить кдополнительномуповреждениюголовногомозга.Этизакономерностинеобходимо учитывать при дальнейшем изучении нейропротективных эффектовИПреК и внедрении данного подхода в практику.236ГЛАВА 6.СОВМЕСТНОЕ ПРИМЕНЕНИЕ ПРЕ- И ПОСТКОНДИЦИОНИРОВАНИЯИ НЕЙРОПРОТЕКТОРА ЦИТИКОЛИНА ПРИ ИШЕМИЧЕСКОМ ИРЕПЕРФУЗИОННОМ ПОВРЕЖДЕНИИ ГОЛОВНОГО МОЗГАОсобый интерес представляет изучение эффектов совместного примененияИПостК и ИПреК с фармакологическими препаратами.
Эффекты синергизма илиантагонизма от совместного применения позволят не только расширитьпредставления о механизмах ИПостК и ИПреК, но и будут способствоватьформированию протоколов применения кондиционирования в клиническойпрактике в рамках программы трансляционной медицины. С этой цельюисследовалсяэффектсочетанногопримененияИПостКилиИПреКснейропротектором широкого спектра действия - цитиколином (Цераксон, FerrerInternacional, Испания). Цитиколин один из наиболее хорошо изученныхнейропротекторов,показавшихвысокуюэффективностькаквэкспериментальных исследованиях, так и в клинической практике (Saver J.L.,2008; Sahota P., Savitz S.I., 2011). Цитиколин - единственный препарат,эффективность которого на основании проведенного мета-анализа отмечена вЕвропейских рекомендациях по ведению больных ишемическим инсультом (ESO,2008).
Цитиколин был открыт Е. Kennedy в 1956 году как эндогенное соединение,являющееся посредником в биосинтезе фосфатидилхолина, который являетсяключевымфосфолипидомклеточныхмембран(KennedyE.P.,1956).Исследования последних лет показали, что цитиколин участвует в стабилизациимембран, способствует синтезу нуклеиновых кислот, белков, ацетилхолина, атакже других нейромедиаторов, снижает образование свободных радикалов,окислениежирныхкислот,обладаетпротивовоспалительнымиантиапоптотическим действием (Krupinski J. et al., 2002; Sahota P., Savitz S.I.,2011).2376.1 Совместное применение ишемического посткондиционирования ицитиколина при ишемии-реперфузии головного мозга6.1.1 Протоколы экспериментов по изучению эффектов совместного примененияишемического посткондиционирования и цитиколина при ишемии-реперфузииголовного мозга6.1.1.1 Совместное применение ишемического посткондиционирования ицитиколина при глобальной ишемии-реперфузиипереднего мозга у монгольских песчанокИзучение эффекта совместного применения ИПостК и цитиколина былопроведено на модели глобальной ишемии-реперфузии переднего мозга умонгольских песчанок.
Для решения поставленной задачи был разработанпротокол проведения эксперимента (рис. 6.1). Цитиколин применялся однократновнутрибрюшинно в дозе 500 мг/кг в момент начала ишемии (Saver J.L., 2008;Turkkan A. et al., 2010). Животные случайной выборкой были распределены на 8экспериментальных групп:1) «Ишемия 2а» (n=10). В группу входили песчанки, перенесшие 7-минутнуюишемию переднего мозга с последующим реперфузионным периодом 2суток.2) «Ишемия 7а» (n=10).
То же, что и в предыдущей группе, но с реперфузией втечение 7 суток.3) «ПостК 2а» (n=10). В группу входили песчанки, которым были выполнены3 эпизода по 15 с реперфузии и 15 с реокклюзии после 7-минутной ишемиипереднего мозга с последующей реперфузией, длительность которойсоставляла 2 суток.4) «ПостК 7а» (n=10). То же, что в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.5) «ИшемияЦ 2а» (n=8). В группу входили животные, перенесшие 7-минутнуюишемию переднего мозга и введение Цитиколина с последующимреперфузионным периодом 2 суток.2386) «ИшемияЦ 7а» (n=8). То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.7) «ПостКЦ 2а» (n=8).
Животным этой группы были выполнены 3ишемических эпизода по 15 с реперфузии и 15 с реокклюзии после 7минутной ишемии переднего мозга и введен Цитиколин. Длительностьреперфузионного периода составляла 2 суток.8) «ПостКЦ 7а» (n=8). То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.ГруппаИшемияИПостК7 мин15с/15сРеперфузия2 суток7 сутокИшемия 2аИшемия 7а//ПостК 2аПостК 7а//↓*ИшемияЦ2а↓*ИшемияЦ7а//↓*ПостКЦ 2а↓*ПостКЦ 7а//Рис. 6.1. Схема протокола эксперимента, направленного на изучение нейропротективногоэффекта совместного применения ишемического посткондиционирования и нейропротекторацитиколина при глобальной ишемии-реперфузии переднего мозга у песчанок монгольских. ↓* внутрибрюшинное введение цитиколина в дозе 500 мг/кг.Спустя 2 и 7 суток оценивали неврологический статус животных илетальность. Выживших животных наркотизировали и проводили декапитацию,извлекали мозг из полости черепа и фиксировали для дальнейшего проведенияанализа структур головного мозга.2396.1.1.2 Совместное применение ишемического посткондиционирования ицитиколина при полной глобальной ишемии-реперфузии головного мозга у крысИзучение эффекта совместного применения ИПостК и цитиколина былопроведено при полной глобальной ишемии-реперфузии головного мозга у крысWistar.
Для решения поставленной задачи был разработан протокол проведенияэксперимента (рис. 6.2). Цитиколин вводился внутрибрюшинно в дозе 500 мг/кг вмомент начала ишемии и далее такую же дозу вводили каждые 24 часа напротяжении 2 и 7 суток. Животные случайной выборкой были распределены на 8экспериментальных групп:1) «Ишемия 2б» (n=10). В группу входили крысы, перенесшие 10-минутнуюишемию с последующим реперфузионным периодом 2 суток.2) «Ишемия 7б» (n=10).
То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.3) «ПостК 2б» (n=10). В группу входили крысы, которым были выполнены 3стимулирующих воздействия по 15 с реперфузии и 15 с реокклюзии после10-минутной ишемии мозга с последующей реперфузией, длительностькоторой составляла 2 суток.4) «ПостК 7б» (n=13). То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.5) «ИшемияЦ 2б» (n=7).
В группу входили животные, перенесшие 10минутнуюишемиюголовногомозгаивведениеЦитиколинаспоследующим реперфузионным периодом 2 суток.6) «ИшемияЦ 7б» (n=9). То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.7) «ПостКЦ 2б» (n=8). В группу входили животные, которым были выполнены3 стимулирующих воздействия по 15 с реперфузии и 15 с реокклюзии после10-минутной ишемии головного мозга с последующей реперфузией,длительностькоторойсоставляла2суток.Цитиколинвводился240внутрибрюшинно в дозе 500 мг/кг в момент ишемии и далее такую же дозувводили каждые 24 часа на протяжении 2 суток.8) «ПостКЦ 7б» (n=11).
То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.ГруппаИшемияИПостК10 мин15с/15сРеперфузия2 суток7 сутокИшемия 2бИшемия 7б//ПостК 2бПостК 7б//↓*↓*↓*↓*ИшемияЦ2б↓*↓*ИшемияЦ7б↓*//↓*↓*ПостКЦ 2б↓*↓*ПостКЦ 7б↓*↓*//Рис. 6.2. Схема протокола эксперимента, направленного на изучение нейропротективногоэффекта совместного применения ишемического посткондиционирования и нейропротекторацитиколина при полной глобальной ишемии головного мозга у крыс. ↓* - внутрибрюшинноевведение цитиколина в дозе 500 мг/кг.Спустя 2 и 7 суток после проведения хирургических манипуляцийоценивали неврологический статус и летальность животных. Выживших крысповторно наркотизировали, извлекали мозг из полости черепа для дальнейшегопроведения анализа отдельных структур головного мозга.2416.1.2 Эффекты совместного применения ишемического посткондиционирования ицитиколина на различных экспериментальных моделяхишемии-реперфузии головного мозгаГипотетически можно ожидать усиления нейропротективного эффекта приодновременномприменениинесколькихзащитныхвоздействий.Однакоисследований, направленных на изучение эффектов совместного примененияИПостК и лекарственных препаратов с нейропротективной активностью, донастоящего времени не проводилось.В данном фрагменте работы представлены результаты совместногоприменения ИПостК и нейропротектора цитиколина при глобальной ишемииреперфузии переднего мозга у монгольских песчанок и при полной глобальнойишемии-реперфузии головного мозга у крыс.Ко 2-м суткам реперфузионного периода у животных с ишемией ивведением цитиколина (группа «ИшемияЦ 2а») наблюдались умеренныеневрологические нарушения в виде вялости или взъерошенности волосяногопокрова, при этом значимых различий в значении индекса неврологическогодефицита при сравнении с таковым в группе «Ишемия 2а» обнаружено не было(Р>0,05).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
