Диссертация (1144791), страница 45
Текст из файла (страница 45)
В отдаленный реперфузионный период вгруппе «ПостКЦ 7б» показатель летальности также значимо не отличался оттакового в группах «Ишемия 7б», «ПостК 7б» и «ИшемияЦ 7б» (P>0,05) (табл.6.4).Ко 2-м суткам реперфузионного периода применение цитиколина согласнопротоколу при полной глобальной ишемии головного мозга у крыс (группа«ИшемияЦ 2б») способствовало значимому увеличению числа морфологическинеизмененных нейронов в слое III коры мозга на 20,4% при сравнении с таковымв группе «Ишемия 2б» (P<0,05); к 7-м суткам реперфузионного периода в группе247«ИшемияЦ 7б» отмечалось значимое увеличение числа неизмененных нейронов вслоях II и III коры мозга на 19,8 и 25,9% при сравнении с аналогичнымипоказателями в группе «Ишемия 7б» (P<0,05) (табл.
6.5).Таблица 6.5Количество морфологически неизмененных нейронов в слоях коры мозга крыс вразличные периоды реперфузии после полной глобальной ишемии головногомозга с последующим совместным применением ишемическогопосткондиционирования и цитиколина(на 1 мм2 на срезе)ЭкспериментальнаягруппаИшемия 2бИшемия 7бИшемияЦ 2бИшемияЦ 7бПостК 2бПостК 7бПостКЦ 2бПостКЦ 7бСлои коры головного мозгаII223±15197±16219±13236±11+284±98*254±11++277±11*247±10++III201±14189±10243±13**239±15+271±12*247±14++269±10*252±12++V177±12138±9169±11135±13181±11167±10+175±11164±12+Различия значимы: * по сравнению с показателем в группе «Ишемия 2б» при Р<0,01; ** при Р<0,05;сравнению с показателем в группе «Ишемия 7б» при Р<0,05; ++ при Р<0,01.+поСовместное применение ИПостК и цитиколина в ранний реперфузионныйпериод (группа «ПостКЦ 2б») способствовало значимому увеличению числаморфологически неизмененных нейронов в слоях II и III коры мозга на 23,8 и33,3%, соответственно, при сравнении с аналогичными значениями в группе«Ишемия 2б» (P<0,01).
При этом значимых различий в количестве неизменённыхнейронов слоев II и III коры мозга в группах «ПостКЦ 2б» и «ПостК 2б»обнаружено не было (P<0,05) (табл. 6.5). В отдаленный реперфузионный периодсочетанное применение ИПостК и введение цитиколина (группа «ПостКЦ 7б»)способствовало увеличению количества морфологически неизмененных нейроновв слоях II, III и V коры на 24,9 (Р<0,01), 33,3 (Р<0,01) и 21,3% (Р<0,05),соответственно, при сравнении с таковым в аналогичных слоях в группе«Ишемия 7б». Значимых различий в количестве морфологически неизмененных248нейронов слоев II, III и V коры мозга в группах «ИпостКЦ 7б» и «ПостК 7б»обнаружено не было (P>0,05) (табл. 6.5).Ко 2-м суткам реперфузионного периода после систематического введенияцитиколина согласно протоколу (группа «ИшемияЦ 2б») отмечалось значимоеувеличение числа морфологически неизмененных нейронов в полях гиппокампаСА1 и СА3 на 80,6 (P<0,01) и 18,9% (P<0,05) при сравнении с таковым в группе«Ишемия 2б» (табл.
6.6).К 7-м суткам реперфузионного периода при систематическом введениицитиколина (группа «ИшемияЦ 7б») отмечалось значимое увеличение числаморфологически неизмененных нейронов в полях СА1 и СА3 гиппокампа на55,8% (P<0,01) и 26,5% (P<0,05), соответственно, а в поле СА4 – только на 5,1%(P>0,05) при сравнении с таковым в группе «Ишемия 7б» (табл. 6.6).Совместное применение ИПостК и введение цитиколинасогласнопротоколу ко 2-м суткам реперфузионного периода (группа «ПостКЦ 2б»)способствовало значимому увеличению числа морфологически неизмененныхнейронов в полях СА1 и СА3 гиппокампа на 121,5% (Р<0,001) и 37,1% (Р<0,01),соответственно при сравнении с таковым в группе «Ишемия 2б» и на 22,6 и 15,2%(Р<0,05), соответственно, при сравнении с аналогичными показателями в группе«ИшемияЦ 2б» (табл. 6.6).
Значимых различий в количестве морфологическинеизмененных нейронов полей СА1 и СА3 гиппокампа в группах «ПостКЦ 2б» и«ПостК 2б» обнаружено не было (P>0,05) (табл. 6.6).249Таблица 6.6Количество морфологически неизмененных нейронов в полях гиппокампа крыс вразличные периоды реперфузии после полной глобальной ишемии мозга споследующим совместным применениемишемического посткондиционирования и цитиколина(на протяжении 1 мм на срезе)ЭкспериментальнаягруппаИшемия 2бИшемия 7бИшемияЦ 2бИшемияЦ 7бПостК 2бПостК 7бПостКЦ 2бПостКЦ 7бПоля гиппокампаСА193±968±11169±11**106±12αα211±11***154±8ααα206±11***,+151±10ααα,ββСА2184±9180±11176±12189±10188±10186±6191±10188±9СА3116±1083±9139±12*105±10α168±11**137±9αα159±11**,+132±11αα,ββСА4118±1198±8112±12103±11121±10125±10α122±10129±9α,ββРазличия значимы: * по сравнению с показателем в группе «Ишемия 2б» при Р<0,05;** при Р<0,01; *** Р<0,001;при α по сравнению с показателем в группе «Ишемия 7б» при Р<0,05; αα при Р<0,01; ααα при Р<0,001; + посравнению с показателем в группе «ИшемияЦ 2б» при Р<0,05; β по сравнению с показателем в группе «ИшемияЦ2б» при Р<0,05; ββ при Р<0,01.В отдаленный реперфузионный период совместное применение ИПостК ивведение цитиколина (группа «ПостКЦ 7б») приводило к значимому увеличениючисла морфологически неизмененных нейронов в полях СА1, СА3 и СА4гиппокампа на 122,1 (Р<0,001), 57,8 (Р<0,01) и 30,6% (Р<0,05) соответственно присравнении с таковым в группе «Ишемия 7б» и на 42,5 (Р<0,01), 24,8 (Р<0,05) и25,5% (Р<0,05) соответственно при сравнении с показателями в группе«ИшемияЦ 7б» (табл.
6.6). Сравнение количества морфологически неизмененныхнейронов в полях СА1, СА3 и СА4 гиппокампа в группах «ПостК 7б» и «ПостКЦ7б» не выявило значимых различий (Р>0,05) (табл. 6.6). Качественныхморфологических различий в повреждении нейронов полей СА1, СА2, СА3 иСА4 гиппокампа в группах «ПостК 2б», «ПостКЦ 2б», «ПостК 7б» и «ПостКЦ7б» обнаружено не было.В представленном исследовании мы изучали нейропротективный эффектсовместного применения ИПостК и нейропротектора цитиколина на различныхэкспериментальных моделях глобальной ишемии-реперфузии головного мозга.250При введении цитиколина согласно различным вариантам экспериментальныхпротоколов при глобальной ишемии-реперфузии головного мозга у крыс ипесчанок отмечалась тенденция к снижению летальности и уменьшению индексаневрологического дефицита.
Было установлено, что цитиколин, в различныхпротоколах применения при глобальной ишемии-реперфузии головного мозгаспособствует сохранению числа морфологически неизмененных нейронов. Такоднократное введение цитиколина в дозе 500 мг/кг через 2 минуты от моментанаступления 7-минутной глобальной ишемии переднего мозга, способствовалосохранению неизмененных пирамидных нейронов в ранний и отдаленныйреперфузионный период только в наиболее уязвимом для ишемии поле СА1гиппокампа.Приэтомзначимыхразличийвчислеморфологическинеизмененных нейронов для полей СА3 и СА4 гиппокампа и слоев II, III и V корыголовного мозга не наблюдалось.
Систематическое введение цитиколина крысамв дозе 500 мг/кг в момент ишемии и далее каждые 24 часа в период реперфузииспособствовало сохранению морфологически неизмененных нейронов в раннийреперфузионный период в полях СА1 и СА3 гиппокампа, а также в слое III корымозга; в отдаленный реперфузионный период значимое увеличение нейроновотмечалось еще и в слое II коры мозга. Известно, что механизмы, лежащие воснове нейропротективного действия цитиколина, основаны на ингибированиифосфолипазы А2, участвующей в генерации свободных жирных кислот, а такжена увеличении синтеза фосфатидилхолина и глутатиона, снижении глутатионредуктазной активности и предотвращении апоптотической гибели клеток путемвлияния на активность каспазы 3 и каспазы 6 (Saver J.L., 2008; Sahota P., SavitzS.I.,2011).Выбордозировкицитиколинабылоснованнаанализеэкспериментальных исследований, в которых применяли различные дозыпрепарата в зависимости от экспериментальной модели и способа введения (SaverJ.L., 2008; Turkkan A.
et al., 2010). Время введения было выбрано с таким учетом,чтобы эффективность препарата можно было оценить в раннем и отдаленномреперфузионномпериоде.Полученныенамирезультатыподтверждаютрезультаты ранее проведенных исследований. Так, было установлено, что251введение цитиколина в ранние сроки после восстановления кровотока кголовному мозгу способствует уменьшению реперфузионного повреждения;совместное введение цитиколина и индуктора фибринолиза способствовалоуменьшению экспериментального инфаркта при сравнении с монотерапиейфибринолитиком (Saver J.L., 2008). Также в исследованиях было установлено, чтоприменениецитиколинаугрызуновсовместносингибиторамиэксайтотоксичности, ингибиторами пресинаптических натриевых каналов иблокаторамикальциевыхнейропротективногоканаловэффектаспособствуетуказанныхсоединений,потенцированиючтопроявляетсядополнительным уменьшением зоны инфаркта по сравнению с использованиемкаждого из этих средств в отдельности (Saver J.L., 2008).
В литературе имеетсяединственноеупоминаниеобантиапоптотическомэффектесовместногоприменения ИПостК и однократного введения цитиколина внутрибрюшинно вдозе 600 мг/кг при экспериментальном ишемическом повреждении спинногомозга у крыс (Turkkan A. et al., 2010). Однако в указанном исследованиицитиколин вводили за 10 минут до начала моделирования повреждающейишемии спинного мозга, что не позволяет отделить его эффекты на ишемическуюи реперфузионную фазы формирования повреждения нервной ткани. Выводыотносительно антиапоптотического эффекта при совместном примененииИПостК и цитиколина были основаны на иммуногистохимическом анализе bcl-2,причем оценку иммунопозитивных клеток проводили полуколичественнымметодом, выражая степень экспрессии bcl-2 в «+» (Turkkan A.