Диссертация (1144791), страница 38
Текст из файла (страница 38)
При этомроль AMPA–рецепторов в механизмах формирования нейропротективногоэффекта ИПостК головного мозга остается неизученной.4.4.1 Протокол эксперимента по изучению роли AMPA–рецепторов в механизмахнейропротективного эффекта ишемического посткондиционированияголовного мозгаС целью выяснения возможного участия AMPA–рецепторов в механизмахформирования толерантности нейронов к ишемическому и реперфузионномуповреждению после ИПостК головного мозга был специально разработанпротокол эксперимента с использованием селективного и конкурентногоантагониста AMPA/kainate рецепторов - NBQX (2,3-диоксо-6-нитро-1,2,3,4тетрагидробензо[f]квиноксалин) (Abcam Biomedicals, США). Антагонист AMPA–рецепторов NBQX применялся внутрибрюшинно в дозе 30 мг/кг (KawasakiYatsugi S. et al., 1997; Gorter J.A.
et al., 1997). Песчанки случайной выборкой былираспределены на 10 экспериментальных групп (рис. 4.18):1) «ЛО 2в» (n=8). В группу входили ложнооперированные песчанки;длительность реперфузионного периода после проведения хирургическихманипуляций составляла 2 суток. Животным внутрибрюшинно вводилифизиологический раствор в объеме, эквивалентном объему раствораантагониста AMPA–рецепторов (0,9% NaCl, ОАО НПК «ЭСКОМ», Россия).2) «ЛО 7в» (n=7). То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.2073) «Ишемия 2в» (n=7). В группу входили песчанки, перенесшие 7-минутнуюишемию с последующим реперфузионным периодом 2 суток. Животнымвнутрибрюшинновводилифизиологическийрастворвобъеме,эквивалентном объему раствора антагониста AMPA–рецепторов.4) «Ишемия 7в» (n=7). То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.5) «Ишемия+ 2в» (n=8).
В группу входили песчанки, перенесшие 7-минутнуюишемию с последующим реперфузионным периодом 2 суток. На второйминуте от начала ишемии вводили NBQX однократно внутрибрюшинно вдозе 30 мг/кг.ГруппаИшемияИПостК7 мин15с/15сРеперфузия2 суток7 сутокЛО 2вЛО 7в//Ишемия 2вИшемия 7в//↓*Ишемия+ 2в↓*Ишемия+ 7в//ПостК 2вПостК 7в//↓*ПостК+ 2в↓*ПостК+ 7в//Рис. 4.18. Схема протокола эксперимента, направленного на изучение роли AMPA-рецепторовв механизмах нейропротективного эффекта ишемического посткондиционирования приглобальной ишемии-реперфузии переднего мозга у монгольских песчанок. ↓* - внутрибрюшинноевведение NBQX в дозе 30 мг/кг.2086) «Ишемия+ 7в» (n=7).
То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.7) «ПостК 2в» (n=8). В группу входили животные, которым были выполнены 3стимулирующих воздействия по 15 с реперфузии и 15 с реокклюзии после7-минутной ишемии переднего мозга с последующей реперфузией,длительностькоторойсоставляла2суток.Животнымвводилифизиологический раствор в объеме, эквивалентном объему раствораантагониста AMPA–рецепторов.8) «ПостК 7в» (n=7). То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.9) «ПостК+ 2в» (n=7). В группу входили животные, которым был введенантагонист AMPA–рецепторов NBQX однократно внутрибрюшинно в дозе30,0 мг/кг на второй минуте от начала ишемии и выполнены 3 эпизодаИПостК по 15 с реперфузии и 15 с реокклюзии после 7-минутной ишемии споследующей реперфузией 2 суток.10) «ПостК+ 7в» (n=7).
То же, что и в предыдущей группе, но длительностьреперфузии составляла 7 суток.После реперфузионного периода оценивали неврологический статусживотных и летальность. Выживших животных декапитировали, извлекали мозгиз полости черепа для дальнейшего проведения морфометрического анализаполей СА1, СА2, СА3 и СА4 гиппокампа и слоев II, III и V коры головного мозга.4.4.2 AMPA-рецепторы в механизмах нейропротективного эффектаишемического посткондиционированияВведение антагониста АМPA-рецепторов NBQX на второй минуте ишемиипереднего мозга у монгольских песчанок ко 2-м суткам реперфузионного периодаприводило к увеличению числа морфологически неизмененных пирамидныхнейронов в полях СА1 и СА3 гиппокампа.
Так, в группе «Ишемия+ 2в»отмечалось увеличение числа морфологически неизмененных нейронов в поле209СА1 и СА3 на 46,9 (Р<0,01) и 26,4% (Р<0,05), соответственно, при сравнении сгруппой «Ишемия 2в» (табл. 4.14). При этом в полях СА2 и СА4 гиппокампавведениеNBQXнеприводилоксущественномуизменениючислажизнеспособных нейронов при сравнении с группой «Ишемия 2в» (Р>0,05) (табл.4.14). В отдаленном реперфузионном периоде, а именно, к 7-м суткам реперфузиив группе «Ишемия+ 7в» в полях СА1 и СА3 гиппокампа также отмечалосьсущественное увеличение числа морфологически неизмененных нейронов.
Так, вгруппе «Ишемия+ 7в» число неизмененных пирамидных нейронов в полях СА1 иСА3 повышалось по сравнению с аналогичным показателем в группе «Ишемия7в» (на 52,1, Р<0,01 и 34,7% Р<0,05, соответственно). При этом в полях СА2 иСА4 гиппокампа отмечалось увеличение числа морфологически неизмененныхнейронов только на 2,2% и 2,1% соответственно, при сравнении с группой«Ишемия 7в» (Р>0,05) (табл. 4.14).Ко2-мсуткамреперфузионногопериодасовместноеприменениеантагониста АМРА-рецепторов NBQX и ИПостК (группа «ПостК+ 2в»)приводило к увеличению числа морфологически неизменных нейронов в поляхСА1 и СА3 гиппокампа на 35,2 (Р<0,01) и 25,5% (Р<0,05), соответственно присравнении с аналогичными показателями в группе «Ишемия 2в», при этомполученный показатель был меньше на 51,5 и 32,6%, соответственно, чем вгруппе с моноприменением ИПостК «ПостК 2в» (Р<0,01), а также статистическине различимо при сравнении с введением антагониста АМРА-рецепторов NBQX вгруппе «Ишемия+ 2в» (Р>0,05).
Количество морфологически неизмененныхнейронов в полях СА2 и СА4 гиппокампа в группе «ПостК+ 2в» значимо неотличалось от аналогичных показателей при сравнении с группами: «Ишемия2в», «ПостК 2в» и «Ишемия+ 2в» (Р>0,05) (табл. 4.14).В отдаленном реперфузионном периоде совместное применение ИПостК ивведение антагониста АМРА-рецепторов NBQX, в группе «ПостК+ 7в» в поляхСА1 и СА3 гиппокампа способствовало увеличению числа морфологическинеизмененных нейронов на 42,1 (Р<0,01) и 30,8% (Р<0,01) соответственно присравнении с группой «Ишемия 7в» и уменьшению при сравнении с аналогичными210показателями в группе «ПостК 7в» на 28,4 (Р<0,01) и 13,6% (Р<0,05)соответственно, и значимо не отличалось от таковых значений в группе «Ишемия+ 7в» (Р>0,05) (табл.
4.14). Количество неизмененных нейронов в поле СА2 вгруппе «ПостК+ 7в» значимо не отличалось от такового в группах «Ишемия 7в»,«ПостК 7в» и «Ишемия+ 7в» (Р>0,05) (табл. 4.14). В поле СА4 гиппокампасовместное применение ИПостК и NBQX в отдаленном реперфузионном периодеприводило к значимому увеличению числа морфологически неизмененныхнейронов при сравнении с таковым в группе «Ишемия 7в» (на 22,5%, Р<0,05), приэтом показатель в группе «ПостК+ 7в» был больше, чем в группе «Ишемия+ 7в»(на 25,9%, Р<0,05) и статистически не отличался от показателя в группе «ПостК7в» (Р>0,05) (табл. 4.14).Таблица 4.14Количество морфологически неизмененных нейронов в полях гиппокампамонгольских песчанок в различные периоды реперфузии после глобальнойишемии переднего мозга и введения NBQX с последующим применениемишемического посткондиционирования(на протяжении 1 мм на срезе)ЭкспериментальнаягруппаЛО 2вЛО 7вИшемия 2вИшемия 7вИшемия+ 2вИшемия+ 7вПостК 2вПостК 7вПостК+ 2вПостК+ 7вПоля гиппокампаСА1354±8349±1088±10**69±11+++129±12αα105±11φφ180±10ααα136±11φφ119±10αα,β98±10##,φφСА2210±10214±11206±10205±11209±11209±9210±12212±11208±10206±11СА3212±10206±9107±10*92±10++135±9α123±10φ177,6±11αα139±10φφ134±12α,β120±11#,φφСА4128±11136±10116±11112±10+115±10109±9123±11135±11φ120±9136±10φ,νРазличия значимы: * по сравнению с показателем в группе «ЛО 2в» при Р<0,01;** при Р<0,001; + по сравнению споказателем в группе «ЛО 7в» при Р<0,05; ++ при Р<0,01; +++ при Р<0,001; α по сравнению с показателем в группе«Ишемия 2в» при Р<0,05; αα при Р<0,01; ααα при Р<0,001; φ по сравнению с показателем в группе «Ишемия 7в» приР<0,05; φφ при Р<0,01; β по сравнению с показателем в группе «ПостК 2в» при Р<0,01; # по сравнению споказателем в группе «ПостК 7в» при Р<0,05; ## при Р<0,01; ν по сравнению с показателем в группе «Ишемия+ 7в»при Р<0,05.211Введение NBQX на второй минуте от начала обратимой ишемии переднегомозга ко 2-м и 7-м суткам реперфузионного периода, в группах «Ишемия+ 2в» и«Ишемия+7в»приводилокнекоторомуувеличениюморфологическинеизмененных нейронов в слоях II, III и V коры головного мозга, однако,значимых различий с группами «Ишемия 2в» и «Ишемия 7в» обнаружить неудалось (Р>0,05) (табл.
4.15). Ко 2-м суткам реперфузионного периодаприменение ИПостК в группе «ПостК 2в» приводило к значимому увеличениюморфологически неизмененных нейронов в слоях II и III коры на 23,2 и 33,6%соответственно, при сравнении с аналогичными показателями в группе «Ишемия2в» (Р>0,01). К 7-м суткам реперфузионного периода после примененияишемических стимулирующих воздействий (группа «ПостК 2в») в слоях II, III иV коры головного мозга отмечалось увеличение морфологически неизмененныхнейронов на 43,8 (Р<0,001), 90,9 (Р<0,001) и 22,9% (Р<0,05) соответственно, чем вгруппе «Ишемия 7в» (табл.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
