Диссертация (1144791), страница 34
Текст из файла (страница 34)
гиппокампа как структуры в целом, или в пределахнейронного ансамбля для области коры головного мозга. При этом увеличениеэкспрессии белка Bcl-2 происходило в нейронах даже тех областей головногомозга, которые были наиболее устойчивы к примененному экспериментальномуишемическому повреждению. Наблюдаемое явление можно объяснить нейроглиальным индексом, функциональными особенностями нейронов, а такжеспецифическим развитием приспособительных реакций, характерных при184формировании толерантности затылочной области головного мозга крыс ипесчанок монгольских к ишемии-реперфузии при применении ИПостК.D.J.
Kane и соавт. показали, что экспрессия белка Bcl-2 может защищатьнейроны не только от апоптоза, но и от некроза (Kane D.J. et al., 1995). Онипредположили,чтовместотого,чтобынепосредственноингибироватьпрограммируемую гибель клеток, Bcl-2 может модулировать общие клеточныепроцессы, например, образование свободных радикалов, участвующих в запускеапоптотическойилинекротическойгибеликлетки.Существуюттакжеисследования, показывающие нейропротективные эффекты белка Bcl-2 вусловиях in vivo. Так, при трансфекции гена вcl-2 при помощи вирусных векторовили липосомно-плазмидного комплекса было обнаружено уменьшение объемазоны инфаркта при фокальной ишемии головного мозга у крыс или гибелинейронов в поле СА1 гиппокампа при глобальной ишемии у песчанокмонгольских (Betz A.L.
et al., 1995; Lawrence M.S. et al., 1997; Antonawich F.J. etal., 1999; Cao Y.J. et al., 2002). В исследовании, проведенном на трансгенныхмышах, было показано, что повышенная экспрессия гена вcl-2 уменьшает зонуповреждения мозга при фокальной ишемии, а также может препятствовать гибеликлеток мозга при ишемии (Martinou J.C.
et al., 1995).Ишемические стимулы, выполненные непосредственно после ишемии впериоде ранней реперфузии, способствуют увеличению синтеза белка Bcl-2 внейронах областей головного мозга, обладающих разной устойчивостью кповреждающему действию ишемии-реперфузии. Принимая во внимание, что несуществует окончательного мнения о гибели нейронов в полях гиппокампа и вкоре головного мозга при полной глобальной ишемии-реперфузии путемапоптоза или некроза, а также того, что экспрессия белка Bcl-2 может защищатьнейроны не только от апоптоза, но и от некроза можно сделать вывод о том, чтонейропротективный эффект ИПостК для нейронов гиппокампа и слоев корыголовного мозга песчанок монгольских и крыс реализуется через механизм,приводящий к увеличению экспрессии белка Bcl-2.1854.1.4 Влияние ишемического посткондиционирования на функциональнуюактивность компонента С3 системы комплемента при полной глобальнойишемии-реперфузии головного мозга у крысКнастоящемувременисуществуетнебольшоеколичествоэкспериментальных и клинических исследований, посвященных изучениюактивациикомпонентовсистемыкомплементаприишемическомиреперфузионном повреждении тканей головного мозга (Айвазян В.А.
с соавт.,2005; Czurko A., Nishino H., 1994; Costa C. et al., 2006). Также большойтеоретическийипрактическийинтереспредставляетисследованиефункциональной активности системы комплемента при применении ИПостКголовного мозга.Для проведения анализа функциональной активности компонента С3системы комплемента (КС3СК) при применении ИПостК при полной глобальнойишемии-реперфузии головного мозга у крыс был специально разработанпротокол эксперимента (рис. 4.2) и сформированы дополнительные группы:1) «Контроль» (n=6). Интактные крысы Wistar.2) «Ишемия б» (n=6). В группу входили крысы, перенесшие 10-минутнуюишемию без последующей реперфузии.3) «ПостК б» (n=6). В группу входили крысы, которым были выполнены 3ишемических воздействия по 15 с реперфузии и 15 с реокклюзииплечеголовного ствола, левой подключичной артерии и левой ОСА после10-минутной полной ишемии мозга без последующей реперфузии.Моделируемая 10-минутная глобальная ишемия мозга приводила кповышению активности компонента С3 системы комплемента, что выражалось вдостоверном увеличении максимального значения скорости гемолиза Vlys(Р<0,05) и в значимом уменьшении времени для его достижения Tmax (Р<0,05)при сравнении с группой «Контроль» (табл.
4.9).186Таблица 4.9Активность компонента С3 системы комплемента в различные периодыреперфузии после полной глобальной ишемии головного мозга у крыс споследующим применением ишемического посткондиционированияЭкспериментальнаягруппа(n)КонтрольИшемия бИшемия 2бИшемия 7бПостК бПостК 2бПостК 7б6666655Определяемые значенияTlagTmaxVlys(с)(с)(dE800/5″)23±3,643±3,80,024±0,0026++19±2,532±4,80,031±0,0038++15±1,527±1,30,042±0,0024***20±4,0**40±7,9**0,030±0,0058**19±2,134±2,50,028±0,000917±1,426±1,80,039±0,0046*+, , α+, , α12±1,8 *19±1,3 *0,05±0,0033+Различия значимы: ++ по сравнению с показателями в группе «Контроль» при Р<0,05; *** по сравнению споказателями в группе «Ишемия б» при Р<0,05; ** по сравнению с показателями в группе «Ишемия 2б» приР<0,05; * по сравнению с показателями в группе «ПостК б» при Р<0,05; + по сравнению с показателями в группе«Ишемия 7б» при Р<0,01; α по сравнению с показателями в группе «ПостК 2б» при Р<0,05.Увеличение реперфузионного периода до 2-х суток (группа «Ишемия 2б»)способствовало значимому нарастанию увеличения активности КС3СК присравнении с активностью, наблюдаемой в группе «Ишемия б» (Р<0,05).
Впозднем реперфузионном периоде, а именно, через 7 суток после восстановлениякровотока (группа «Ишемия 7б»), активность КС3СК уменьшалась, чтовыражалось в снижении показателя Vlys и достоверном увеличении показателейTlag и Tmax (Р<0,05) при сравнении с показателями, наблюдаемыми ко 2-мсуткам реперфузии в группе «Ишемия 2б».Для анализа изменений функциональной активности КС3СК в сывороткекрыс после перенесения обратимой глобальной ишемии головного мозга намииспользовались три срока реперфузии – непосредственно после 10-минутнойишемии, т.е. без реперфузии, а также 2-е и 7-м суток реперфузии.
Результатыдемонстрирующие увеличение активности КС3СК ко 2-м суткам реперфузиипосле обратимой глобальной ишемии, полученные в нашем исследовании,согласуются с результатами, полученными ранее другими исследователями с187применением иммуногистохимического анализа на модели фокальной ишемии укрыс (Czurko A., Nishino H. 1994). Так, при помощи иммуногистохимическогоанализа было установлено, что диффузия С3 в зону ишемии была самой высокойна 3-е сутки реперфузии после моделирования обратимой 60-минутнойфокальной ишемии у крыс (Czurko A., Nishino H.
1994). В другом исследовании,методомиммуноблотинга,былообнаруженозначимоеувеличениеотносительного содержания КС3СК в сыворотке крови больных с ишемическиминсультом при сравнении со здоровыми лицами. Необходимо отметить, чтоповышение данного биохимического показателя было зарегистрировано убольных с острым ишемическим инсультом на 1-е сутки их пребывания встационаре (Айвазян В.А. и соавт., 2005). Существенным недостаткомсуществующих экспериментальных и клинических работ является то, чтоактивность КС3СК оценивали в одной, реже – двух временных точкахреперфузионного периода, что не позволяет оценить изменение функциональнойактивности комплемента в динамике.
В нашем исследовании мы впервыеисследовалиактивностьКС3СКкаквраннем,такивотдаленномреперфузионном периоде. Однако до настоящего времени остаются неизученными точные механизмы участия активированных компонентов системыкомплементавпатогенезеишемического-реперфузионногоповрежденияголовного мозга, а также их роль во взаимодействии с другими белками остройфазы (Costa C. et al., 2006).КС3СК занимает центральное место в системе комплемента, которая, всвою очередь, является главным участником врожденного гуморальногоиммунитета, а также является одним из вспомогательных звеньев приобретенногоиммунитета.
Необходимо отметить, что в нескольких исследованиях на мелкихлабораторных животных ингибирование компонентов системы комплементаобеспечивало нейропротективный эффект при ишемическом повреждении(Heimann A. et al., 1999; Huang J. et al., 1999; Akita N. et al., 2003; De Simoni M.G.et al., 2003).188При анализе результатов, полученных при применении ИПостК послеглобальной ишемии, были обнаружены следующие закономерности. ПрименениеИПостК непосредственно после глобальной ишемии не приводило к изменениюпоказателей Tlag и Tmax, но было обнаружено незначительное понижениепоказателя Vlys при сравнении с группой «Ишемия б» (табл.
4.9).Ко 2-м суткам реперфузии показатель Vlys в группе «ПостК 2б» значимоповышался при сравнении с группой «ПостК б» (Р<0,05) и был несколько нижепри сравнении с группой «Ишемия 2б» (Р>0,05). Однако к 7-м суткам реперфузиив группе «ПостК 7б» активность КС3СК увеличивалась при сравнении с группой«Ишемия 7б», а также с группами «ПостК б» и «ПостК 2б», что выражалось взначимом увеличении показателя Vlys при сравнении с группой «Ишемия 7б»(Р<0,01) и в значимом снижении показателей Tlag и Tmax как при сравнении сгруппой «Ишемия 7б» (Р<0,01), так и при сравнении с группами «ПостК б» и«ПостК 2б» (Р<0,05).Применение ИПостК приводило к увеличению активности компонента С3системы комплемента в отдаленном реперфузионном периоде, к 7-м суткамреперфузии.
Можно предположить, что применение ИПостК приводило кизменению характера адаптивного иммунного ответа, интенсивность которогосущественно варьирует в зависимости от длительности реперфузии.Таким образом, результаты проведенного исследования свидетельствуют отом, что следствием обратимого ишемического повреждения головного мозга укрыс является повышение активности компонента С3 системы комплемента впервые 7-м суток после глобальной ишемии с максимально выраженнымповышением активности ко 2-м суткам. Применение ИПостК приводит кзначимому увеличению функциональной активности КС3СК к 7-м суткамреперфузии, что, возможно, свидетельствует о способности организма к синтезуи,следовательно,кактивномуадаптивномуответувотдаленномпостишемическом периоде.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
