Главная » Просмотр файлов » Автореферат

Автореферат (1144757), страница 5

Файл №1144757 Автореферат (Функциональная гетерогенность Na,K-АТФазы в скелетной мышце) 5 страницаАвтореферат (1144757) страница 52019-06-29СтудИзба
Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 5)

Функционирование Na,K-АТФазы на самых начальных этапахдвигательной разгрузки не исследовано, хотя представляет особый интерес сточки зрения поиска ключевых сигнальных событий, запускающихатрофическую программу. Для изучения этого вопроса нами был примененметод антиортостатического вывешивания задних конечностей крысы, широкоиспользуемый в качестве лабораторной модели гравитационной и двигательнойразгрузки (Morey-Holton et al., 2005). Опыты проводили на камбаловидноймышце крысы в период от 6 ч до 3 суток (72 ч) разгрузки, то есть в период,предшествующий выраженным изменениям атрофического характера.Ужечерез6чвывешиваниянаблюдаласьдеполяризацияпостсинаптического и внесинаптического районов сарколеммы до одинаковогоуровня около –70 мВ и исчезновение локальной гиперполяризации мембраныконцевой пластинки.

Далее, в течение 72 ч вывешивания мембранавнесинаптического района сарколеммы оставалась деполяризованной, инаблюдалось снижение ее возбудимости. Однако в постсинаптическом районе19величина МПП уже через 12 ч вывешивания восстанавливалась доконтрольного значения и оставалась такой на более поздних сроках разгрузки.Локальная гиперполяризация мембраны концевой пластинки такжевосстанавливалась (рис.

5 А, Б).Проведенный анализ показал, что наблюдаемые изменения (и снижение ивосстановление)МППобоихрайоновсарколеммыобусловленысоответствующими изменениями электрогенной активности 2-изоформыNa,K-АТФазы при постоянной активности 1-изоформы (рис. 5 В, Г).Рис. 5. Изоформ-специфическое влияние двигательной разгрузки в течение6 ч – 72 ч на Na,K-АТФазу в камбаловидной мышце крысы. А – Изменениевеличины МПП в постсинаптическом и Б – внесинаптическом районахсарколеммы. В – Изменение электрогенной активности 1- и 2-изоформ Na,KАТФазы в постсинаптическом и Г – внесинаптическом районах сарколеммы. Д– Количество белка и Е – уровень мРНК 1- и 2-изоформ в общем гомогенатемышц. Ж – Локализация 2-изоформы в сарколемме.

Красный канал –распределение никотиновых холинорецепторов, меченых -ВТх; зеленый канал– локализация 2-изоформы (2 NKA), меченой 1 мкМ Bodipy ouabain;20оранжевый цвет – наложение сигналов. Верхний ряд – контрольная мышца;средний и нижний ряды – после 6 ч и 12 ч разгрузки соответственно. Внизу –локализация 2-изоформы во внесинаптической мембране в видеупорядоченных рядов в соответствии с ее распределением в поперечныхтрубочках (Williams et al., 2001; Heiny et al., 2010). Масштаб: 25 мкм.

З –Усредненная флуоресценция от 2-изоформы в постсинаптическом (1) ивнесинаптическом (2) районах сарколеммы. К – контроль; цифры под осью Хобозначают время разгрузки в ч. *p < 0.05 и **p < 0.01 по сравнению ссоответствующим контролем.В период от 12 до 24 ч разгрузки наблюдалось увеличение количествабелка и экспрессии мРНК 2-изоформы в общем гомогенате мышц. Через 72 чразгрузки эти параметры начинали возвращаться к контрольному уровню;количество белка и экспрессия мРНК 1-изоформы Na,K-АТФазы в течениевсего исследованного периода не изменялись (рис. 5 Д, Е).Сравнение результатов, полученных на камбаловидной и диафрагмальноймышцах одних и тех же крыс показало, что во внесинаптическом районефункционирование 2-изоформы напрямую зависит от двигательнойактивности: снижается в неактивной камбаловидной мышце и не изменяется впостоянно сокращающейся диафрагме.

В постсинаптическом районе, помимоэтого, по-видимому, действуют какие-то дополнительные факторы разгрузки,влияющие на электрогенную активность 2-изоформы в обеих мышцахнезависимо от двигательной активности.Роль собственно двигательной активности была проверена нами вследующих опытах. После 6 ч разгрузки изолированную камбаловиднуюмышцу стимулировали в течение 5 мин (нервная стимуляция, 2 имп/с), чтодолжно повышать электрогенную активность Na,K-АТФазы (Hicks, McComas,1989).

Сразу после такой стимуляции наблюдалось восстановление МПП обоихрайонов сарколеммы до уровня, близкого к контрольному; этот эффектотсутствовал при блокировании 2-изоформы Na,K-АТФазы уабаином (100 нМи 1 мкМ), что подтверждают важность двигательной активности дляподдержания функционирования именно 2-изоформы.Причиной снижения электрогенной активности 2-изоформы могло быбыть нарушение ее локализации в сарколемме, например, за счет изменений вмеханизме ее транслокации – обмена между плазматической мембраной ивнутриклеточным пулом Na,K-АТФазы (Benziane, Chibalin, 2008). Однако нашиопыты показали, что количественно 2-изоформа Na,K-АТФазы и ее колокализация с нХР сохраняются через 6 – 12 ч вывешивания; сохраняется21локализация 2-изоформы и во внесинаптической мембране (при небольшомросте через 12 ч разгрузки) (рис.

5 Ж, З).Наши опыты показали также, что подавление активности 2-изоформыпри функциональной разгрузке нельзя объяснить повышенным уровнемэндогенных дигиталисоподобных ингибиторов Na,K-АТФазы или изменениемуровня неквантовой секреции АХ. Даже в состоянии подавленной активностипосле разгрузки 2-изоформа сохраняет способность повышать своюфункциональную активность, что дополнительно подтверждает ее наличие всарколемме.

Эти данные позволяют предположить избирательный механизмподавления функциональной активности 2-изоформы Na,K-АТФазы уже впервые часы функциональной разгрузки камбаловидной мышцы.Аналогичные опыты с вывешиванием были проведены на камбаловидноймышцемонгольскойпесчанки,характеризующейсяповышеннойустойчивостью к условиям аридной зоны обитания и исследуемой в последнеевремя в условиях реального космического полета (Липец и др., 2009).

И в этихопытах нами была обнаружена деполяризация мышечных волокон,обусловленная, как и у крысы, снижением электрогенной активности 2изоформы Na,K-АТФазы. Важное отличие заключается в существеннойзадержке в развитии этих нарушений электрогенеза у песчанки,проявляющихся только через 12 суток вывешивания (Кравцова и др., 2010). Этонаблюдение соответствует данным, по которым развитие атрофическихпроцессов в камбаловидной мышце монгольской песчанки после космическогополета оказались менее глубокими, чем у крыс (Липец и др., 2009).Липидная и структурная перестройка концевой пластинки придвигательной разгрузкеЛипидная перестройка. Как было отмечено выше, опыты с применениемв качестве маркера липидных плотиков субъединицы В холерного токсина,снабженной флуоресцентной меткой (CTхB), показали, что в контрольныхкамбаловидных мышцах крысы оба сигнала от меченого -BTX (красныйканал, нХР) и CTхB (зеленый канал, липидные плотики) локализованы вобласти концевой пластинки и совпадают при наложении.

Такая локализациясохранялась после 6 ч антиортостатического вывешивания (рис. 6 А). Однакодаже такая кратковременная разгрузка вызывала дестабилизацию липидныхплотиков (снижение флуоресценции CTхB) в области концевой пластинки, атакже во внесинаптической мембране, где нарушения были выражены слабее(рис. 6 Б). Нарушение липидных плотиков было подтверждено и прииспользовании для визуализации распределения различных липидных фаз22плазматической мембраны флуоресцентных стеролов – 22-NBD-холестерина идигидроэргостерола (рис. 6 В и Г).Кроме того, нами был проведен анализ изменений липидных плотиков вразгруженной камбаловидной мышце по сравнению с сокращающейсядиафрагмой тех же крыс. В диафрагмальной мышце наблюдались сходныеизменения, что свидетельствует о возможном влиянии на стабильностьлипидных плотиков системных (циркулирующих) факторов, характерных дляданной модели разгрузки.

Однако наблюдаемые нарушения были выраженызначительно сильнее в камбаловидной мышце, что свидетельствует о важнойроли мышечной разгрузки как таковой. Об этом же свидетельствуют и данныед-ра А.М. Петрова, по которым при продлении разгрузки до 12 чвосстановление липидных плотиков не наблюдается. Однако дажекратковременная двигательная нагрузка, вызванная стимуляцией двигательногонерва, приводит к их частичному восстановлению (Petrov et al., 2017).Рис. 6. Влияние двигательной разгрузки на распределение липидныхплотиков в камбаловидной мышце крысы. А – Распределение никотиновыххолинорецепторов, меченых -ВТХ (красный канал), и локализация липидныхплотиков, определяемая по флуоресценции СТхВ (зеленый канал), в концевыхпластинках контрольной мышцы (верхний ряд) и после 6 ч разгрузки (нижнийряд). Оранжевый цвет – наложение сигналов.

Масштаб: 10 мкм. Б, В и Г –23усредненные флуоресценции соответственно СТхВ, 22-NBD-холестерина идигидроэргостерола в контрольных мышцах и после 6 ч разгрузки. Темные исветлые столбцы – соответственно, постсинаптический и внесинаптическийрайоны сарколеммы. *р < 0.05 и **p < 0.01 по сравнению с соответствующимконтролем.Последующие опыты были проведены с целью выявления ролимембранного холестерина в наблюдаемых нарушениях липидной фазымембраны.

Характеристики

Тип файла
PDF-файл
Размер
2,53 Mb
Предмет
Высшее учебное заведение

Список файлов диссертации

Свежие статьи
Популярно сейчас
Почему делать на заказ в разы дороже, чем купить готовую учебную работу на СтудИзбе? Наши учебные работы продаются каждый год, тогда как большинство заказов выполняются с нуля. Найдите подходящий учебный материал на СтудИзбе!
Ответы на популярные вопросы
Да! Наши авторы собирают и выкладывают те работы, которые сдаются в Вашем учебном заведении ежегодно и уже проверены преподавателями.
Да! У нас любой человек может выложить любую учебную работу и зарабатывать на её продажах! Но каждый учебный материал публикуется только после тщательной проверки администрацией.
Вернём деньги! А если быть более точными, то автору даётся немного времени на исправление, а если не исправит или выйдет время, то вернём деньги в полном объёме!
Да! На равне с готовыми студенческими работами у нас продаются услуги. Цены на услуги видны сразу, то есть Вам нужно только указать параметры и сразу можно оплачивать.
Отзывы студентов
Ставлю 10/10
Все нравится, очень удобный сайт, помогает в учебе. Кроме этого, можно заработать самому, выставляя готовые учебные материалы на продажу здесь. Рейтинги и отзывы на преподавателей очень помогают сориентироваться в начале нового семестра. Спасибо за такую функцию. Ставлю максимальную оценку.
Лучшая платформа для успешной сдачи сессии
Познакомился со СтудИзбой благодаря своему другу, очень нравится интерфейс, количество доступных файлов, цена, в общем, все прекрасно. Даже сам продаю какие-то свои работы.
Студизба ван лав ❤
Очень офигенный сайт для студентов. Много полезных учебных материалов. Пользуюсь студизбой с октября 2021 года. Серьёзных нареканий нет. Хотелось бы, что бы ввели подписочную модель и сделали материалы дешевле 300 рублей в рамках подписки бесплатными.
Отличный сайт
Лично меня всё устраивает - и покупка, и продажа; и цены, и возможность предпросмотра куска файла, и обилие бесплатных файлов (в подборках по авторам, читай, ВУЗам и факультетам). Есть определённые баги, но всё решаемо, да и администраторы реагируют в течение суток.
Маленький отзыв о большом помощнике!
Студизба спасает в те моменты, когда сроки горят, а работ накопилось достаточно. Довольно удобный сайт с простой навигацией и огромным количеством материалов.
Студ. Изба как крупнейший сборник работ для студентов
Тут дофига бывает всего полезного. Печально, что бывают предметы по которым даже одного бесплатного решения нет, но это скорее вопрос к студентам. В остальном всё здорово.
Спасательный островок
Если уже не успеваешь разобраться или застрял на каком-то задание поможет тебе быстро и недорого решить твою проблему.
Всё и так отлично
Всё очень удобно. Особенно круто, что есть система бонусов и можно выводить остатки денег. Очень много качественных бесплатных файлов.
Отзыв о системе "Студизба"
Отличная платформа для распространения работ, востребованных студентами. Хорошо налаженная и качественная работа сайта, огромная база заданий и аудитория.
Отличный помощник
Отличный сайт с кучей полезных файлов, позволяющий найти много методичек / учебников / отзывов о вузах и преподователях.
Отлично помогает студентам в любой момент для решения трудных и незамедлительных задач
Хотелось бы больше конкретной информации о преподавателях. А так в принципе хороший сайт, всегда им пользуюсь и ни разу не было желания прекратить. Хороший сайт для помощи студентам, удобный и приятный интерфейс. Из недостатков можно выделить только отсутствия небольшого количества файлов.
Спасибо за шикарный сайт
Великолепный сайт на котором студент за не большие деньги может найти помощь с дз, проектами курсовыми, лабораторными, а также узнать отзывы на преподавателей и бесплатно скачать пособия.
Популярные преподаватели
Добавляйте материалы
и зарабатывайте!
Продажи идут автоматически
6363
Авторов
на СтудИзбе
310
Средний доход
с одного платного файла
Обучение Подробнее