Диссертация (1141401), страница 17
Текст из файла (страница 17)
В то же время, как видно из Таблицы 12, сохранение размера везикул впроцессе сублимационной сушки обеспечивалось при введении сахарозы вдисперсию в двух соотношениях ФХ/криопротектор – 1:4 и 1:5 (Рисунок 32В,33). Но поскольку в образцах с 10% раствором криопротектора липосомы110имели тенденцию к снижению диаметра после лиофилизации и послерегидратации размер везикул составил наименьшее среднее значение 158 нм,в качестве криопротектора для ЛЛФ борхлорина выбрана сахароза вмолярном соотношении ФХ/криопротектор 1:5.Рисунок 33. Средний размер липосом борхлорина после лиофилизации при использованиив качестве криопротектора сахарозы 1:4 – 166 нм.Выбор режима лиофилизации ЛЛФ борхлоринаВыбор оптимального режима сублимационной сушки ЛЛФ борхлоринапроводилинаоснованиисравнительногоанализадвухспособовлиофилизации – с «медленным» (1) и «быстрым» замораживаем (2) (Рисунок34).
Каждый предложенный режим лиофилизации оценивали по следующимпоказателям качества лиофилизата: внешний вид, регидратируемость, размервезикул и ЭВ борхлорина.Передсублимационнойсушкойлипосомальнуюдисперсиюборхлорина с криопротектором дозировали по 4 мл (количественноесодержание борхлорина 1,0 мг/флакон) во флаконы вместимостью 20 мл.111Рисунок 34. График сублимационной сушки ЛЛФ борхлорина:1.
режим лиофилизации с «медленным» замораживанием,2. режим лиофилизации с «быстрым» замораживанием1 – Режим лиофилизации с «медленным» замораживаем. Флаконы слипосомальной дисперсией борхлорина помещали в камеру сублимационнойсушки при комнатной температуре (+20...+25ºС). Препарат замораживали,используя «медленное» (постепенное) понижение температуры (Таблица 13).В процессе замораживания липосомальной дисперсии борхлоринаустановлено, что точка эвтектики препарата находилась на уровне -11...13°С.После достижения и уравновешивания минимальной температурыпродукта флаконы с препаратом выдерживали в течение 3 часов, далееначинали откачку воздуха из камеры сублимационной установки. Послевключения вакуумного насоса и выравнивания вакуума осуществляли:1.
Нагрев полок до температуры – 20оС со скоростью +5оС/час.2. Выдерживание полок на температуре – 20оС в течение 2 часов.3. Нагрев полок до температуры – 10оС со скоростью +3оС/час.1124. Нагрев полок до комнатной температуры +20...+22оС со скоростью+5оС/час.Таблица 13Этапы замораживания ЛЛФ борхлорина№этапаПределтемпературыполки, °С1–2-15 - 173-25 - 274-35 - 375-45 - 47Описание этапаПомещение препарата в камеру сушки,комнатная температура +20…+25°СОхлаждение от комнатной температурыдо -17°С; выдерживание в течение 50минОхлаждение от -17 до -27°С;выдерживание в течение 50 минОхлаждение от -27 до -37°С,выдерживание в течение 40 минОхлаждение от -37 до -47°С.Продолжительностьэтапа (зависит отразмера загрузки)–2,5 – 3 ч1,5 – 1,8 ч1,3 – 1,6 ч1,3 – 1,6 чДалее препарат досушивали для удаления остаточной влаги около 3 чпо критерию неизменности остаточного давления паров в сублимационнойкамереприперекрываниивакуумноймагистрали.Общеевремялиофилизации препарата составило приблизительно 32 ч.2 – Режим лиофилизации с «быстрым» замораживанием.
Флаконы слипосомальной дисперсией борхлорина помещали на полки сублимационнойкамеры при комнатной температуре (+20...+25°С) и охлаждали их до −45°C втечение 2 ч. После достижения заданной температуры на препаратевыдерживали в течение 3 ч (стадия замораживания). Затем включали вакуумв камере. После выравнивания температуры и вакуума (около 3 ч) начиналисублимационную сушку, поднимали температуру от −45 до +20°C соскоростью 5°C/ч (сублимационная сушка).
После достижения на препаратетемпературы +20°C выдерживали при этой температуре в течение 3 ч(досушивание). Общее время сублимационной сушки составило 24 ч.В ходе анализа полученных данных установлено, что способзамораживания не влияет на показатели качества конечного продукта и обарежима позволяют получить равноценные образцы ЛЛФ-лио борхлорина113(Таблица 14).
По внешнему виду лиофилизаты, полученные как путем«медленного», так и «быстрого» замораживания, представляли собой сухуюпористую массу зеленого цвета. После добавления к содержимому флакона3,7 мл воды для инъекций и перемешивания в течение 10 минлиофилизированнаямассалегкорегидратироваласьсобразованиемлипосомальной дисперсии зеленого цвета.
Как видно из Таблицы 14,используемые режимы не оказывали влияния на включение борхлорина иразмер везикул после лиофилизации – в обоих случаях ЭВ находилась науровне 97%, а средний диаметр липосом составил около 170 нм.Таблица 14Сравнение лиофилизатов ЛЛФ борхлорина, полученных при различныхрежимах сублимационной сушкиРежимлиофилизацииВнешний видлиофилизатаРегидратируемость,+/-с «медленным»Сухаязамораживаниемпористаямассазеленогос «быстрым»цветазамораживаниемРазмер везикул, нмпоследо лиофил.лиофил.ЭВ, %+180±8170±797,0±1,0+178±10172±897,0±1,0На основании вышеизложенного можно сделать вывод о возможностииспользованиядляполученияЛЛФ-лиоборхлоринакакрежималиофилизации с «медленным» замораживанием, так и режима с «быстрой»стадией замораживания.
Но поскольку режим 2 требует меньших затратвремени и соответственно электрической энергии, именно данный режимпредложен для получения ЛФ борхлорина.Таким образом, в результате проведенных исследований разработанатехнология получения ЛЛФ-лио борхлорина: предложен оптимальный режимлиофилизациикриопротектор,липосомальнойобеспечивающиедисперсииполучениеиподобранэффективныйкачественногоконечногопрепарата. На микрофотографиях, представленных на Рисунке 35, видно, чтопри данных условиях лиофилизации липосомы борхлорина сохраняют свою114структуру и после регидратации приобретают ту же округлую форму что и досублимационной сушки.АБРисунок 35 Электронная фотография липосом борхлоринадо (А) и после (Б) лиофилизации3.2.5. Сравнение технологий получения ЛЛФ-лио борхлоринаКриопротектор может быть введен в липосомальную дисперсию двумяпутями. Во-первых, на стадии формирования липосом при растворениикриопротектора в растворителе, предназначенном для гидратации липиднойпленки.
При этом криопротектор будет находиться как снаружи, так и внутрилипосом.Во-вторых,непосредственнопередлиофилизациейпутемдобавления в дисперсию концентрированного раствора криопротектора. Вэтом случае молекулы криопротектора образуют только внешний защитныйслой.115В настоящем исследовании в зависимости от способа введенияраствора сахарозы в качестве криопротектора предложены для сравнения дветехнологии получения ЛЛФ-лио борхлорина (Таблица 15).Таблица 15Сравнительный анализ технологий получения ЛЛФ-лио борхлоринаЭтап технологии/параметры сравненияГидратация липиднойпленки1. Описаниелипосомальнойдисперсии2. Размер липосом послеполучения, нм3. рН дисперсиипосле получения(рН воды д/ин)Фильтрация иэкструзия липосом1.
Скоростьпротекания процесса2. Размер везикул послеэкструзии, нм3. ЭВ борхлорина влипосомы, %4. рН дисперсиипосле экструзииСтерилизующаяфильтрацияЛиофилизация1. Внешний видлиофилизата/регидратируемость2. Размер везикул послелиофилизации, нм3. ЭВ борхлорина влипосомы, %4. рН лиофилизатапосле регидратации(рН воды д/ин)Технология№1№2Пленку гидратировали 4/5 от Пленкугидратировали10%общегообъемаводыдля раствором сахарозы.
Сахарозуинъекций.растворяли в общем объеме водыдля инъекций.Вязкая, зеленого цвета, с большимНевязкая, зеленого цвета, сколичествомпены,котораянебольшим количеством пены,практическиполностьюкоторая не отстаивается.отстаивается.266±20261±156,5±0,2 (6,3±0,2)6,4±0,2 (6,0±0,2)Дисперсию МСЛ последовательно пропускали через мембранныефильтры «Pall» с размером пор 1,2 мкм (1 раз), 0,45 мкм (1 раз) и 0,22мкм (5 раз).Высокая (8-10 мл/мин)Низкая (2-3 мл/мин)185±8210±1099,0±0,597,0±0,66,3±0,26,1±0,2В оставшейся 1/5 части объема Не проводится.
После экструзииводы для инъекций растворяли получаетсястерильнаясахарозуидобавлялив липосомальная дисперсия.липосомальнуюдисперсию,которую затем стерилизовали.Стерильную липосомальную дисперсию борхлорина разливали вофлаконы по 4 мл и лиофилизировали.Сухая пористая масса зеленого цвета, легко регидратируемая.170±10190±1097,0±1,097,0±1,06,4±0,1 (6,3±0,1)6,5±0,1 (6,1±0,1)116Обобщая данные Таблицы 15, можно отметить, что характерраспределения криопротектора в липосомах борхлорина практически невлияет на качество конечного продукта. Оба варианта технологии позволяютполучить ЛЛФ-лио борхлорина надлежащего качества и их можноиспользовать при серийной наработке данной ЛФ.
Однако при применениитехнологии №2 выявлено два существенных недостатка. Во-первых, процессэкструзии липосомальной дисперсии затруднен и протекает с получениемвезикул размером более 200 нм, что возможно обусловлено образованиемлипосом с более жесткой структурой при гидратации липидной пленкираствором сахарозы. Во-вторых, при приготовлении ЛФ борхлоринаневозможно скорректировать конечную концентрацию препарата, посколькуна стадии гидратации пленки используется весь объем растворителя.Поэтому для получения ЛЛФ-лио борхлорина выбрана технология №1.3.2.6. Технологическая схема получения и состав ЛЛФ-лио борхлоринаВ результате обобщения результатов исследования предложенатехнологическая схема получения ЛЛФ-лио борхлорина, представленная наРисунке 36.С использованием разработанной технологии получен препарат«Борхлорин липосомальный, лиофилизат для приготовления дисперсии дляинъекций 1,0 мг», который имеет следующий состав:Состав (на 1 флакон)Борхлорин1,0 мгФХ180,0 мгХолестерин32,0 мгПЭГ-ДГФА3,0 мгСахароза405,0 мг.Итого: 621,0 мг117ВР-2.1.
Подготовка воздухаВР-2.2. Подготовкадезинфицирующих имоющих растворовВР-1. Подготовкаводыв канализациюПромстокВР-2. СанитарнаяобработкаВР-2.3. Подготовкапомещений ив атмосферуПотериВР-2.4. Подготовкатехнологической одеждыВР-2.5. Подготовкас ВР.1.ВР-3.1. ПодготовкафлаконовВР-3.2. Подготовка пробокв канализациюВР-3. ПодготовкатарыВР-3.3. ПодготовкаколпачковПромстокНа свалкуОтходыТП-4.1.
Приготовлениехлоформного раствораборхлоринаТП-4.2. Получениелипосомальной дисперсииборхлоринаТП-4.2. Фильтрациялипосомальной дисперсииборхлорина и розлив вофлаконыВ канализациюТП-4. Получениестерильнойлипосомальнойдисперсииборхлорина; Кт, КхПотериНа сжиганиеОтходыТП-5.1. ЗамораживаниеТП-5.2. СублимационнаясушкаНа сжиганиеОтходыТП-5. Получениелиофилизата; Кт,КхТП-5.3.
Обжим флаконов ссублиматом колпачкамиУМО-6.1. Просмотрготовой продукцииУМО-6.2. Маркировка иупаковкаВ канализациюПотериНа сжиганиеУМО-6. Упаковкаи маркировкаготового продукта;Кт, КхОтходыВ канализациюПотериНа склад готовой продукцииОБО. Обезвреживаниеотходов производстваРисунок 36.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
