Диссертация (1141401), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Размер везикул измеряли сразу после измельчения и спустя 3 ч(Таблица 9). После предварительной фильтрации до гомогенизации размерМСЛ борхлорина составлял 250 нм.Влияние числа циклов гомогенизации на размер везикулКоличествоциклов12345678Таблица 9Размер липосом, нм (распределение по фракциям, %)После гомогенизацииЧерез 3 часа237±15 (87%)/54±4 (13%)231±8 (85%)/55±3 (15%)202±10 (88%)/41±5 (12%)140±10 (97%)/20±4 (3%)208±10 (83%)/50±6 (17%)170±8 (92%)/32±4 (8%)152±8 (92%)/29±5 (8%)172±10 (85%)/48±5 (14%)/11±3 (1%)190±8 (78%)/50±4 (22%)170±7 (88%)/39±4 (12%)127±10 (94%)/29±3 (6%)245±14 (48%)/79±3 (50%)/16±3 (2%)157±8 (83%)/41±3 (17%)210±11 (72%)/56±6 (28%)173±10 (78%)/48±5 (22%)205±9 (57%)/69±4 (42%)/12±3 (1%)Как видно из результатов, представленных в Таблице 9, пригомогенизации прерывного характера отмечались колебания в размерах102липосом: после уменьшения диаметра везикул последующее их пропусканиечерез гомогенизатор приводило к укрупнению частиц, что повторялось черезкаждый цикл.
Причем размер везикул оказался нестабилен в течениевремени.ДалеегомогенизировалидисперсиюМСЛборхлоринапутемнепрерывной рециркуляции в течение 1-5 мин с отбором проб через каждуюминуту.Заоднуминутудисперсиясовершала6полныхцикловгомогенизации. Результаты приведены в Таблице 10.Влияние гомогенизации на качество ЛЛФ борхлоринаТаблица 10Размер липосом, нм (распределение по фракциям, %)Дни012260±20 (98%)/021,0±0,2238±16*228±20*27±8 (2%)175±12 (82%)/153±13 (88%)/159±9 (84%)/132,0±0,239±9 (18%)38±6 (12%)36±6 (16%)101±10 (87%)/102±10 (87%)/104±12 (90%)/237,0±0,330±4 (13%)24±4 (13%)26±7 (10%)115±11 (71%)/113±8 (76%)/104±8 (79%)/340,0±0,336±6 (29%)33±5 (24%)30±3 (21%)160±8 (53%)/65±10 (95%)/90±10 (81%)/444,0±0,246±6 (45%)/14±3 (5%)26±3 (19%)11±3 (2%)138±11 (65%)/148±12 (62%)/264±14 (51%)/547,0±0,436±8 (34%)/39±7 (37%)/47±3 (49%)11±2 (1%)11±2 (1%)Примечание: * одна фракция (100%)Время,минt дисп,°СЭВ, %99,0±1,097,0±1,094,0±1,392,0±1,089,0±1,288,0±1,0Через 1 мин рециркуляции дисперсии размер везикул преобладающейфракции уменьшился с 260 до 175 нм, через 2-3 мин липосомы имелидиаметр преобладающей фракции около 100-115 нм (Рисунок 30А, 30Б, 30В).Полученные дисперсии оставались стабильными при хранении.
Однакогомогенизациявтечение4-5миннеустойчивых, склонных к слиянию липосом.способствовалаобразованию103БАВРисунок 30. Распределение везикул по размеру в зависимости от времени гомогенизации:А – через 1 минуту – фракции липосом со средним диаметром 175 и 39 нм,Б – через 2 минуты – фракции липосом со средним диаметром 101 и 30 нм,В – через 3 минуты – фракции липосом со средним диаметром 115 и 36 нм.Приоценкеуровнявключенияборхлоринаустановлено,чтосодержание ФС в липосомах с каждой минутой гомогенизации снижалось на2-3%, что обусловлено нагреванием дисперсии и частичным разрушениеммембраны липосом.Поэтому для получения стабильных во времени везикул со среднимразмером около 175 нм и высоким уровнем включения борхлорина (97%)наиболее оптимальной является гомогенизация дисперсии объемом 60 мл втечение 1 мин.
Однако следует отметить, что при обработке малых объемовдисперсии (60 мл) значительная часть теряется в основных узлах прибора:потери составляют порядка 15-20%.104В результате сравнительного анализа способов получения ОСЛборхлорина установлено, что наиболее оптимальным методом является 5кратная экструзия под давлением с применением нейлоновых фильтров.Гомогенизация также позволяет получить качественную ЛЛФ борхлорина иможет быть рекомендована для крупномасштабного производства препарата.3.2.4. Разработка технологии лиофилизации ЛЛФ борхлоринаВ ходе исследования установлено, что ЛЛФ борхлорина при условиихранениявхолодильникепритемпературе+2...+8°Сстабильнанепродолжительный период времени – в течение 5-6 суток.
При болеедлительном хранении наблюдается постепенное слияние и образованиевезикул более крупных размеров и снижение значения рН, что обусловленопроцессами перекисного окисления липидов, входящих в состав ЛФ. Данныйнедостаток препятствует осуществлению серийного производства ЛЛФборхлорина. Для повышения устойчивости липосом борхлорина в процессехранения и продления срока годности предложена стабилизация ЛФпосредством сублимационной сушки.Выбор криопротектора для лиофилизации ЛЛФ борхлоринаДля достижения максимальной стабилизации липосом в процессезамораживания и лиофильной сушки необходимо введение криопротектора.Добавление криопротектора позволяет предупредить слияние и агрегациювезикул, а также сохранить способность липосом к регидратации.Основной задачей этапа разработки технологии лиофилизации ЛЛФборхлорина являлся выбор типа криопротектора и его количества, чтообеспечивало бы получение лиофилизата надлежащего качества. В качествекриопротекторовисследовалисьнаиболеечастоиспользуемыевфармацевтической практике при лиофилизации липосом вещества –представители класса «углеводы» – глюкоза, лактоза, сахароза, трегалоза и«многоатомные спирты» – маннит.105Глюкозу, сахарозу, трегалозу и маннит вводили в липосомальнуюдисперсию перед лиофилизацией в виде концентрированного раствора вмолярных соотношениях ФХ/криопротектор 1:5 и 1:10.
Поскольку лактоза вотличие от вышеупомянутых веществ имеет более низкую растворимость вводе (16 г вещества на 100 мл воды при 20°С) ее непосредственно растворялив липосомальной дисперсии в соотношениях ФХ/криопротектор 1:5 и 1:7,5. Вкачестве контроля использовали липосомальную дисперсию, которуюсмешивали с водой для инъекций без добавления криопротектора.Выбор криопротектора и его количества проводили, оценивая внешнийвид лиофилизата, способность полученного лиофилизата к регидратации (втечение 10 минут), размер липосом до и после сублимационной сушки и ЭВборхлорина (Таблица 11).В ходе работы было получено и проанализировано 11 образцовлиофилизата. Все образцы представляли собой сухую массу зеленого цвета.Было показано, что при регидратации контрольного лиофилизата (безкриопротектора) образуется густая комковатая дисперсия и отмечаетсяразделение липосом на две фракции со значительным увеличением среднегоразмера везикул преобладающей фракции после сублимационной сушки от180 до 506 нм (Рисунок 31А, 31Б).АБРисунок 31.
Распределение по размеру везикул без криопротекторадо (А) – фракция липосом со средний диаметр 180 нм и после (Б) – фракции липосом сосредним диаметром 506 и 31 нм лиофилизацииТаблица 11Выбор криопротектора для лиофилизации ЛЛФ борхлоринаРазмер липосом, нм(распределение по фракциям, %)до лиофилизациипосле лиофилизации№образцаКриопротекторМолярноесоотношениеФХ/криопротектор1Контроль–180±7*1:5234567891011ЛактозаТрегалозаГлюкозаМаннитСахарозаПримечание: * одна фракция (100%)ЭВ,%Регидратируемость(+/-)506±24 (98%)/31±13 (2%)99,0±0,5-183±5*204±12 (88%)/77±8 (12%)99,0±0,4+1:7,5175±8*151±7*, осадок96,0±0,8+1:5175±6*166±9 (60%)/44±5 (40%)97,0±1,0+1:10180±8*165±7 (83%)/40±3 (17%)92,0±0,8+1:5174±10*242±18 (98%)/22±11 (2%)99,0±0,5-1:10170±8*169±7*95,0±0,9+1:5167±6*707±30 (93%)/73±5 (7%)99,0±0,5-1:10159±10*263±10 (98%)/27±5 (2%)97,0±0,6-1:5167±7*158±10*97,0±1,0+1:10168±8*189±14 (96%)/51±6 (4%)92,0±1,0+107Нарушение процесса регидратации лиофилизата также отмечалось вобразцах с глюкозой в соотношении ФХ/криопротектор 1:5 и маннитом всоотношениях 1:5 и 1:10, что проявлялось образованием густой дисперсии иувеличением размеров везикул после лиофильной сушки: для глюкозы всоотношении ФХ/криопротектор 1:5 от 174 до 242 нм, маннита всоотношении 1:5 от 167 до 707 нм и маннита в соотношении 1:10 от 159 до263 нм.
При использовании в качестве криопротектора лактозы всоотношении ФХ/криопротектор 1:5, трегалозы в соотношениях 1:5 и 1:10 исахарозы в соотношении 1:10 после смешивания соответствующих образцовлиофилизата с водой для инъекций образовывались неоднородные подиаметру липосомы (2 фракции везикул).При регидратации образца лиофилизата с лактозой в соотношенииФХ/криопротектор 1:7,5 отмечалось наличие белого осадка, что возможнообусловлено медленным растворением указанного вещества в воде.
Хотяразмер липосом в данном случае составил наименьшее значение 151 нм посравнению со всеми образцами (Рисунок 32А), наличие осадка лактозызатрудняло дальнейшее проведение количественного анализа образца.ВведениеглюкозывсоотношенииФХ/криопротектор1:10обеспечивало сохранение диаметра липосом в процессе лиофилизации –размерывезикулдоипослесублимационнойсушкисоставилисоответственно 170 и 169 нм (Рисунок 32Б).
В образце с сахарозой всоотношении 1:5 наблюдали снижение размера везикул после лиофилизациина 10 нм (Рисунок 32В). При сравнении данных образцов по показателюуровня включения борхлорина обнаружено, что при использовании глюкозыв соотношении ФХ/криопротектор 1:10 ЭВ борхлорина снизилась до 95%, а вслучае сахарозы в соотношении 1:5 – до 97%.108АБВРисунок 32. Распределение везикул по размерам после лиофилизации при использованиив качестве криопротектора: А – лактозы в соотношении ФХ/криопротектор 1:7,5 –фракция липосом со средним диаметром 151 нм , Б – глюкозы в соотношении 1:10 –фракция липосом со средним диаметром липосом 169 нм, В – сахарозы в соотношении 1:5– фракции липосом со средним диаметром липосом 189 и 51 нм.Из результатов данного исследования следует, что по показателямкачества оптимальным криопротектором для получения лиофилизата ЛЛФборхлорина является сахароза в молярном соотношении ФХ/криопротектор1:5.Изучение влияния концентрации сахарозы в качестве криопротекторадля лиофилизации ЛЛФ борхлоринаДля изучения сахарозы в качестве криопротектора для липосомальнойдисперсии борхлорина в расширенном диапазоне концентраций получены ипроанализированы образцы ЛЛФ-лио, содержащие данный дисахарид вконцентрации 2, 4, 6, 8, 10, 12 и 20%, что соответствует молярным109соотношениям ФХ/криопротектор 1:1, 1:2, 1:3, 1:4, 1:5, 1:6 и 1:10 (Таблица12).Таблица 12Влияние концентрации сахарозы на качество ЛЛФ-лио борхлоринаРазмер липосом, нмКонцентрация (распределение по фракциям, %)сахарозы, %допослелиофилизации лиофилизации501±22 (96%)/1:12175±10*38±12 (4%)286±18 (94%)/1:24165±10*60±14 (6%)1:36170±8*190±12*1:48166±9*166±10*1:510167±7*158±8*184±8 (93%)/1:612167±7*66±5 (7%)189±14 (96%)/1:1020168±8*51±6 (4%)Примечание: * одна фракция (100%)МолярноесоотношениеФХ/сахарозаЭВ,%Регидратируемость(+/-)99,0±0,3-98,0±1,0-97,0±0,997,0±1,097,0±1,0+++95,0±1,1+92,0±1,0+Введение сахарозы в липосомальную дисперсию в соотношенияхФХ/криопротектор 1:1 и 1:2 оказывало недостаточный криопротективныйэффект в процессе сублимационной сушки – лиофилизат регидратировался собразованием густой массы, а диаметр преобладающей фракции липосомувеличивалсяпочтив3и2разаотпервоначальногозначениясоответственно.В случае использования сахарозы в высоких концентрациях – 12 и 20%формировались неоднородные по размеру везикулы и отмечалось снижениеЭВ до 95 и 92% соответственно.Образование гомогенной липосомальной дисперсии с включениемборхлорина на уровне 97% наблюдали в диапазоне концентраций сахарозы 610%.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
