Диссертация (1141381), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Среди препаратовлипосомальногодоксорубицинаследуетотметить,ThermoDox(Celsion47Corporation,США),находящийсявстадииклиническихисследований.ThermoDox, также как и Doxil, является ССЛ с использованием ДСФЭ-ПЭГ2000,однако основу липосомальной конструкции данного препарата составляетдипальмитоилфосфатидилхолин(DPPC)вкомбинациисмоностеароилфосфатидилхолином (MSPC), свойства которых обеспечиваютконтролируемую температурой (42 °C) утечку препарата из везикул. На базедоксорубицина в настоящее время разрабатываются препараты направленнойдоставки MCC-465 (Mitsubishi Pharma, США) с антителами GAH для леченияметастатического рака желудкаи Anti-EGFR ILs-dox (Университет Базеля,Швейцария) с антителами к EGFR для лечения солидных опухолей.
В настоящеевремя оба препарата находятся в фазе клинических исследований[181].В состав липосомальных конструкций были успешно включены и другиеантибиотикиантрациклиновогоряда:даунорубицинмитоксантрон(LEM-ETU).ПосвоейструктуреPharmaceuticals,США)представляетсобой(DaunoXome)DaunoXomeлипосомы,и(NeXStarзагруженныедаунорубицином.
В состав липидной композиции данных липосом входитдистеароилфосфатидилхолин и холестерин. Препарат одобрен в США и успешноприменяется в лечении Саркомы Капоши и рака крови. Митоксантрон влипосомальной форме LEM-ETU (NeoPharm Inc., США) находится в фазеклинических исследований, планируется его применение при лейкемии, ракемолочной железы, желудка, печени и яичников. Липосомальный митоксантронLEM-ETU представляет собой ОЛ на основе диолеоилфосфатидилхолина (DOPC)холестерина и кардиолипина со средним диаметром 150 нм, получаемые методоминжекции этанола с последующей экструзией и лиофилизацией получаемойдисперсии.ЗаключениеТаким образом, приведенные в данной главе материалы убедительнопоказывают пераспективность дальнейшего исследования иммунолипосомальныхлекарственных форм препаратов антрациклинового ряда.
Иммунолипосомальныелекарственные формы сохраняют в себе положительные качества липосомальных48лекарственныхбиодоступности,форм:снижениебиосовместимость,токсичностилегкуюпрепаратов,биодеградациюповышениеитранспортпрепарата в клетки. В то же время, модификация липосомальных конструкцийпосредством антител позволяет повысить их эффективность и селективность поотношениюкклеткамзлокачественныхновообразований.49ГЛАВА 2.МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ2.1 МатериалыПрипроведениитехнологических,химико–фармацевтическихибиологических исследований липосомальной формы и иммунолипосомальнойконструкции митоксантрона использовали химические субстанции и реактивы,которые соответствовали требованиям нормативной документации (ГОСТов, ТУ,ФСП, общих и частных фармакопейных статей ГФ XI, ГФ XII, Eur Ph 6th edn., BP2009, JP 15th edn., USP33–NF28).Действующие веществаМитоксантрон – (1,4 – дигидрокси–5,8–бис[2–(2–гидроксиэтиламино)этиламино] – антрацен–9,10–диона дигидрохлорид) (ООО "Синбиас Фарма",Украина)– порошок синего цвета.
Mr =517,4. Умеренно растворим в воде,малорастворим в спирте метиловом, практически не растворим в ацетоне.Моноклональные антитела фито HER–2 neu (Лаборатория трансгенныхпрепаратов, НИИ ЭДиТО, Россия).Компоненты липосомальной мембраныП–нитрофенилкарбонил–ПЭГ–липид(pNP–PEG3000–lipid)(УнифектГрупп, Россия). Mr = 3400 (Рисунок 8).Рисунок 8 – Структурная формула П–нитрофенилкарбонил – ПЭГ–липидаФосфатидилхолин (EPC)(Lipoid GmbH, Германия).
Mr =760,09.Фосфатидилхолин (S–PC3)(Lipoid GmbH, Германия). Mr =779,76.1,2–дистеароил–sn–глицеро–3–фосфоэтаноламин–N–[метокси(полиэтиленгликоль)–2000] (ДСФЭ-ПЭГ-2000) аммониевая соль(Lipoid GmbH, Германия), 18:0 PEG2000 PE, Mr = 2805,5(Рисунок 9) – порошок50белого цвета. Растворим в хлороформе, толуоле, метаноле и этаноле, нерастворим в воде и ацетоне.Рисунок 9 – Структурная формула ДСФЭ-ПЭГ-2000Холестерин (AvantiPolarLipids, Inc., США), Mr = 386,66 (Рисунок 10)–кристаллический порошок от белого до бледно–желтого цвета без запаха или сослабым запахом, чувствителен к действию света.
Легко растворим в хлороформеи диэтиловом эфире, растворим в 1,4–диоксане, умеренно растворим в ацетоне иэтаноле, практически не растворим в воде и метаноле.Рисунок 10 – Структурная формула холестеринаВспомогательные веществаАммоний сернокислый (х.ч.), ЗАО Мосреактив (Россия), Mr = 132,14 –бесцветный кристаллический порошок. Растворим в воде (76,4 г в 100 мл при25 °C). Практически не растворим в спирте.HEPES (N–2–гидроксиэтилпиперазин–N'–2–этансульфоновая кислота),AppliChem GmbH (Германия), Mr = 238,31 – цвиттер–ионный буфер с pKa = 7,55(20 °C).
Представляет собой белый кристаллический порошок без запаха.Растворимость в воде – 40 г/100 мл (20°C), pH 1 % водного раствора 4,7–6,0.Натрия хлорид (х.ч.), Химмед (Россия), Mr = 58,44;КриопротекторыСахароза (имп.), Химмед (Россия), Mr = 342,30 – бесцветные кристаллыили белый мелкокристаллический порошок без запаха, со сладким вкусом.51Сахароза растворима в воде, мало растворима в этаноле и метаноле, практическине растворима в диэтиловом эфире, бензоле, ацетоне и хлороформе.Лактоза безводная (Sigma–Aldrich GmbH, Германия), Mr = 342,30 – белыекристаллы или белый кристаллический порошок без запаха, слабого сладкоговкуса.
Легко растворима в воде, практически не растворима в этаноле, метаноле,диэтиловом эфире и хлороформе.РастворителиХлороформ (трихлорметан) стабилизированный (х.ч.), Химмед (Россия).Спирт этиловый 95 %, ФС 42–3072–94.Вода очищенная деионизированная, ФС 42–2619–98.Материалы для хроматографииСефадекс (Sephadex) G–50 Superfine (AmershamBiosciences, Швеция) –гель на основе декстрана для колоночной хроматографии. Рабочий диапазонpH 2–10.СферическиегранулысефадексаG–50Superfineявляютсямелкозернистыми (20–50 мкм). Область фракционирования для глобулярныхбелков составляет 1,5–30 тыс.
Дальтон, для декстранов – 0,5–10 тыс. Дальтон(меньшая цифра соответствует молекулам, для которых доступен весь объемвнутри гранул, большая – молекулам, практически не проникающим в гранулы).Материалы для фильтрацииПоликарбонатныемембранныефильтрыNuclepore(Whatman,Великобритания) диаметром 19 мм и 25 мм, с размером пор 100, 200 и 400 нм.Целлюлозные мембранные фильтры Millipore (США) диаметром 25 мм сразмером пор 0,22 мкм.Упаковочные материалыДля упаковки липосомальной дисперсии использовали флаконы из трубкистеклянной для лекарственных средств из нейтрального стекла ФО–1–20–НС–1 поТУ 64–2–10–87, вместимостью 20 мл, укупоренные пробками из резины 52–599/3,52–599/1 или 52–599/2 по ТУ 38.006108–95 под обкатку алюминиевымиколпачками по ОСТ 64–009–86.52Материалы для биологических исследованийИсследование in vitro проводилось на клеточной линии рака молочнойжелезы SKBR-3.
Морфология: эпителиальноподобная. Способ культивирования:монослойный. Культура опухолевых клеток получена из банка клеточных культурФГБУ «РОНЦ им. Н.Н. Блохина» РАМН. Для проведения исследованийприменялись:Раствор трипанового синего (“Flow Lab.”, UK). Для работы использовали0,5% раствор красителя в PBS, содержащий 3мМ NaN3.Перед использованиемраствор центрифугировали для удаления агломератов красителя. Подсчет клетокпроводили в течение не более 5 мин после добавления красителя в камере Горяеваобщепринятым методом;Питательная культуральная среда RPMI–1640 (ПанЭко, Россия);Телячья эмбриональная сыворотка (Gibco BRL, Life Technologies, США);L–глутамин (Sigma, Германия);Гентамицин (ICNBiomedicals, Inc., США);Раствор витаминов, ПанЭко (Россия);Раствор аминокислот, ПанЭко (Россия);Фосфатно–солевой буфер (PBS) готовили по прописи: для приготовления0,5 литра 10–кратного концентрата делали навески солей NaCl– 40 г., KCl –1г.,Na2HPO4x12H2O – 9 г., KH2PO4 – 1 г., азид натрия –0,5 г., pH 7,2–7,4;96-луночные плоскодонные планшеты, Costar (США).2.2 ОборудованиеРоторный испаритель BÜCHI Rotavapor R–200 и водяная баня BÜCHIHeating Bath B–490 (BÜCHI Labortechnik AG, Швейцария).Экструдер Avanti® Mini-Extruder (Avanti Polar Lipids, Inc., США).Наносайзер Nicomp 380 Submicron Particle Sizer (Particle Sizing Systems,США).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
