Диссертация (1141381), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Данная методика успешноприменялась для загрузки доксорубицина [154,175] и митоксантрона [159]. Сутьметодики основана на создании трансмембранных градиентов сульфата аммония[123,154] При инкубации антибиотика вместе с липосомами, содержащимивнутри сульфат аммония, во внешнем не буферизованном солевом растворе,небольшое количество нейтрального аммиака диффундирует из везикул, создаваякислую среду внутри липосом (pH ≈ 2,7). При этом любой нейтральный препарат,диффундирующийвнутрьлипосом,присоединяетпротон,становитсязаряженным и теряет способность проникать через мембрану во внешнюю среду.Если загрузка препарата продолжается, к нему присоединяются доступныепротоны, а диффузия нейтрального аммиака создает большее количествопротонов для загрузки препарата. Данный процесс происходит до тех пор, покавесь препарат не загрузится, или пока внутренний запас протонов не истощится,создав внутреннее значение pH ≈ 5,1.
Схематическое изображение процессапредставлено на Рисунок 5.Рисунок 5 - Инкапсуляция препарата в липосомы с использованиемградиента сульфата аммония.421.5 Модификации липосом.1.5.1 Пролонгирование циркуляции липосом (ССЛ).После введения липосом in vivo обычные липосомы (ОЛ) адсорбируют насвоей поверхности молекулы опсонинов, в ходе процесса, который называетсяопсонизацией,вызывающийраспознаваниеизахватлипосомсистемоймононуклеарных макрофагов, в результате этого процесса, липосомы быстроудаляются из кровеносного русла[134,200].
Модификация поверхности липосомгидрофильными полимерами, например ПЭГ (полиэтиленгликоль), снижаетвзаимодействие с опсонинами сыворотки крови и последующее распознавание ифагоцитоз клетками системы мононуклеарных макрофагов, что увеличиваетвремя циркуляции липосом в кровеносном русле[257].Разработка таких,покрытых ПЭГ липосом, также известных как стерически стабилизированныелипосомы (ССЛ) показала, что они имеют серьезный потенциал для дальнейшегоиспользования и клинического применения[172]. ПЭГ оказался наиболееудобным полимером для защиты липосомальных частиц, благодаря своимкачествам: простому изготовлению, относительно низкой цене, возможностиконтроля молекулярной массы и способности связывания с липидами илибелками, включая антитела, множеством методов[174].
Принципиальная схемаустройства обычных (ОЛ) и стерически - стабилизированных (ССЛ) липосомпредставлена на Рисунке 6.43Рисунок 6 –Принципиальная схема строения ОЛ и ССЛ.1.5.2 Присоединение антител (иммунолипосомы).Одной из эффективных стратегий для повышения терапевтическойэффективности противоопухолевых препаратов, является «активный» или т.н.лиганд–опосредованный транспорт липосомальных препаратов [152,214,259].Существует множество различных методов, позволяющих использовать антитела,их фрагменты, гликопротеины, карбогидраты и факторы роста для таргетнойдоставки липосом к опухолевым клеткам [36,214].
Широкие возможности дляразвития лекарств с направленной доставкой открыла гибридомная технология,предложенная Келлером и Мильштейном в 1975 г.[147]. В настоящее времяразработано и производится множество антител к различным мишеням,представленнымнаповерхностиопухолевыхклеток[73,81,148,197,198].Разработанные ранее ИК, можно классифицировать на три типа:Тип А. МКА ковалентно связанны с поверхностью ОЛ.Тип В.
МКА ковалентно связаны с поверхностью ССЛ.44Тип С. МКА связаны с цепями ПЭГ на поверхности ССЛ[149].Самым эффективным и распространенным в настоящее время стал третийтип (Тип С), в виду того что он сочетает в себе сохранение эффективностизакрепленных МКА и максимальную защиту от захвата РЭС [198, 235–242].В настоящее время существует множество методов присоединения МКА иFab’ фрагментов к дистальному концу ПЭГ – липидных коньюгатов. Наибольшеераспространение получили методы, основанные на ковалентном связыванииантител с использованием трех химических реакций:1.
Реакциимеждуактивированнымикарбоксильнымигруппами,приводящей к образованию амидной связи;2. Реакции между пиридилдитиолами и тиолами, результатом которойявляется образование дисульфидных связей;3. Реакциимеждумалеимиднымипроизводнымиитиолами,собразованием тиоэфирных связей [36,122].Широкоераспространениеполучилпостинсерционныйметод,сутькоторого состоит в коньюгации векторных лигандов к пегилированныммицеллам, которые затем встраивают в предварительно полученные липосомыпутем простой инкубации [41]. Плюсом данного подхода является возможностьизменять условия изготовления липосом и загрузки ЛВ независимо от условийприсоединения лигандов. Однако, большинство методов, приведенных выше,требуют предварительной модификации антител и предполагают использованиетоксичных промежуточных продуктов.
В связи с этим для упрощения процедурыприсоединения лигандов, содержищих аминогруппы (МКА) и минимизациииспользованиятоксичныхсоединенийбылопредложеноиспользованиеамфифильного производного п-нитрофенилкарбонил-ПЭГ-ФЭА (pNP-PEG-PE)[237]. Особенностью применения данного соединения является то, что реакциямежду pNP-группой и лигандом протекает легко и количественно в растворе с рН8,0 , при этом свободные pNP- группы элиминируются посредством гидролиза.Рисунок 7.45Рисунок 7- Схема реакции присоединения лиганда к pNP-PEG-lipid.1.6 Липосомальные лекарственные формы веществантрациклинового рядаОдной из задач при химеотерапии злокачественных новообразованийявляется изменение характера распределения ЛВ в организме с цельюмаксимизировать его воздействие на опухоль и минимизировать его влияние наздоровые ткани и органы.
Среди огромного количества наноразмерныхлекарственных форм особое место принадлежит липосомальным средствамдоставки. С биомедицинской точки зрения они обладают рядом полезныхсвойств: биосовместимость, малая активность в отношении антигенных,пирогенных, аллергических и токсических реакций, простая биодеградация,защитавнутреннегосодержимогоотинактивирующихвоздействийфизиологических жидкостей и способность доставки лекарственных веществвнутрь клеток.
Было показано, что включение противоопухолевых препаратов вССЛ увеличивает их накопление в тканяхс повышеннойсосудистойпроницаемостью сосудов [14,95,110]. В то же время, капиллярные аномалии иналичие прерывистого эндотелия в опухолевой ткани способствует накоплениюлипосом во внутритканевом пространстве солидных опухолей. Попадая в этузону, липосомальные структуры имеют возможность непрерывно высвобождатьЛВ. [40,263] Данное явление описано в зарубежной литературе как «эффект46повышеннойпроницаемостиВышеперечисленныесосудов»свойства(EPRлипосомальныхэффект)[168,182].-частицобуславливаютихприменение в качестве носителей химеопрепаратов в терапии злокачественныхновообразований.Для доставки препаратов антрациклинового ряда был разработан рядлипосомальных форм.
Первым липосомальным препаратом, разрешенным кмедицинскомуприменению,гидрохлорида Doxil (JanssenсталпрепаратнаосноведоксорубицинаProducts, LP, США). В настоящее время онприсутствует на рынке под марками Doxil и Caelyx, препарат представляет собойстерическистабилизированные-сиспользованиемПЭГ-2000дистеароилфосфатидилэтаноламина липосомы, основу липидного бислоя которыхсоставляет дистеароилфосфатидилхолин и холестерин. Средний диаметр липосомв препарате составляет 100 нм.
Включение в липосомы производится сиспользованием сульфата аммония, что позволяет производить наиболее полнуюинкапсуляцию препарата. Препарат одобрен в США и ЕС при терапии СаркомыКапоши, рака молочной железы и рака яичников. Аналогом препаратаDoxil/Caelyx, распространенным на рынках юго-восточной азии, являетсяпрепарат Lipo-dox (SUN Pharmaceutical ltd., Индия). По форме Doxil и его аналогиявляются концентратами для приготовления растворов для инъекций, в дозировке2 мг/мл. Липосомальная доставка доксорубицина была реализована также впрепарате Myocet (Teva Pharmaceutical Industries Ltd.).
Данный препаратпредставляет собой не пегилированную форму липосомального доксорубицина.Основу липидной стенки липосом, составляют яичный фосфатидилхолин ихолестерин. Препарат одобрен для медицинского применения в Европе и Канадедля лечения метастатического рака молочной железы в комбинации сциклофосфамидом.Данныйпрепаратнаходитсявфазеклиническихисследований в комбинации с герцептином и таксолом для лечения HER-2положительного рака молочной железы. Лекарственная форма Myocet –лиофилизат для приготовления раствора для инъекций.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
