Диссертация (1141381), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Данная работа посвященаразработке ИЛЛФ Митоксантрона с гуманизированными моноклональнымиантителами к HER-2 антигену.Цель исследованияРазработкасоставаитехнологииполученияиммунолипосомальнойлекарственной формы митоксантрона с гуманизированными моноклональнымиантителами к HER-2.Задачи исследования1. На основе химико-фармацевтических исследований выбрать составлипосомальной и иммунолипосомальной формы митоксантрона;2. Разработатьтехнологиюиммунолипосомальнойполученияформылипосомальноймитоксантрона,устойчивойиприхранении;3. Выбрать критерии и параметры качества разработанных форм;4.
Оценитьцитотоксическуюактивностьлипосомальнойииммунолипосомальной формы митоксантрона in vitro;Методы исследования1. Технологические методы: экструзия, гомогенизация, лиофилизация2. Методы фармацевтического анализа липосомальных форм.3. Физические:спектрофотометрияколичественногоопределениесодержаниябелка),(определениемитоксантрона,динамическаяспектроскопия(определение геометрических характеристик везикул).включенияиколичественноесветорассеяния74. Физико-химические: гель – фильтрация (отделение невлючившегосяпрепарата с целью дальнейшего определения включения).5. Биологические методы оценки цитотоксичности и специфичностиполученныхЛЛФиИЛЛФinvitro(МТТ-тестипроточнаяцитофлюориметрия).Научная новизна исследованияРазработан оптимальный состав и технология изготовления ИЛЛФмитоксантрона в виде лиофилизата для приготовления инъекционного раствора.
Вопытах in vitro установлено цитотоксическое действие ИЛЛФ митоксантрона всравнении с субстанцией митоксантрона и аналогичными липосомальнымиформами.Теоретическая значимостьРазработансоставиммунолипосомальнойиметодикаформыполучениямитоксантронаналипосомальнойосновеисоевогофосфатидилхолина. Разработана методика очистки везикул от не загруженногопрепарата и неприсоединенных антител методом гельфильтрации.Изученовлияниекриопротекторовнастабильностьлипосомииммунолипосом с митоксантроном до и после лиофилизации, а также в процессезамораживания до температуры -18 °C. Обосновано использование в качествекриопротектора10%растворасахарозы.Произведеноисследованиецитотоксической активности липосомальных и иммунолипосомальных форммитоксантрона и субстанции на клетках-мишенях.Практическая значимость исследованияРазработанановаялипосомальнаяииммунолипосомальнаяформавысокоактивного противоопухолевого антибиотика митоксантрона для таргетнойпротивоопухолевой терапии HER-2 позитивного рака молочной железы.
Показанаего стабильность при хранении в течение 6 месяцев при температуре −18 °C.Разработан проект ФСП на «Митоксантрон липосомальный, лиофилизатдля приготовления раствора для инъекций 2 мг» и « Митоксантрон8иммунолипосомальный, лиофилизат для приготовления раствора для инъекций 2мг».Положения, выносимые на защиту−Результатыисследованийпоразработкесоставаитехнологииизготовления ИЛЛФ Митоксантрона.− Методики качественного и количественного анализа и показателикачества ИЛЛФ Митоксантрона.− Результаты изучения цитотоксического действия ИЛЛФ Митоксантрона вопытах in vitro.Апробация работыМатериалы проведенных исследований представлены на конференциях: XIIВсероссийской научно–практической конференции с международным участием«Отечественные противоопухолевые препараты», Москва, 31 марта – 1 апреля2015 года.Апробациядиссертационнойработыпроходиланакафедрефармацевтической технологии 5 ноября 2015, Москва, Никитский бульвар, д.
13..ПубликацииПо материалам диссертации опубликовано 4 печатных работы, из них 2статьи в журналах, рекомендованных ВАК РФ, 1 доклад и 2 тезисов на русскомязыке.Связь задач исследований с проблемным планом фармацевтическойнауки.Диссертационная работа выполнена в соответствии с тематикой и планомнаучных исследований ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова МинздраваРоссии, комплексная тема: «Совершенствование образовательных технологий додипломногоипоследипломногомедицинскогоифармацевтическогообразования».
Номер государственной регистрации 01.2.011.68237.Структура и объем диссертацииДиссертационная работа состоит из введения, обзора литературы, описанияматериалов и методов, глав обсуждения результатов собственных исследований,9общего заключения, общих выводов, списка литературы и 6 приложений. Работаизложена на 145 страницах машинописного текста, содержит 41 рисунок и 18таблиц. Библиографический список включает 266 наименований, из которых 227на иностранном языке.10ГЛАВА 1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ1.1 Митоксантрон1.1.1 Химические свойства митоксантронаПо химической структуре митоксантрона гидрохлорид относится к группедисперсных антрахиноновых красителей, физико–химические свойства которыхдостаточно хорошо изучены [25].
Антрациклиновые антибиотики имеютуглеродный скелет, в котором ядро антрахинона линейно аннелировано сшестичленным насыщенным карбоциклом и содержит а–гидроксигруппы,обуславливающие красную или оранжевую окраску препаратов (Рисунок 1) [29].Рисунок 1 – Химическое строение представителей группы антрациклиновыхантибиотиков.RR1R2Дауномицин (рубомицин)СНзHHДоксорубицин (адриамицин)CH3OHG,HКарминомицинHHG,HИз множества производных антрахинона, обладающих противоопухолевойактивностью,Митоксантроннашелнаиболееширокоеприменение.Митоксантрон, чаще всего, присутствует в лекарственных формах в видемитоксантронагидрохлорида(Рисунокмитоксантрона представлены в Таблица 1.2).Физико–химическиесвойства11Таблица 1 – Физико–химические свойства митоксантрона имитоксантрона дигидрохлорида.МитоксантронОписаниеКристаллический порошок[66]Точка плавления160–162C[66]Растворимостьумеренно растворим в воде[66]малорастворим в метанолепрактически нерастворим в ацетоне, ацетонитриле ихлороформе.Митоксантрона дигидрохлоридОписаниеГигроскопичный сине–черный порошок[66]Температура203–205 C[66]ДанныеБыли получены данные по ультрафиалетовому,[56]спектроскопииинфракрасному, ЯМР (протонный и 13C), массплавленияспектруРастворимостьУмеренно растворим в воде[66]Малорастворим в метанолеПрактически нерастворим в ацетоне, ацетонитрилеи хлороформеКонстантыpKa , 5.99, 8.13диссоциацииРисунок 2 – Митоксантрон гидрохлоридCAS 70476–82–3C22H28O6N4·2HClМолекулярная масса 517,41 г/моль[56]12Первые публикации, посвященные данному соединению появились в 1978 г.и содержали только физико–химические свойства.
[186,264] Способ получениямитоксантрона гидрохлорида впервые был описан и запатентован позже, в 1979г.сотрудниками фирмы Cyanamid (США) K. Murdock и C. Zee–Cheng. [187,264]Митоксантрона гидрохлорид – общее название для дигидрохлоридной соли.В настоящее время он присутствует на рынке как 5–, 10–, 12.5– и 15мл раствордлявнутривенноговведениясодержащий2.33мг/млмитоксантронагидрохлорида, что эквивалентно 2 мг/мл раствору митоксантрона. Инъекционныйраствор может также содержать уксусную кислоту, ацетат натрия, хлорид натрия,натрия метабисульфит и натрия сульфат как вспомогательные вещества[63,261].Митоксантрон получают конденсацией лейкотетраоксиантрахинона с β –оксиэтилэтилендиаминомвсредеN,N,N,N–тетраметилендиамина,споследующим окислением хлоранилом. Последующие опубликованные способыполучения митоксантрона гидрохлорида являются модификациями данногоспособа и отличаются условиями проведения реакции.
Особого внимания впроцессе синтеза заслуживает стадия окисления в связи с возможнымобразованием трудноудаляемых побочных продуктов реакции. Митоксантрон принагреваниисвышевнутримолекулярной100Cилициклизациивсщелочнойобразованиемсредеподвергаетсятетрациклическогосоединения[229,230].Европейской фармакопеей для митоксантрона гидрохлорида нормированыследующие примеси:1. 1–амино–5,8–дигидрокси–4–[[2–[(2–гидроксиэтил)амино]этил]амино]антрацен–9,10–дион;2. 5–гидрокси–1,4–бис[{2–[(2–гидрокси–этил)амино]этил}амино]антрацен–9,10–дион;3. 2–хлоро–1,4–дигидрокси–5,8–бис[[2–[(2–гидроксиэтил)амино]этил]амино] антрацен–9,10–дион;134.
8,11–дигидрокси–4–(2–гидроксиэтил)–6–[[2–[(2–гидроксиэтил)амино]этил]амино]–1,2,3,4–тетрагидронафто–[2,3–f]хиноксалин–7,12–дион[80].1.1.2 Механизм действияМитоксантрона гидрохлорид – противоопухолевый препарат из группысинтетических антрациклинов, широко применяемый в онкологической практике.По своей химической структуре митоксантрон сходен с доксорубицином идаунорубицином [177,129].Был синтезирован с целью снизить побочные эффекты антрациклинов –одной из наиболее эффективных групп препаратов – интерколяторов, в частностиихкардиотоксичность[107,42].Механизмпротивоопухолевогодействиямитоксантрона изучается уже более 20 лет. Согласно данным этих исследованийосновным механизмом цитостатического действия митоксантрона, также как идругихантрациклиновМитоксантронявляетсявстраиваниемолекулывДНК[162,188].интеркалирует в ДНК с помощью электростатическоговзаимодействия нарушая процессы транскрипции и трансляции ДНК раковойклетки, что приводит к ее гибели[129,146,164,162,163].
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
