Диссертация (1141381)

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла

ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕУЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯМОСКОВСКАЯ МЕДИЦИНСКАЯ АКАДЕМИЯИМЕНИ И.М.СЕЧЕНОВА РОСЗДРАВАНа правах рукописиРАЙКОВ АЛЕКСАНДР ОЛЕГОВИЧРАЗРАБОТКА ТЕХНОЛОГИИ И СОСТАВАИММУНОЛИПОСОМАЛЬНОЙ ФОРМЫ МИТОКСАНТРОНА СГУМАНИЗИРОВАННЫМИ МОНОКЛОНАЛЬНЫМИАНТИТЕЛАМИ К HER–2 АНТИГЕНУ14.04.01 – Технология получения лекарствДиссертацияна соискание ученой степени кандидата фармацевтических наукНаучный руководитель:доктор фармацевтических наук, профессор И.И. КраснюкМосква – 20162ОглавлениеОглавление ..................................................................................................................................

2Введение ...................................................................................................................................... 5ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ....................................................................................... 101.1 Митоксантрон ................................................................................................................ 101.1.1 Химические свойства митоксантрона ..................................................................

101.1.2 Механизм действия ................................................................................................ 131.2 Лекарственная форма митоксантрона и особенности ее применения ...................... 141.3 Методы анализа митоксантрона гидрохлорида .......................................................... 161.3.1 Спектрофотометрия в УФ и видимой области спектра ..................................... 171.4 Липосомальные лекарственные формы в настоящее время ......................................

181.4.1 Строение липосом .................................................................................................. 231.4.2 Номенклатура липосом ......................................................................................... 241.4.3 Методы получения липосомальных наночастиц ................................................ 261.4.4 Характеристики липосомальных частиц ............................................................. 361.4.5 Методы активной загрузки ...................................................................................

391.5 Модификации липосом. ................................................................................................ 421.5.1 Пролонгирование циркуляции липосом (ССЛ). ................................................. 421.5.2 Присоединение антител (иммунолипосомы). ..................................................... 431.6 Липосомальные лекарственные формы веществ антрациклинового ряда...............

45ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ ............................................. 492.1 Материалы ...................................................................................................................... 492.2 Оборудование ................................................................................................................. 522.3 Методы............................................................................................................................ 552.3.1 Метод получения больших многослойных липосом .......................................... 552.3.2 Метод получения малых однослойных липосом ................................................

552.3.3 Метод получения липосом с инкапсулированным митоксантроном. .............. 562.3.4 Метод получения иммунолипосомальной конструкции митоксантрона ......... 562.3.5 Измерение диаметра везикул ................................................................................

572.3.6 Получение чистой фракции дисперсии с митоксантроном методом гель–фильтрации .................................................................................................................................. 572.3.7 Метод стерилизующей фильтрации везикул с митоксантроном ...................... 582.3.8 Количественное определение инкапсулированного митоксантрона ................ 5832.3.9 Определение белка, связанного с поверхностью липосом с использованиеммедного комплекса бицинхониновой кислоты ........................................................................ 602.3.10 Расчет количества молекул на одну липосому.

................................................ 612.3.11 Метод измерения ζ (дзета) – потенциала липосомальной дисперсии ............ 622.3.12конструкцииМетодоценкимитоксантронаспецифическогоссвязыванияклетками–мишенямииммунолипосомальнойметодомнепрямойреакцииповерхностной иммунофлуоресценции (РИФ) ........................................................................ 632.3.13 Проточно–цитофлуориметрический анализ ......................................................

632.3.14Оценкацитотоксическойактивностилипосомальнойформыииммунолипосомальной конструкции митоксантрона МТТ–тестом in vitro ......................... 64ГЛАВА 3.митоксантронаРазработка состава и технологии получения липосомальной формы663.1 Технология получения липосомальных дисперсий митоксантрона ......................... 663.1.1 Выбор липидных композиций .............................................................................. 673.1.2 Получение больших многослойных липосом (МЛВ) .........................................

693.1.3 Получение малых однослойных липосом (МОЛ) ............................................... 723.1.4 Загрузка препарата ................................................................................................. 763.2 Количественное определение митоксантрона включенного в липосомы. ............... 813.3 Получение иммунолипосомальной конструкции митоксантрона ............................ 833.3.1 Очистка иммунолипосомального митоксантрона .............................................. 853.4Спектрофотометрическоеопределениесодержаниямитоксантронавиммунолипосомальной конструкции ............................................................................................

873.4.1 Определение влияния антител на спектрофотометрические характеристикииммунолипосомального митоксантрона. ................................................................................. 873.5 Определение количества моноклональных антител, связанных с поверхностьюлипосом............................................................................................................................................. 903.6 Лиофилизация липосомального митоксантрона. ....................................................... 913.6.1 Подбор криопротекторов для липосомальной формы митоксантрона.

........... 933.6.2 Изучение влияния способов замораживания. ..................................................... 953.6.3 Изучение влияния процесса сублимации на размер частиц. ............................. 973.6.4 Влияние продолжительности храненения на характеристики липосомальногомитоксантрона. ............................................................................................................................ 983.7 Заключение ...................................................................................................................

1004ГЛАВА 4.Исследование липосомальной и иммунолипосомальной лекарственнойформы препарата in vitro ................................................................................................................... 1034.1 Исследование цитотоксической активности липосомальной формы митоксантронана клетках мишенях.......................................................................................................................

1034.2 Оценка влияния пустых иммунолипосомальных и липосомальных конструкций нацитотоксичность. ........................................................................................................................... 1054.3 Исследование цитотоксической активности иммунолипосомальной формымитоксантрона на клетках мишенях. ........................................................................................... 1074.4 Заключение ................................................................................................................... 111Выводы .................................................................................................................................... 112СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ....................................................................................................

114СПИСОК ИЛЛЮСТРАЦИОННОГО МАТЕРИАЛА ......................................................... 117Список литературы................................................................................................................. 121ПРИЛОЖЕНИЯ ......................................................................................................................

1355ВведениеАктуальность темы исследованияСогласноданнымвсемирнойорганизацииздравоохранения(ВОЗ)онкологические заболевания являются одной из основных причин заболеваемостии смертности во всем мире. По прогнозам, число случаев заболевания от ракабудет продолжать расти от 14 миллионов в 2012 году до 22 миллионов вследующие десятилетия [133]. В свою очередь, одним из основных методовлеченияонкологическихзаболеванийявляетсяцитостатическаяицитотоксическая химеотерапия, связанная с сильным токсическим воздействиемна различные системы организма пациента и ограниченная дозолимитирующимипобочными эффектами. Необходимость увеличения терапевтического эффектаприменяемых препаратов и снижения побочных эффектов привела к развитиюразличных подходов к применению цитотоксических и цитостатическихлекарственных веществ и достижения избирательности их действия.

Одним изактивно развивающихся направлений стало совершенствование лекарственныхформ с целью обеспечения направленного транспорта биологически активныхвеществ. В результате, было создано множество различных типов наноносителей,одним из которых стали липосомальные и иммунолипосомальные конструкции. Внастоящее время известно, что инкапсулирование цитостатиков в липосомыуменьшает его общетоксическое действие и увеличивает его биодоступность засчет особенностей кровоснабжения опухоли. [4,12,10,33,220,246-247] Пассивнаядоставка противоопухолевых препаратов за счет липосомальных конструкцийреализована в лекарственных препаратах, одобренных для медицинскогоприменения, таких как (Doxil, Myocet, Lipo-dox, DaunoXome) [43,48,49,102,113,116,157,233].Совершенствование механизмов направленного транспорта привело кмодификациилипосомальныхлекарственныхформсиспользованиемиммунохимических векторов и созданию иммунолипосомальных конструкций.Иммунолипосомы – липосомальные конструкции, имеющие на своей поверхности6векторные лиганды, в качестве которых могут выступать факторы роста, пептидыимоноклональныеантитела(МКА).Внастоящеевремяизучениеиммунолипосомальных конструкций является одним из наиболее перспективныхнаправлений развития технологии направленной доставки препаратов.HER-2 положительный рак молочной железы – одно из наиболеераспространенных новообразований и вторая по распространенности причинасмерти у женщин с раком молочной железы [93].

Характеристики

Тип файла PDF

PDF-формат наиболее широко используется для просмотра любого типа файлов на любом устройстве. В него можно сохранить документ, таблицы, презентацию, текст, чертежи, вычисления, графики и всё остальное, что можно показать на экране любого устройства. Именно его лучше всего использовать для печати.

Например, если Вам нужно распечатать чертёж из автокада, Вы сохраните чертёж на флешку, но будет ли автокад в пункте печати? А если будет, то нужная версия с нужными библиотеками? Именно для этого и нужен формат PDF - в нём точно будет показано верно вне зависимости от того, в какой программе создали PDF-файл и есть ли нужная программа для его просмотра.

Список файлов диссертации