Диссертация (1141379), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Использовали барабан, имеющий 12 лопастей, скоростьвращения барабана составляла 20 об/мин, время работы прибора – 5 минут.Прочность таблеток на раздавливание проводили на тестере твердоститаблеток TBH 125 фирмы Erweka GmbH, Германия («Прочность таблеток нараздавливание» ОФС.1.4.2.0011.15).Распадаемость капсул. (ОФС.1.4.1.0005.15 «Капсулы», ОФС.1.4.1.0015.15«Таблетки»).Определениераспадаемостипроводилинаприборетипа«качающаяся корзинка» ZT 220 фирмы Erweka GmbH, Германия. В качествесреды использовали воду очищенную в объеме 800 мл.
Температура среды37±2°С.Растворение. (ОФС 1.4.2.0014.15 «Растворение для твердых дозированныхлекарственных форм»)Высвобождение действующих веществ из разработанных таблеток и капсулпроводили на приборе DT600 фирмы Erweka GmbH, Германия. В качестве средырастворения капсул СЭИЛ использовали 0,1Н раствор хлористоводороднойкислоты, а для матричных таблеток СЭИЛ - фосфатный буферный раствор с рН427,5, объем среды 800 мл, скорость вращения корзинки 100 об/мин, температура37±0,5. Время проведения теста «Растворение» для капсул составляло 45 минут,для таблеток 8ч.Процент высвобождения фенольных соединений оценивали методомпрямой спектрофотометрии в ультрафиолетовой области спектра при длиневолны 280 нм (см.
Спектрофотометрия в ультрафиолетовой области спектра.)Количество высвободившихся из таблеток и капсул действующих веществ вотобранных пробах определяли по формуле:=∙ 100%где Q – количество высвободившихся действующих веществ через интервалывремени, %; C – концентрация действующих веществ в среде растворения,найденная по калибровочному графику, г/мл; Сmax – максимально возможнаяконцентрация действующих веществ в среде растворения, найденная покалибровочному графику, г/мл.2.2.2 Аналитические методы исследования.Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой области спектра.Для количественной оценки высвобождения действующих веществ изкапсул и таблеток использовали метод спектрофотометрии в ультрафиолетовой(УФ) и видимой области спектра.
Концентрацию растворов проб определяли покалибровочным графикам, построенным из серии разведений. В качестверастворителей использовали фосфатный буферный раствор pH 7,5. Оптическуюплотность определяли при длине волны 280 нм [41].Определение производилось на спектрофотометрах Analytik Jena «Specord250»Определение суммы дубильных веществ СЭИЛ.Определение содержания суммы дубильных веществ проводили методамиобратной перманганатометрии (метод 1) и потенциометрическим титрованием(метод 2 ).43Подготовка пробы.
Около 2 г (точная навеска) образца помещали вконическую колбу объемом 500 мл, заливали 250 мл кипящей водой очищенной изатем нагревали с обратным холодильником в течение 30 мин при периодическомпомешивании. 100 мл охлажденной жидкости процеживали в коническую колбувместимостью 250 мл.Метод 1. Обратная перманганатометрия. [31]Отбирали пипеткой 25 мл полученного извлечения, переносили вконическую колбу объемом 750 мл, добавляли 500 мл воды очищенной, 25 млраствора индигосульфата и при постоянном перемешивании титровали растворомперманганатакалия(0,02моль/л)дозолотисто-желтогоокрашивания.Параллельно проводят контрольный опыт.1 мл раствора перманганата калия (0,02 моль/л) соответствует 0,004157 гдубильных веществ (в пересчете на танин).Метод 2. Потенциометрическое титрование [12] проводили на прибореИономер универсальный ЭВ – 74.
В качестве электрода сравнения использовали –хлорсеребряный, индикаторного электрода – платиновый.Отбирали 2,5 мл полученного извлечения, помещали в стакан, добавляли 50мл воды и титровали перманганатом калия (0,002 моль/л).1 мл раствора перманганата калия (0,002 моль/л) соответствует 0,0004157 гдубильных веществ (в пересчете на танин).Идентификация фенольных соединений методом тонкослойной хроматографии(ТСХ) [63]К точной навеске (около 0,5 г.) экстракта добавляют 5 мл метанола,перемешивают в течение 15 минут и фильтруют.
В качестве раствора сравненияиспользуют смесь 10 мкл цитраля и 10 мг резорцина в 10 мл метанола (растворготовят непосредственно перед использованием). В качестве неподвижной фазыиспользуют пластины «Silufol». На линию старта пластин наносят по 10 мклисследуемого раствора и раствора сравнения в виде полос и хроматографируютвосходящим способом в ненасыщенной камере в системе растворителей гексан –эфир (40:60). Длина пробега фронта растворителей 13 см. Пластину высушивают44на воздухе и опрыскивают 1% раствором ванилина в концентрированной сернойкислоте.Определение суммы фенольных соединений в пересчете на 6-гингеролметодом обратной броматометрии.Около 0,1000 г сухого экстракта (точная навеска) помещают в коническуюколбу объемом 50 мл, прибавляют 10 мл метанола, тщательно перемешивают,фильтруют.
Колбу и фильтр промывают 10 мл метанола. Фильтрат и промывныеводы объединяют в коническую колбу объемом 150 мл. К полученному растворуприбавляют 20 мл 0,1н раствора калия бромата, 5 мл 10 % раствора калиябромида, 5 мл 50% раствора кислоты серной, перемешивают, накрывают часовымстеклом и оставляют на 15 минут. Затем к смеси прибавляют 10 мл 10% растворакалия йодида, смесь сильно взбалтывают, накрывают часовым стеклом иоставляют на 10 минут в темном месте.
После этого прибавляют 4-5 млхлороформа и титруют выделившийся йод 0,1н раствором натрия тиосульфата дообесцвечивания хлороформного слоя. [31]Определениеколичествагингероловишогаоловметодомвысокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [26].Определение содержания гингеролов и шогаолов проводили методомобращено-фазовой ВЭЖХ в режиме градиентного элюированияс УФ-спектрофотометрическим (длина волны 282 нм) и масс-спектрометрическимдетектированием.
Исследование проводили на системе ВЭЖХ Agilent 1100(Agilent Technologies, США) со спектрофотометрическим диодноматричнымдетектором Agilent 1100 Series Diode Array, времяпролетным масс-селективнымдетектором Agilent 6200 TOF LC/MS с ионизацией электрораспылением .Колонкаоктадецилсиликагель 5 мкм, 250×4,6 (ProteCol C18 HPH125), градиентноеэлюирование в системе 0,1% водный раствор муравьиной кислоты (А) ацетонитрил (В) (0 - 10 мин., 40% В; 10 – 40 мин., 40 - 90% В; 40 – 41 мин., 90 40% В; 41 – 50 мин., 40% В), температура колонки - 25 °С; скорость подвижнойфазы - 0,5 мл/мин. Объем вводимой пробы - 10 мкл.
Аналитическая длина волны–282 нм. Сканирование масс проводили в режиме регистрации положительных45ионов в диапазоне m/z 200–1000. Рабочие параметры источника ионизации:напряжение на капилляре - 3500 В, поток газа-осушителя (азот) – 5 л/мин,температура - 325°С, давление на распылителе – 0,34 МПа.2.2.3. Статистические методы анализаСтатистическую обработку данных проводили в программе MS Office Excel2013. Данные на рисунках представлены в виде средних значений и стандартныхотклонений по трем измерениям, если не оговорено другое количество измерений.Для оценки различий средних использовали критерии на основе t- статистикиСтьюдента.Выводы к Главе 2.1.В работе использованы материалы, соответствующие требованиямдействующих в настоящее время нормативных документов.2.В работе применялись современные физические методы исследования(спектрофотометрия,хроматография),тонкослойнаяопределеныивысокоэффективнаятехнологическиехарактеристикижидкостнаяСЭИЛигранулятов.
Проведена всесторонняя оценка полупродуктов и готовых ЛФ всоответствииссовременнымитребованияминормативныхдокументов.Разработаны методики качественного и количественного анализа твердыхлекарственных форм СЭИЛ. Проведена статистическая обработка полученныхэкспериментальных данных, что свидетельствует о воспроизводимости идостоверности результатов исследований.46ГЛАВА 3. ИЗУЧЕНИЕ ХИМИЧЕСКОГО СОСТАВА, ФИЗИКОХИМИЧЕСКИХ И ТЕХНОЛОГИЧЕСКИХ ХАРАКТЕРИСТИК СУХОГОЭКСТРАКТА ИМБИРЯ3.1. Изучение химического состава сухого экстракта имбиряОбъектисследования-сухойэкстрактимбирялекарственногопроизводства компании Naturex S.A (Франция).
Поскольку в спецификации насубстанцию не имеется данных о присутствии других биологически активныхвеществ, кроме гингеролов, целесообразно изучение химического составасубстанции.НаоснованиианализахимическогосоставаСЭИЛспомощьюкачественных реакций не были идентифицированы флавоноиды, аскорбиноваякислота, аминокислоты.Цианидиновая проба (проба Шинода). Проба основана на восстановленииводородом карбонила пиронового кольца и образовании антоцианидинов,окрашивающихся в кислой среде от оранжевого до малиново-красного цвета.Реакцию дают только флавоноиды, имеющие двойную связь в положении С2-С3 икетогруппу в кольце В.
Халконы, изофлавоны и ауроны этой реакции не дают.Если присутствуют халконы, антоцианы и ауроны, то красное окрашиваниенаблюдается при прибавлении одной соляной кислоты, поэтому неоходимопроводить контрольный опыт. [6, 68] В испытуемом растворе окрашивания ненаблюдалось. Вероятно, в сухом экстракте имбиря отсутствуют флавоноиды.Дляидентификацииаскорбиновойкислотыбылаиспользованареакция с 2,6-дихлорфенолиндофенолом. При добавлении к раствору по каплям2,6-дихлорфенолиндофенола синяя окраска последнего исчезает, что говорит оботсутствии аскорбиновой кислоты в сухом экстракте имбиря.Для обнаружения аминокислот была проведена нингидриновая проба.Появления окрашивания не наблюдалось, следовательно, аминокислоты в СЭИЛотсутствуют.Качественные реакции на дубильные вещества и на фенольные соединения(комплексообразования с железа (III) хлоридом, конденсации с реактивом Марки47и нитрозирования) дали положительные результаты, вероятно в эти реакциивступают гингеролы и шогаолы [9, 42].Определение суммы дубильных веществ проводили двумя методами:методом обратной перманганатометрии по методике описанной в ГФ XI иметодомпотенциометрическоготитрованияпометодикеГринькоЕ.Н.«Исследования по стандартизации ЛРС, содержащего дубильные вещества».Содержание дубильных веществ в сухом экстракте составляет первым методомсоставило 15,24 ±1,2%,, а вторым методом – 13,88 ±1,6%.Реакция комплексообразования с 10% раствором ацетата свинца.Реактивом обнаруживается большинство фенольных соединений.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
