Диссертация (1141351), страница 11
Текст из файла (страница 11)
Такие закономерности необходимо учитывать привыборе программ скрининговых обследований/исследований.Уровни пороговых значений могут значительно отличатся в зависимости отанализируемых веществ и времени их выведения (окно детектирования). Следуетвыбирать такой пороговый уровень, который бы однозначно говорил о нахождениичеловека в состоянии опьянения.В настоящее время лаборатории работают по различным методикам и имеютотличное друг от друга аналитическое оборудование, а, следовательно,чувствительность и предел обнаружения. Поэтому при установлении уровнейпороговых значений необходимо скорректировать их расчётную теоретическуювеличину с учётом различных практических факторов: наличие и видлабораторного оборудования, фоновая обстановка, контингент обследуемых и ряддругих факторов, оказывающих влияние на уменьшение или увеличение значений61уровней пороговых значений.
Надлежаще построенная математическая модель наоснове статистически репрезентативной выборки и подобранные на её основеуровни пороговых значений, позволяют минимизировать количество ошибокпервого и второго рода (числа ложноположительных и ложноотрицательныхрезультатов) и достичь максимальной информативности, чувствительности,селективностиипрогностичностиметодаисследованиядлявыбраннойбиологической матрицы.Статистические инструменты для использования в установлении уровнейпороговых значений для диагностических методов хорошо изучены.В настоящее время для статистической обработки данных и установления, втом числе, уровней пороговых значений, часто используют информативный методанализа ROC-кривых – операционных кривых наблюдателя (Receiver OperationCharacteristiccurves).ROC-анализпредставляетсобойисследовательскийинструмент, позволяющий анализировать взаимоотношения чувствительности испецифичности метода исследования в бинарной классификации [15].ROC-кривые представляют собой график, отображающий в прямоугольнойсистеме координат взаимоотношение истинно положительных (чувствительность,ось ординат) решений и ложноположительных (1–специфичность, ось абсцисс)решений, получаемых наблюдателем при оценке результатов исследования [11,15].2.5 Площадь под ROC-кривой.
AUC – показатель качества моделиВизуальное сравнение ROC-кривых не всегда позволяет выявить наиболееэффективную модель. Своеобразным методом сравнения ROC-кривых являетсяоценка площади под кривыми. Эта оценка может быть получена непосредственновычислением площади под многогранником, ограниченным справа и снизу осямикоординат и слева вверху – экспериментально полученными точками. Численныйпоказатель площади под кривой называется AUC (Area Under Curve).Показатель AUC является точным цифровым критерием информативностиметода диагностики (табл.7).
В литературе иногда приводится следующаяэкспертная шкала для значений AUC, по которой можно судить о качестве модели.62Таблица 7 – Критерии качества моделиИнтервал АUCКачество модели0.9–1.0Отличное0.8–0.9Очень хорошее0.7–0.8Хорошее0.6–0.7Среднее0.5–0.6НеудовлетворительноеС большими допущениями можно считать, что чем больше показатель AUC,тем лучшей прогностической силой обладает модель. Однако следует знать, чтоAUC не содержит никакой информации о чувствительности и специфичностимодели.63ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ 21. Описаны материалы, оборудование и аналитический комплекс –анализатор200609IKиэкспериментальныереагентыдляиммунохроматографического анализа на синтетические катиноны в моче,используемые в работе.2.
Выбраны операционные характеристики диагностических тестов и методROC-анализа, с помощью которых можно рассчитать необходимый уровеньпорогового значения.3. Теоретическитоксикологическиобоснованызначимыхоптимальныесинтетическихусловияпроизводныхизолированиякатинона иихметаболитов с применением программного обеспечения ACD/Labs и платформыACD/Рercepta.4. Оптимизирована методика пробоподготовки мочи и подобраны условияанализа исследуемых веществ методом ГХ-МС.64ГЛАВА 3 РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ3.1 Оценка иммунохроматографических реагентов для обнаружениясинтетических катинонов, применяя ROC-анализОтбор и доставку клинических образцов мочи производили в соответствии сПриказом Минздравсоцразвития РФ от 27.01.2006 № 40 «Об организациипроведенияхимико-токсикологическихисследованийприаналитическойдиагностике наличия в организме человека алкоголя, наркотических средств,психотропных и других токсических веществ» [3].Тестирование образцов мочи проводили при следующих параметрах:- температура окружающей среды (t°) от 20 до 25°С;- относительная влажность воздуха – до 65%;- атмосферное давление – от 750 до 770 мм рт.
ст. (87–107 кПа).ИХА отобранных образцов мочи осуществлялся при использованиианализатора для химико-токсикологических исследований IK 200609 и комплектареагентов.Экспериментальнаяоценкаиммунохроматографическихреагентовваппаратно-программном исполнении была осуществлена в соответствии с ГОСТ Р51352–2013 «Медицинские изделия для диагностики ин витро. Методыиспытаний» (п. 5.4.7). Проведение исследования на анализаторе осуществлялосьсогласно инструкции производителя.500 мкл мочи добавляли в пробирку типа «Эппендорф» номинальнойемкостью 2 мл (для выполнения 1-го исследования требуется 60–100 мкл мочи).Реагенты извлекались из тубы и погружались терминальным концом висследуемые образцы (рис.
19). При этом учитывалось основное правило работы симмунохимическими реагентами: реагент не должен быть погружен в жидкостьвыше уровня контрольной линии.Время реакции (согласно инструкции) – не менее 12 минут. После инкубациикаждый диагностический реагент вкладывали в выдвижной лоток и плотнозажимали встроенным фиксатором, после закрытия лотка прибор автоматически65начинал сканирование, время сканирования – 12 секунд.В обычных условиях для начала работы тубу с реагентами необходимовставить в подставку, расположенную на левой стороне анализатора.
На дисплееотображается информация: перечень веществ, определяемых реагентом и ихколичество в тубе. Анализ инициируется нажатием оператором центральнойкнопки на панели управления анализатора. После считывания магнитного чипаприбор каждый раз запрашивает реагент. Результаты анализа (суммарнаяконцентрация обнаруживаемых соединений, нг/мл) выводятся на дисплейанализатора и могут быть напечатаны на принтере.Рисунок 19 – Инкубация реагентов во время калибровкиКак исключение, только в рамках данных исследований, запуск анализатораосуществлялся благодаря доступу к специальной программе.
Результатысчитыванияанализаторавыводилисьнаэкранмонитораперсональногокомпьютера, в том числе интенсивность сигнала, измеряемая в милливольтах. Вобычных условиях доступ к такой программе работы с анализатором невозможени для оператора в этом нет необходимости.3.1.1 Калибровка IK 200609Анализатор для химико-токсикологических исследований IK 200609поставляется с заводской калибровкой от производителя по соединению MDPV,записанной на микрочипе. Микрочип закреплен на тубе, содержащей внутриреагенты для обнаружения катинонов.
Для проведения научного исследования66прибор был перекалиброван по образцам с заведомо известной концентрациейMDPV, представленными производителем, на всем диапазоне измерений (20, 60,120, 300, 500, 800, 1000 нг/мл). Результаты калибровки приводятся в таблице 8 и нарисунке 20.Таблица 8 – Результаты калибровкиBlank иск. мочаРезультатизмерения,нг/мл2,2Blank иск.
мочаnegative877,78,1681,0Концентрация, нг/мл206012030050080010006,5Среднеезначение,нг/млРезультатизмерения, мВ773,48,06704,49,6659,515,5588,024,629,7501,249,0355,180,8253,342,260,1387,157,5321,1195,2117,7196,5188,1116,9172,8132,5387,355,7356,1352,461,6313,971,2652,027,5499,9585,340,2604,130,9932,214,8669,9652,0Среднеезначение751,426,427,5825,6681,6481,4320,5122,462,832,922,967Как следует из результатов измерений, наблюдается линейная зависимость,выражаемая уравнением: = 0.848 + 0.539, где (10)Cm – средние результаты измерений с заводской калибровкой;Ct – истинные значения тестового раствора.Рисунок 20 – Калибровочная кривая для MDPV (по результатам тестирования). Cm –средние результаты измерений с заводской калибровкой, Ct – истинные значениятестового раствора.
Красная линия – линейная регрессияВажно отметить видимую из рисунка 20 логарифмическую зависимость отконцентрации. Однако данная зависимость свидетельствует о значительнойкоррекции измеряемых результатов. Как следствие, прибор был перекалиброван наэтапе компьютерной обработки считываемого сигнала милливольтах.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
