Диссертация (1141319), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Результаты исследования линейности.№массараствора,гмассарастворастандарта,гмассаводы, гплощадьпикаионаплощадьпикалитиявремямиграциииона, минвремямиграциилития,минрасчитаннаяконцентрация,мг/лрасчитаннаяконцентрациялития, мг/лскорректированноесоотношениеплощади пика ковремени миграции81,2386,5093,1799,76106,12112,75119,4910,1710,1210,1610,2110,1010,1610,1738,5940,9043,9547,6351,1353,9357,53Результаты для ионов магния12345671,63251,73511,8672,0012,1422,26142,40090,20060,19940,19990,2010,20010,20,20068,21128,09027,94817,82317,74597,5637,4405684,4718,8766,6805,9864,4886,3960,5211,5208,6207,6202,3199,9195,0198,95,1995,1645,1455,1275,1165,0415,1016,0986,0536,0276,0065,9925,8905,97576Сx, мг/л125120115110105100959085809,5График линейности для ионовкалияy = 9,1096x - 5,2409R² = 0,995710,511,512,513,514,5скорректированное Sx/txРисунок 16.
Калибровочный график для катионов калия. Полученноеуравнение прямой: y=9,1096x-5,2409, коэффициент достоверностиаппроксимации 0,996.Сx, мг/лГрафик линейности для ионовкальция130y = 4,407x - 1,974R² = 0,99731201101009080182022242628скорректированное Sx/txРисунок 17. Калибровочный график для катионов кальция. Полученноеуравнение прямой: y=4,407x-1,974, коэффициент достоверностиаппроксимации 0,997.77Сx, мг/л1251201151101051009590858020График линейности для ионовнатрияy = 4,0193x - 2,1205R² = 0,9972222426283032скорректированное Sx/txРисунок 18. Калибровочный график для катионов натрия.
Полученноеуравнение прямой: y=4,0193x-2,1205, коэффициент достоверностиаппроксимации 0,997.Сx, мг/л1201151101051009590858035График линейности для ионовмагнияy = 2,0016x + 4,4381R² = 0,99884045505560скорректированное Sx/txРисунок 19. Калибровочный график для катионов магния. Полученноеуравнение прямой: y=2,0016x+4,4381, коэффициент достоверностиаппроксимации 0,999.78Оценка сходимости.Сходимость оценивалась по шести приготовленным пробам сконцентрацией исследуемых катионов около 100 мг/л, экспериментповторялся в другой день с теми же реактивами и оборудованием.Результаты исследования сходимости представлены в таблице 15.Таблица 15. Исследование сходимости методики.ПоказательИстинное значение концентрации, мг/лПервая серияОбнаруженная концентрация, мг/лОтклик, %Количество экспериментов (m)Число степеней свободы (f)Среднее (xҧ)Дисперсия (s2)Стандартное отклонение (s)Стандартное отклонение среднегорезультата (sср.)Коэффициент вариации (sср, %)Уровень значимости (α)Табличное значение критерияСтьюдента (t(α,f))Доверительный интервал (∆x)Доверительный интервал среднего (∆xҧ)КалийИонКальцийМагнийНатрий96,1296,3595,6696,7495,4195,6796,3395,4095,8995,7097,8996,83100,2299,01100,2498,92102,61101,2265100,37100,04100,2999,56100,6999,3099,5798,0798,4197,0198,4398,2699,1198,0298,1297,4497,7698,9599,546598,30102,01102,25101,52102,66101,25101,52101,70102,88101,26101,23102,19102,1899,70100,6299,7498,60100,93100,6565100,0496,1296,3595,6696,7495,4195,6798,3196,7395,8795,8496,0196,47102,28100,39100,2299,07100,63100,8465100,571,9401,3930,6180,7860,7510,8671,0781,0380,5690,3210,3540,4240,5660,050,3260,050,3540,050,4210,052,573,581,462,572,020,822,572,230,912,572,671,0979Продолжение таблицы 15.
Исследование сходимости методики.Первая серияПоказательНатрийОтносительная погрешность (ε), %3,572,062,232,65Относительная погрешность среднего(εҧ), %1,460,840,911,0896,3995,8796,2596,7796,9396,3894,8794,5696,2697,9696,8295,9298,4298,63100,01101,2499,8899,526599,621,0541,027100,3399,78100,18100,72100,89100,3199,9099,4899,35102,69101,4799,3999,5799,7099,18101,96100,5799,0865100,011,1911,091102,29101,74102,14102,69102,87102,28101,38101,36102,23105,27104,84101,6799,1199,63100,09102,51101,9299,4165100,442,0171,42096,3995,8796,2596,7796,9396,3895,9999,6098,58102,8599,7298,2099,58103,89102,42106,28102,87101,8965102,824,9352,2210,4190,4210,050,4450,4450,050,5800,5770,050,9070,8820,052,572,641,082,652,572,811,152,802,573,651,493,632,575,712,335,551,081,151,482,27Истинное значение концентрации, мг/лОбнаруженная концентрация, мг/лВторая серияКалийИонКальцийМагнийОтклик, %Количество экспериментов (m)Число степеней свободы (f)Среднее (xҧ)Дисперсия (s2)Стандартное отклонение (s)Стандартное отклонение среднегорезультата (sср.)Коэффициент вариации (sср, %)Уровень значимости (α)Табличное значение критерияСтьюдента (t(α,f))Доверительный интервал (∆x)Доверительный интервал среднего (∆xҧ)Относительная погрешность (ε), %Относительная погрешность среднего(εҧ), %80Сравнение двух серийПродолжение таблицы 15.
Исследование сходимости методики.Коэффициент Фишера, табличноезначение при уровне значимости 0,05Рассчитанное значение коэффициентаФишераЧисло степеней свободы (f)Табличное значение критерияСтьюдентаСредневзвешенная дисперсияДисперсия разности |xҧ1-xҧ2|Стандартное отклонение разности |xҧ1xҧ2|Рассчитанное значение коэффициентаСтьюдента5,055,055,055,050,543101,928102,685104,577102,2281,4972,2280,9042,2281,3842,2283,00617,96110,85016,61236,0774,2383,2944,0766,0060,1780,5180,0990,375По результатам сравнения двух серий можно сделать вывод, чторазличиемеждуниминеявляетсястатистическизначимымпридоверительной вероятности 95%.Оценка правильности.Определение правильности проводилось с использованием модельнойсмеси.Исследовалосьпотриконцентрациивтрехповторах(9приготовленных проб) в пределах предложенного диапазона концентраций.Определение проводилось с использованием препарата, содержащегопиридоксина гидрохлорид и вспомогательные вещества: натрия дисульфит,натрия сахаринат, ароматизатор.
Результаты исследования представлены втаблице 16.81Таблица 16. Исследование правильности методики.ИонПоказательИстинное значение концентрации, мг/лОбнаруженная концентрация, мг/лОтклик, %Среднее (xҧ)Стандартное отклонение (S)Коэффициент вариации (Sср, %)Табличное значение критерия Стьюдентапри уровне значимости 0,05Доверительный интервал (∆x)Доверительный интервал среднего (∆xҧ)Обобщенныерезультатыпредставлены в таблице 17.КалийКальцийМагнийНатрий83,4387,3686,79105,91104,85105,92126,26133,59127,0684,9789,4287,85109,46106,52106,61125,75142,68124,29101,85102,36101,21103,35101,59100,6599,60106,8097,82101,692,500,8279,8483,6083,06101,36100,34101,37120,83127,85121,6079,3081,7281,68100,8298,85100,90118,31132,47114,3599,3297,7598,3399,4798,5199,5397,91103,6294,0498,722,480,8489,9995,7094,43102,48105,58104,67114,50117,43113,9095,0397,7597,32104,82110,84106,41118,13120,66114,95105,61102,14103,05102,28104,98101,66103,17102,75100,92102,951,510,4981,0984,9184,36102,94101,91102,95122,72129,84123,5079,0080,6380,92100,9798,1599,50117,89132,62114,9997,4294,9695,9298,0896,3196,6496,07102,1393,1196,742,480,852,3065,771,922,3065,721,912,3063,481,162,3065,711,90определенияпараметроввалидации82Таблица 17.
Рассчитанные параметры валидации методики.КатионКоэффициент достоверностиЛинейностьаппроксимацииКоэффициент вариации впервой серииСходимостьКоэффициент вариации вовторой серииСтандартное отклонениеКоэффициент вариацииДоверительныйинтервал (PПравильность= 95 %)Доверительный интервалсреднего (P = 95 %)Предел количественного определения, мг/кгМинимальная обнаруживаемая концентрация,мг/кгСпецифичностьK+Ca+2Mg+2Na+Норматив*0,9960,9970,9990,997≥ 0,990,5660,3260,3540,4240,4212,500,820,4452,480,840,5771,510,490,8822,480,855,775,723,485,711,921,911,161,901,962,041,001,04-1,001,000,500,50-≤4%≤4%-Присутствие возможных сопутствующихвеществ не оказывало влияния наэлектрофоретический анализ*норматив ICH для методик ВЭЖХПолученные результаты показали пригодность методики для анализакатионов калия, натрия, магния и кальция в фармацевтических препаратах.83Выводы по главе 3.1.
На основании информационно-аналитического и экспериментальныхисследований установлены оптимальные условия (значение pH буферногораствора, концентрация контрастного вещества и 18-краун-6 эфира)разделения и детектирования катионов калия, кальция, натрия, магния.Предложено и апробировано использование катионов лития в качествевнутреннего станадарта.2. Предложен тест определения пригодности системы для качественногои количественного определения катионов калия, натрия, магния, кальция.3. Определеныпараметрывалидации(специфичность,линейность,сходимость, правильность) для методик анализа растворов для инфузий идругих лекарственных средств, содержащих катионы калия, натрия, магния,кальция.84ГЛАВА 4.
ОПРЕДЕЛЕНИЕ КАТИОНОВ В ЛЕКАРСТВЕННЫХПРЕПАРАТАХ.4.1 Исследование растворов для инфузий.Растворыдляинфузийявляютсяширокораспространеннымилекарственными средствами для детоксицирующей, плазмозамещающей ивосстановительнойтерапии.Особенностьюданныхлекарственныхпрепаратов является введение их значительных объемов парентеральнымспособом, что обуславливает необходимость тщательного контроля ихбезопасности и качества, в том числе определения катионов калия, кальция,натрия и магния, как основных действующих веществ.Особенностью данных препаратов с аналитической точки зренияявляется значительное преобладание концентрации натрия и, соответственно,возможное неполное разделение на электрофореграмме зон с даннымкатионом и других при недостаточно оптимизированных условиях.При исследованиях применялась следующая методика подготовкипроб: точную навеску образца (около 5 г) помещали в мерную колбувместимостью 50 мл, прибавляли около 1 г (с точностью до 0,01 г) растворалития ацетата с содержанием ионов лития 0,05 %, затем доводили объемраствора водой до метки, перемешивали.
При необходимости отбиралиаликвоту и центрифугировали при 20000 g, около 700 мкл переносили ввиалу на 2 мл для последующего проведения КЗЭ.Разработанная методика была апробирована на 19 образцах растворовдля инфузий. Результаты представлены в таблице 22. Примеры полученныхэлектрофореграмм представлены на рисунках 20 - 37. Поскольку для всехпрепаратовхарактерносравнительноодинаковоеколичественноесоотношение компонентов, а именно значительное преобладание содержанияионов натрия по сранению с другими катионами, для построениякалиброчного графика использовалась стандартная смесь катионов с85концентрацией, сходной с концентрациями в исследуемых объектах.
Такженеобходимо отметить, что хотя получаемый сигнал для катионов кальция имагния в препаратах "Мафусол", "Квинтасоль" и "Рингер" был сравнительнослабым, при данном разбавлении сохранялась линейность в необходимомдиапазоне. Повышение концентрации за счет разбавления приводило кнарушению линейности отклика для катионов натрия.Рисунок 20.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
