Диссертация (1141267), страница 14
Текст из файла (страница 14)
Время насыщения камеры 2 часа.В качестве стандартных веществ использовали инулин (Sigma-12255) ифруктозу.Далееиспользовалиизопропанол- вода (1:4).выбраннойсистемерастворителей86▲▲▲123Рисунок. 27. Схема хроматограммы определения инулина и фруктозы вклубней топинамбура1. Водное извлечение из высушенных клубней топинамбура2. 0,004% раствор инулина3. 0,5% раствор фруктозыСистема растворителей: изопропанол – вода (4:1).Проявитель: 20% спиртовый раствор тимола и кислоты сернойразведенной.2).
Методика. 1 г клубней топинамбура, измельченных до размерачастиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, или 5 гсвежих клубней топинамбура помещали в коническую колбу вместимостью100 мл, прибавляли 80 мл воды и нагревали на кипящей водяной бане втечение 45 мин, затем охлаждали, и фильтровали через фильтровальнуюлабораторную марки "Ф" в мерную колбу вместимостью 100 мл.В коническую колбу прибавляли 10 мл воды, фильтровали в ту жемерную колбу и доводили объем раствора водой до метки и перемешивали.Или 0.1 г сухого экстракта или 0,2 г содержимого капсула, помещали вкруглодонную колбу вместимостью 100 мл,прибавляли 80 мл воды иперемешивали до растворение и доводили водой до метки.На линию старта хроматографической пластинки «Сорбфил- ПТСХ-АФА-УФ» наносили по 20 мкл извлечения из сухого или свежего сырья, или 20мкл раствора сухого экстракта, или 20 мкл извлечения содержимого капсул,или 20 мкл настойки гомеопатической матричной, во вторую точку наносили8720 мкл 0,004% водного раствора инулина и третью точку 20 мкл 0,5%водного раствора фруктозы и хроматаграфировали восходящим способом.В качестве системе растворителей использовали систему изопропанол –вода (4:1).
В качестве детектирующего раствора использовали 20%спиртовый раствор тимола и кислоты серной разведенной.Время насыщения камеры 2 часа, когда фронт растворителей пройдет 12см, пластинку вынимали из камеры, сушат на воздухе до удаления следоврастворителей, опрыскивали 20 % спиртовым раствором тимола, затемсерной кислотой разведенной. На хроматограмме исследуемого растворадолжны обнаруживаться зоны красно – оранжевого цвета с Rf 0,62,соответствующей инулину и Rf 0,68, соответствующей фруктозе, рис.27.3.7.2. Количественное определение полисахариды (фруктозидов ифруктозанов)Методика количественного определения фруктозидов и фруктозанов вклубнях топинамбура разработана с использованием выбранного метода,представленного во второй главе 2.2.5.Для расчета содержания фруктозанов и фруктозидов использовалиудельный показатель поглощения продуктов реакции взаимодействияинулина с резорцином в кислой среде, представленный в работе [142].При снятии спектра поглощения продуктов реакции взаимодействиястандарт инулина (Sigma-12255) и водного извлечения из клубнейтопинамбурасрезорциномвкислойсреденарегистрирующемспектрофотометре Cary 50 установлено, что спектр имеет два максимумапоглощения при длине волн 420 и 483 нм.
Кроме того, показано, чтомаксимумы спектров поглощения инулина и водного извлечения из клубнейтопинамбура совпадают (рис.28).88Рисунок. 28. Спектры поглощения продуктов реакции раствора инулинаи водного извлечения из клубней топинамбура срезорцином в кислой среде1 – 0,004% раствор инулина2 – водного извлечения из клубней топинамбураПриподбореоптимальныхусловийэкстракциифруктозидов ифруктозанов из клубней топинамбура было изучено влияние измельченностисырья, типа экстрагента, соотношение сырья и экстрагента, условиянагревания, время экстрагирования, кратность экстракции.
Полученныерезультаты представлены в табл.11.Из табл.11., следует оптимальными условиями экстракции фруктозанови фруктозидов являются: экстрагент – вода, соотношение сырья иэкстрагента 1:200, измельченность сырья 2 мм, на кипящей водяной бане,время нагревания 60 мин, при использовании режима трехкратнойэкстракции.Таблица 11Зависимость извлечения суммы фруктозанов и фруктозидовиз высушенные клубней топинамбура от условий экстракций (n=5)Наименованиеисследуемых показателей7532Содержание фруктозанов и фруктозидов, %Партия 1Партия 2Партия 3КлубниКлубниКлубниИзмельченность сырья, мм13,51±0,4012,52±0,2512,43±0,2514,10±0,4213,91±0,2715,20±0,3016,10±0,4816,50±0,3319,30±0,2617,55±0,5217,70±0,3523,60±0,478910,595% этанол70% этанол40% этанол25% этанолВода1:501:1001:2001:250Без нагреванияВодяная баня, 40 0СВодяная баня, 60 0СВодяная баня, 80 0СВодяная баня, 100 0С1530456090120Однократная реакцияДвухкратная реакцияТрехкратная реакцияЧетырехкратная реакция17,50±0,5217,70±0,3517,43±0,3417,67±0,36Тип экстрагента3,80±0,112,70±0,089,10±0,278,17±0,2413,61±0,2714,57±0,2917,23±0,3516,92±0,3317,30±0,3417,81±0,35Соотношение сырья и экстрагента15,75±0,3116,88±0,3416,73±0,3317,91±0,3517,49±0,3517,84±0,3616,98±0,3317,79±0,36Температурный режим12,10±0,2411,93±0,2413,480,2714,37±0,2814,78±0,2915,44±0,3017,58±0,3517,53±0,3517,77±0,3617,97±0,36Время экстракции, мин13,83±0,2713,01±0,2716,12±0,3215,11±0,3016,42±0,3316,91±0,3417,17±0,3417,63±0,3517,93±0,3518,07±0,3617,88±0,3618,10±0,3712,70±0,2513,03±0,2616,55±0,3317,57±0,3517,71±0,3518,13±0,3617,73±0,3518,13±0,3623,57±0,4723,33±0,465,10±0,157,53±0,2113,71±0,2816,96±0,3423,49±0,4720,99±0,4123,44±0,4623,61±0,4723,75±0,4711,77±0,2318,31±0,3620,33±0,4022,45±0,4423,53±0,4715,33±0,3018,43±0,3620,15±0,4022,87±0,4623,71±0,4723,69±0,4715,41±0,3020,12±0,4123,43±0,4623,45±0,47Метрологическая характеристика разработанной методики представлена втабл.12.Таблица 12Метрологическая характеристика методики количественного определениясуммы фруктозанов и фруктозидов в клубнях топинамбураfX¯, гSx¯P,%T(p,f)917,720,327952,26¯0,739A %4,17Как показывают результаты табл.12, ошибка единичного определенияпри доверительной вероятности 0,95 не превышала 4,5 %.90Для определения отсутствия систематической ошибки методики былиспользован способ добавок стандарта инулина.
Полученные результатыпредставлены в табл.13.Таблица 13Результаты количественного определения суммы фруктозанов ифруктозидов в клубнях топинамбура с использованием способадобавок инулина (n=5)Найдена суммафруктозанов ифруктозидов,г/100 г сырьяВведеноинулина г/100г сырья17,5517,7223,5813,168,865,90Должна бытьнайдена суммафруктозанов ифруктозидов, г/100 гсырья38,7126,5829,48Найдена суммафруктозанов ифруктозидов,г/100 г сырьяОтносительнаяошибка,%37,7727,0428,88- 2,43+ 1,73- 2,04Из табл.13, видно, что систематическая ошибка отсутствует, т.к.относительная ошибка метода добавок меньше относительной ошибкиединичного определения. С помощью разработанной методики былопроанализировано 3 партий сырья топинамбура.
Результаты представлены втабл.14.Таблица 14Результаты определения содержания фруктозанов и фруктозидов вклубнях топинамбура (n=5)Партия123456НаСодержание фруктозанов и фруктозидов, %17,72±0,3523,58±0,4720,15±0,4013,83±0,3515,85±0,3824,17±0,29основанииполученныхданныхустановленонормативноесодержание суммы фруктозанов и фруктозидов в клубнях топинамбура науровне – не менее 10%.913.8. Разработка нормативной документации на сухое сырье клубнитопинамбураНа сегодняшний день проект фармакопейной статьи (ФС) на сырьеклубней топинамбура отсутствует, что обуславливает необходимостьразработки данный нормативный документ.При разработке настоящего проекта ФС (Топинамбура клубни) дляустановления подлинности и качества включены следующие разделы:Внешние признаки.
Представлен на основании литературных данных исобственных наблюдений. Анализ микроскопии осуществляли по требованиистатьи «Техника микроскопического и микрохимического исследованиялекарственного растительного сырья» ст. ГФ XI, вып. 1.Микроскопия.Вразделемикроскопииизложеныосновныедиагностические признаки в анатомическом строении клубней. Отмечено,что по всей поверхности поперечного среза встречаются секреторные каналыи инулин.Качественные реакции. Приводили цветные реакции с тимолом и сернойкислотой - инулин (полисахариды). При нанесении на поперечный срез 2 – 3капель 20% спиртового раствора α–нафтола или тимола и 1 каплюразведенной серной кислоты должно наблюдаться красно–фиолетовое илиоранжево–красное окрашивание (полисахариды).На ровне с качественной реакцией для осуществления подлинностиинулин и фруктоза (Rf 0,62, и 0,68 соответственно) использовали ТСХ,который обладает более высоким процентом обнаружения, чем качественнаяреакция.
Методики описаны в главе 3.7.1.Количественное определения. Основными действующими веществамиклубней топинамбура являются полисахариды, в первую очередь инулин. Воснове методики количественного определения фруктозанов и фруктозидов вклубне топинамбура, положена методики описаны в глава 2.2.5, результатыпредставлена в главе 3.7.292Влажности сырья определяли по методике ст. ГФ ХΙ, вып. 1.Определение зола общая проводили по методике ОФС 42-0055-07.
Золанерастворимой в 10% растворе хлористоводородной кислоты, ст. ГФ ХΙ вып.2.Определение органические примесей осуществляли в соответствии сметодикой ст. ГФ ХΙ вып.1. Определение минеральные примеси проводили всоответствии с методикойст. ГФ ХΙ. Тяжелые металлы определяли потребования ОФС 42 -0059-07 «Тяжелые металлы. Результаты исследованиепредставление в таблице 15.Таблица 15Результата анализа сухого сырья - клубней топинамбура (n=5)№образца12345Влажность,%Зола общая,%12,31±1,5610,33±1,4512,37±1,5811,98±1,5213,79±1,479,02±0,2623,09±0,4214,28±0,1916,20±0,2412,63±0,38ЗолаОрганическиенерастворим в примеси10% HCL9,16±0,190,42±0,01410,69±0,100,49±0,0176,59±0,210,37±0,0175,31±0,360,33±0,01411,53±0,5530,49±0,015Минеральныепримеси0,83±0,0170,97±0,0170,87±0,0180,73±0,0150,93±0,017На основание полученных данных, установлена норма влажности неменее 15%, общей золы не более 25%, золы нерастворимой в 10% растворехлористоводородной кислоты не более 15%,Тяжелые металлы не менее 0,01%.
Органические примеси не более 0,5%,минеральные примеси не более 1,0%.Показатели и нормы качества для сырья «Сухие клубни топинамбура»представлены в таблице 16.Таблица 16Показатели и нормы качества сырья «Сухой клубни топинамбура»ПоказателькачестваМетоды испытанияРегламентируемый параметрОрганолептическийРазрезанные на кускивысушенные клубни,грушевидной, продольговатоовалной, веретеновиднойформы, окраска высушенныхклубни – желто-белая, светло– коричневаяПри поперечном срезе клубняВнешниепризнакиМикроскопияст. ГФ XI, вып. 193видно что основную массусоставляет сердцевиднаяпаренхима, узки слойкоричневато-бурой пробки,, широкая кора, узкая, едвазаметная, линия камбия.Должно наблюдаться красно–фиолетовое или оранжево–красноеокрашивание(полисахариды)1 зоны адсорбции красно –оранжевого цвета с Rf 0,62,соответствующий инулину и0,68,соответствующийфруктозе.Содержание фруктозанов ифруктозидов, не менее 10,0%.Качественные На поперечный срез 2 – 3 капель 20 %Реакцииспиртового раствора α–нафтола илитимола и 1 каплю разведенной сернойкислотыПодлинность Качественные реакции-методом ТСХ система растворителей: изопропанол –вода(4:1).Проявитель:20%спиртовый раствор тимола и кислотысерной рзведенаной.Количествен- Сумма фруктозанов и фруктозидов вноесвежим сырье в пересчете на инулин.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
