Диссертация (1141267), страница 12

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 12)

Количественное определение аскорбиновой кислоты вклубнях топинамбураСогласно данным литературы в клубнях топинамбура осенью содержится318 мг/% аскорбиновой кислоты, а весной от 42 до 124 мг/% [28]. Однако,следует заметить, что количественное определение аскорбиновой кислоты вклубнях топинамбура проводили методом титрования раствором 2,6 дихлорфенолиндофенолята натрия. Установлено, что применение этого титранта2072проводит к получению недостаточно воспроизводимых и точных результатов,что вызвано неустойчивой окраской в оттитрованном растворе [11,163].Значительно более информативным и точным является методикаколичественногоопределенияаскорбиновойкислотыметодомвысокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [80,104].3.4.1. Определение аскорбиновой кислоты методом ВЭЖХВ качестве стандарта, при определении, использована аскорбиноваякислота фирмы (Sigma A-5960).

Объектами исследования служили клубнитопинамбура заготовленного в Таджикистане. Исследованиями при подбореоптимальных условий экстракции аскорбиновой кислоты из клубнейустановлено, что оптимальный выход аскорбиновой кислоты наблюдается приизмельчении сырья до 2 мм, при использовании экстрагента – 70% этиловогоспирта, при соотношении сырья и экстрагента 1:50, и времени экстракции 1час 30 минут при комнатной температуре. Полученные результаты былииспользованы при составлении методики.Методика. Около 2,0 г (точная навеска) клубней, измельченных доразмера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм,помещали в коническую колбу вместимостью 250 мл, добавляли 60 мл 70%этилового спирта и взбалтывали на вибрационном аппарате в течение 60 мин.Затем фильтровали через бумажный фильтр в мерную колбу вместимостью100 мл, следя за тем, чтобы частицы сырья не попали на фильтр.

В колбу сошротом добавляли 40 мл 70% этилового спирта и проводили извлечение припостоянном встряхивании в течение 30 мин. Извлечение фильтровали черезтот же фильтр в ту же мерную колбу. Шрот и фильтр промывали 10 мл 70%этанола и доводили объем раствора в колбе 70% этанолом до метки(испытуемый раствор А).5 мл испытуемого раствора А фильтровали через микропористыйфильтр с диаметром пор 0,45 мкм, отбрасывали первые 2 мл фильтрата.Фильтрат (испытуемый раствор Б) хроматографировали с помощью73высокоэффективного жидкостного хроматографа не менее 5 повторности приусловиях описанных ниже:По 10 мкл испытуемого раствора Б и раствора РСО аскорбиновойкислоты по отдельности вводили в жидкостной хроматограф высокогодавления, укомплектованного системой градиентной подачи элюэнта, УФдиодноматричным детектором или с переменной длиной волны, а так жекомпьютерной системой сборки и обработки данных.

Получали не менее 5хроматограмм для каждого раствора в следующих условиях:- колонка 250×4,6 мм, сорбент Kromosil 100–5С18 с размером частиц 5 мкм;- температура термостата 380С;- длина волны детектирования 280 нм;- подвижная фаза: ацетонитрил (А) /0,01% раствор фосфорной кислоты (В);- режим элюированияЭтап № Продолжительность этапа, мин012Раствор А%Раствор В %Режим58585951515Изократ.К=1Изократ.10405- скорость элюирования – 1 мл/мин;- время регистрации хроматограммы 5 минут.Содержание аскорбиновой кислоты в процентах (Х) на абсолютно сухоесырье вычисляют по формуле:Х S обр  100  m  1 100  100S cт  a  50  50  100  W S обр  m  400S cn  a  100  W ; гдеSобр.

- среднее значение площадей пика на хроматограмме испытуемогораствора; Sст – среднее значение площадей пика на хроматограмме РСОаскорбиновой кислоты; а – навеска препарата в граммах;m – навеска стандартного образца аскорбиновой кислоты;W – потеря в массе при высушивании сырья в граммах.Примечание. 1.Приготовление подвижной фазы.Используютацетонитрилдляжидкостнойхроматографии. Ацетонитрил используют какраствор А. В мерную колбу вместимостью 1000 мл74отмеривают 500 мл воды очищенной (ФС 42-211996),прибавляют1млфосфорнойкислотыконцентрированной (о.с.ч.), доводят объем раствораводой очищенной до метки и фильтруют черезмикропористыйфильтр,принеобходимостидегазируют вакуумом в течение 1 - 2 мин при 15 мматмосферного давления (раствор В).

Водную фазуиспользуют свежеприготовленной.2. Приготовление раствора стандартного образца(РСО) аскорбиновой кислоты. Около 0,01г (точнаянавеска) аскорбиновой кислоты (Sigma A-5960)помещают в мерную колбу вместимостью 50 мл,прибавляют 20 мл метанола, перемешивают дорастворения. Затем доводят объем раствораметанолом до метки и перемешивают. 1 млполученного раствора помещают в мерную колбувместимостью 50 мл, доводят объем раствораметанолом до метки и перемешивают.3.

Проверка пригодности хроматографическойсистемы. Хроматографируют РСО аскорбиновойкислоты, получая не менее 5 хроматограмм вусловиях описанных выше.Хроматографическая система считается пригодной,если выполняются следующие условия:- эффективность хроматографической колонки потехническому паспорту должна быть не менее 300теоретических тарелок (ГФ ХI, вып. 1, с. 105);- степень разделения пиков, рассчитанная для пиковна хроматограмме РСО аскорбиновой кислотыдолжна быть не менее 0,63 (ГФ ХI, вып.

1, с. 105);относительностандартноеотклонение,рассчитанное для площади пика аскорбиновойкислоты на хроматограмме РСО должно быть неболее 3% (ГФ ХI, вып. 1, с. 199);- коэффициент асимметрии, рассчитанный по пикуаскорбиновой кислоты на хроматограмме РСОдолжен быть не менее 1,0 и не более 1,5;- коэффициент асимметрии пика (Т) рассчитывают поформуле:Т = h0,05 /2 × f, гдеh0,05 – ширина пика на высоте 5% от базовой линии, в мин;f, – расстояние от начала пика на высоте 5% отбазовой линии до перпендикуляра, проведенного изего вершины, в мин.75Хроматограммы аскорбиновой кислоты представленана рис. 24.Хроматограммы и УФ- спектр аскорбиновой кислотыРисунок. 24.

А.- стандартного раствора;В – извлечение из клубней топинамбура; С – УФ – спектрМетодика была апробирована с целью еѐ воспроизводимости иточности. Полученные результаты представлены в табл. 4.Таблица 4Метрологические характеристики методики количественногоопределения аскорбиновой кислотыfX¯, мгSx¯P,%T(p,f)Δх¯926,20,486952,261,098Изтабл.4.видно,чтоошибкаединичногодоверительной вероятности 0,95 не превышаетA %4,19определенияпри4,19%.Отсутствие систематической ошибки доказано проведением опытов сдобавкой аскорбиновой кислоты. Результаты анализа представлены в табл. 5.76Таблица 5Результаты количественного определения аскорбиновой кислоты сиспользованием методов добавок (n=5)№образцаНайденоаскорбиновойкислоты,мг/100г сырьяДобавленоаскорбиновойкислоты, мг12316,019,626,28,014,76,5Должна бытьнайдена суммааскорбиновойкислоты, мг/100гсырья24,034,332,7Найдена суммааскорбиновойкислоты,мг/100г сырьяОтносительнаяошибка,%24,935,131,8+ 3,7+ 2,3- 2,8Результаты табл.5, показывают отсутствие систематической ошибки, т.к.относительная ошибка метода добавок меньше относительной ошибкиединичного определения.С помощью разработанной методики были проанализированы 3 образцаклубней топинамбура.

Полученные результаты представлены в табл.6.Таблица 6Результаты количественного определения аскорбиновой кислоты вклубнях топинамбура (n=5)№ партииПлощадь пикаСодержание аскорбиновой кислоты, мг /%12381313108694109938519,6±0,3926,2±0,52265±5,30Из табл.6, следует, что содержание аскорбиновой кислоты в клубняхтопинамбура от 19,6 до 265 мг/%.3.5. Определение содержания дубильных веществОпределениесодержаниядубильныхвеществпроводилиперманганатометрическим методом в модификации по Левенталю.Около 2 г (точная навеска) измельченного сырья, просеянного сквозьсито с диаметром отверстий 3 мм, помещали в коническую колбувместимостью 500 мл, заливали 250 мл нагретой до кипения воды и кипятилис обратным холодильником на электрической плитке с закрытой спиралью в77течение 30 мин при периодическом перемешивании.

Жидкость охлаждали докомнатной температуры и процеживали около 100 мл в коническую колбувместимостью 200 – 250 мл через вату так, чтобы частицы сырья не попали вколбу. Затем отбирали пипеткой 25 мл полученного извлечения в другуюконическую колбу вместимостью 750 мл, прибавляли 500 мл воды, 25 млраствора индигосульфокислоты и титровали при постоянном перемешиваниираствором перманганата калия (0,02 моль/л) до золотисто – желтогоокрашивания.Параллельно проводили контрольный опыт.1 мл раствора перманганата калия (0,02 моль/л) соответствует 0,00582 гдубильных веществ в пересчете на танин.Содержание дубильных веществ (Х %) в пересчете на абсолютно сухоесырье вычисляли по формуле:Х V V1   0,00582  250  100  100;m  25  100  W V – объем раствора перманганата калия (0,02 моль/л), израсходованныйна титрование, мл;V1 - объем раствора перманганата калия (0,02 моль/л), израсходованныйв контрольном опыте, мл;0,00582 – количество дубильных веществ, соответствующее 1 млраствора перманганата калия (0,02 моль/л) (в пересчете на танин), г;m – масса сырья, г;W – потерья в массе при высушивании сырья, %;250 – общий объем извлечения, мл;25 – объем извлечения, взятого для титрования, мл.Результаты определения дубильных веществ представлены в табл..7.78Таблица 7Результаты количественного определения дубильных веществв клубнях топинамбура (n=5)№ образца1234Содержание дубильных веществ, %0,34±0,0100,81±0,0160,62±0,0120,52±0,010Из табл.7.

видно, что содержание дубильных веществ в клубняхнаходится в пределах от 0,34 до 0,81%.3.6. Подбор условий и разработка методик определения сапонинов вклубнях топинамбураОбщих химических методов определения сапонинов не существует. Всвязи с этим, (см. гл. 1) для обнаружения сапонинов в растительном сырьепользуются реакциями, которые можно разделить на три группы: реакцииоснованные на физических, химических и биологических свойствахсапонинов. Качественный состав и количественное содержание сапонинов вклубнях топинамбура изучено недостаточно. В литературе только указано наприсутствии сапонинов в клубнях топинамбура.Нами для установления присутствия сапонинов и количественногосодержания в клубнях топинамбура использованы химические и физико –химические методы анализа.3.6.1.

Идентификация сапонинов в клубнях топинамбураМетодика. На линию старта хроматографической пластинки «Сорбфил ПТСХ – АФ – А – УФ» размером 7,5 × 15 см микрошприцом наносили впервую точку 20 мкл стандартного раствора эсцина, во вторую точку 10 мклраствора А (см. «Количественное определение»). Пластинку сушат навоздухе 10 мин и хроматографировали восходящим способом в системе79растворителей н – бутанол – ледяная уксусная кислота – вода (5:1:4).

Когдафронт растворителей пройдет 10 см, пластинку вынимали из камеры, сушат всушильном шкафу 3 мин при температуре 1000С, обрабатывали 10%раствором серной кислоты в 40% этиловый спирт и нагревали в сушильномшкафу при температуре 100 0С в течение 5 минут. Схема хроматограммыпредставлены на рис. 28.▲1▲2Рисунок.25. Схема хроматограммы стандартного раствора эсцина иизвлечения из клубней топинамбура представлены1. - 0,015% раствор эсцина в этаноле2.

Характеристики

Список файлов диссертации