Диссертация (1141267), страница 13
Текст из файла (страница 13)
– спиртовое извлечение из клубней топинамбураСистема: н - бутанол – уксусная кислота – вода (50:10:40)Проявитель: 10% раствор кислоты серной в 40% этиловый спиртНа хроматограмме испытуемого раствора должно обнаружиться неменее 4 зон адсорбции с Rs = 1,28; Rs = 1,11; Rs = 0,98; Rs = 1,0 относительнозоны адсорбции эсцина.3.6.2. Разработка методики количественного определениясапонинов в клубнях топинамбураДляколичественногоопределениясапониновнамивыбранспектрофотоколориметрический метод, в основе которого лежит способностьсапонинов давать окрашивание с кислотой серной концентрированной.80При снятии спектров поглощения продуктов реакции стандарта эсцина иизвлечения из клубней топинамбура с кислотой серной концентрированнойна регистрирующем спектрофотометре Cary 50 был установлен, чтомаксимум поглощения находится при длине волны 325 нм.
Максимумыпоглощения представлены на рис.29.21Рисунок.26. Спектры поглощения продуктов реакции сапонинов ссерной кислотой концентрированной1. – 0,015% раствора эсцина в 95% этиловый спирт2. – извлечения из клубней топинамбураНа рис.29, видно, что максимумы раствора эсцина и извлечения изклубней топинамбура совпадают.Для выбора рабочих концентраций был построен калибровочныйграфик, с помощью которого установлено, что калибровочная криваязависимости между оптической плотностью и концентрацией раствораэсцина носит линейный характер в интервале концентраций от 0,00025 до0,004%. Наименьшее определяемое количество эсцина 0,0025 мг/мл.Изучениеустойчивостианализируемогорастворавовремениустановлено, что максимум оптической плотности достигается через 20 мини сохраняется неизменным в течение 20 мин.Удельныйпоказательпоглощенияпродуктовреакцииэсцинасконцентрированной серной кислотой 222,45, нами был взят из литературы81[106].
Для установления оптимальных условий экстракции сапонинов изклубнетопинамбурабылиизучены:степеньизмельченностисырья,экстрагент, соотношение сырья и экстрагента, температура и времяэкстракции.Оптимальными условиями являются: измельченность сырья 2 мм,экстрагент 95% этанол подкисленный кислотой хлористоводородной,соотношение сырья и экстрагента 0,1 г – 50 мл, время экстракции 60 мин накипящей водяной бане, двукратной экстракцией 45 и 15 мин.Все перечисленные выше факторы были использованы при составленииметодики количественного определения сапонинов в клубнях топинамбура.Методика.
Около 0,2 г (точная навеска) измельченного сырья,проходящего сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм, помещали вкруглодонную колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляли 60 мл95%этиловогоспиртаподкисленногоконцентрированнойхлористоводородной кислотой присоединяли к обратному холодильнику инагревали на кипящей водяной бане в течение 45 мин. После чего извлечениеохлаждали под струей холодной воды и фильтровали через бумажныйфильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл так чтобы шрот не попал нафильтр.
Шрот заливали 30 мл 95% этилового спирта подкисленногоконцентрированной хлористоводородной кислотой и нагревали на кипящейводяной бане с обратным холодильником в течение 15 мин. извлечениеохлаждали под струей холодной воды и фильтровали через тот же фильтр вту же мерную колбу. Круглодонную колбу и осадок на фильтре промывали10мл95%этиловогоспиртаподкисленногоконцентрированнойхлористоводородной кислотой и доводили объем раствора тем же этаноломдо метки (раствор А). 2 мл раствора А в выпарительной чашке упаривали накипящей водяной бане досуха, охлаждали. После охлаждения сухой остатокрастворяли в 5 мл воды и полученный раствор наносили в колонкудиаметром 1 см с 5 г алюминия оксида. Выпарительную чашку промывали с5 мл воды и раствор помещали в ту же колонку.82Водный элюат из колонки собирали в выпарительную чашку и послеполного прохождения раствора через колонку элюат выпаривали на кипящейводяной бане досуха.
После охлаждения осадок из выпарительной чашкиколичественнопереносили95%этиловыйспиртвмернуюколбувместимостью 25 мл. Доводили объем раствора в колбе 95% этиловымспиртом до метки и перемешивали (раствор Б).Брали две пробирки с притертыми пробками. В первую пробиркуотмеривали 2 мл 95% этиловый спирт (раствор сравнения) во вторую 2 млраствора Б (испытуемый раствор).
В обе пробирки осторожно по стенкедобавляли по 8 мл кислоты серной концентрированной и тщательноперемешивали. Через 30 мин измеряют оптическую плотность содержимоевторой пробирки с помощью спектрофотометра при длине волны 328 ± 2 нмв кювете с толщиной слоя 10 мм, используя в качестве сравнениясодержимое первой пробирки (раствора сравнения).
Содержание сапонинов врасчете на эсцин и абсолютно сухое сырье (Х) вычисляли по формуле;Х D 100 12 ,5 100D 25000; где222 ,45 a 2 100 W 222 ,45 a 100 W D – оптическая плотность испытуемого раствора;222,45 – удельный показатель поглощения эсцина (Е1%1см) с кислотойсерной концентрированной; W – потеря в массе при высушивании сырья,проценты; а – навеска сырья, в граммах.Примечание. Приготовление 95% этиловый спиртподкисленногокислотойхлористоводороднойконцентрированной. В мерную колбу вместимостью100 мл отмеривают 50 мл 95% этиловый спирт,добавляют 0,5 мл кислоты хлористоводороднойконцентрированной и перемешивают.
Доводят объемраствора в колбу 95% этиловым спиртом до метки иперемешивают.Для установления точности и во производимости методики былипроанализированыобразцыклубнейстатистическая обработка результатов.топинамбураипроведена83Полученные результаты представлены в табл.8. и 9.Таблица 8Метрологические характеристики методики количественногоопределения сапонинов в клубнях топинамбураХ¯, г/100 г22,01f9SX¯0,441P,%95∆X¯0,997T(p,f)2,26A±%4,53С помощью разработанной методики возможно определять сапонины сдостаточнойточностью.Относительнаяошибкаопределенияпридоверительной вероятности 0,95 не превышает ± 5,0%.Для определения систематической ошибки был использован методдобавок эсцина. Результаты представлены в табл.9.Таблица 9Определение суммы сапонинов в клубнях топинамбура сиспользованием метода добавок (n=5)Найдена суммасапонинов г/100г сырьяДобавленоэсцина на 100г сырья22,01±0,4422,07±0,4418,89±0,3721,38±0,425,50±0,115,50±0,1114,17±0,2818,69±0,37Должна бытьнайдена суммаэсцина и сапониновг/100 г сырья27,51±0,5527,57±0,5533,03±0,6640,07±0,80Найдена суммаэсцина исапонинов г/100г сырья27,23±0,5427,95±0,5532,04±0,6440,87±0,81Относительнаяошибка, %- 1,05+ 1,53- 3,00+ 2,00Из табл.13, следует, что систематическая ошибка отсутствует, т.к.относительная ошибка метода добавок меньше относительной ошибкиединичного определения.
С помощью разработанной методики былипроанализированы 5 образцов клубней топинамбура на содержаниесапонинов. Полученные результаты представлены в табл.10.Таблица 10Содержание сапонинов в клубнях топинамбура (n=5)№ образца12345Содержание сапонинов, %10,56±0,4415,07±0,4418,89±0,3723,44±0,4421,38±0,4284Как показывают результаты табл.10.
содержание сапонинов в клубняхтопинамбура колеблется от 10 до 23%.3.7. Определение сумма полисахариды (фруктозанов и фруктозидов)в клубнях топинамбураОсновнымидействующимивеществамивклубняхтопинамбураявляются полисахариды, в первую очередь инулин.Для доказательства наличия в растворе отдельных полисахаридов можетбыть использован метод хроматографии в тонком слое сорбентаОднимизспецифическихметодов определенияфруктозановиалигофруктозанов является метод Мак – Рери и Слаттери, основанный наспособности образования окрашивания в кислой среде со спиртовымраствором резорцина после нагревания на водяной бане.
В условиях опытаальдозы не мешают определению. Оптическую плотность измеряют придлине волны 540 ± 2 нм. В качестве стандарта используют фруктозу [65,72].Шматковым Д.А. [142] при изучении химического состава корнейлопуха большого был усовершенствован вышеуказанный метод. В качествестандарта был использован инулин.
Расчет содержания полисахаридов ведутпо удельному показателю поглощения продуктов реакции взаимодействияраствором инулина со спиртовым раствором резорцина в кислой среде.Данная модификация метода Шматковым Д.А, была взята за основу приразработкеметодикиидентификацииинулинаиколичественногоопределения фруктозидов и фруктозанов в клубнях топинамбура.3.7.1. Качественное определение инулина и фруктозиВ качестве объектов исследования служили клубни топинамбура,культивируемые на территории Таджикистана и заготовленные весной и осенью.Для идентификации основных действующих веществ в лекарственномрастительном сырье предпочтителен метод хроматографии в тонком слое85сорбента. Хроматографирование проводили восходящим способом напластинках «Сорбфил- ПТСХ-АФ-А-УФ».В качестве детектирующего раствора использовали 20% спиртовыйраствор тимола и кислоту серную разведенную.1).
Методика. 1 г клубней топинамбура, измельченных до размерачастиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещали вконическую колбу, прибавляли 80 мл воды и нагревали на кипящей водянойбаневтечение45мин,затемохлаждалиифильтроваличерезфильтровальную лабораторную марки "Ф" в мерную колбу вместимостью100 мл. В коническую колбу прибавляли 10 мл воды, фильтровали в ту жемерную колбу и доводили объем раствора водой до метки, перемешивали.На линию старта хроматографической пластинки «Сорбфил- ПТСХ-АФА-УФ» наносили по 20 мкл полученного водного извлечения, 0,004%водногораствораинулинаи0,5%водногорастворафруктозыихроматаграфировали восходящим способом. Было использовано 6 системрастворителей: при использовании в качестве системы растворителей водыокрашенные зоны адсорбции наблюдались на линии фронта; системарастворителей 95% этиловый спирт дает зону адсорбции красно –оранжевого цвета на линии старта; в системах растворителей: изопропанол –этилацетат (6:1), н – бутанол – уксусная кислота – диэтиловый эфир – вода(9:6:3:1) как 95% этиловый спирт зона адсорбции находится на линии старта:при использовании системы растворителей пропанол – этилацетат – вода(6:1:3) наблюдается отсутствие четких зон адсорбции и только при системерастворителей изопропанол – вода (4:1) извлечения дают зоны адсорбциикрасно – оранжевого цвета с Rf 0,62, соответствующий инулину и Rf 0,68,соответствующий фруктозе (рис.27.).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
