Диссертация (1141267), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Ув. х 200.Рисунок. 13. Клубни топинамбура. Продольный срез.Секреторные каналы в паренхиме сердцевины. Ув. х 125.58Рисунок. 14. Клубни топинамбура. Продольный срез.Секреторные каналы в паренхиме сердцевины. Ув. х 125.Рисунок. 15. Клубни топинамбура. Продольный срез.
Секреторные каналы вксилеме сосудисто-волокнистых пучков. Ув. х 125.В паренхиме коры, в ксилеме сосудисто-волокнистых пучках и впаренхиме сердцевины часто встречаются секреторные каналы (Рис. 10-15) сжелто-бурым содержимым, иногда образующих на месте среза каплювытекшего секрета. На поперечных срезах секреторные каналы представленынебольшими округлыми структурами с желто-бурым содержимым (рис. 11,12). Диаметр секреторных каналов 33-50 мкм.3.2. Фитохимическое исследование клубней топинамбураПрактически до XXI века топинамбур исследовали как кормовое ипищевое растение, о чем свидетельствует большое количество публикаций:59научныхстатей, диссертаций имонографий [28,29,39,43,97,109]. Вмедицинской практике топинамбур был предложен в виде биологическиактивных добавок [14,46].
В последние годы проведены исследования поизучению сырья (трава и клубни) топинамбура и созданию на его основебиологически активных добавок [11,48,60]. Однако Государственныйстандарт качества лекарственного средства (фармакопейные статьи) насырье и лекарственные препараты из топинамбура до настоящего временине созданы. На лекарственное сырье разработана временная документация(ВТУ, ТУ).В данной главе представлены данные по изучению химического составаи количественного содержания аминокислот, углеводов и аскорбиновойкислоты, полисахаридов, дубильных веществ, сапонинов в клубняхтопинамбура прорастающей на территории Таджикистана.3.2.1.
Качественный состав и количественное содержаниеаминокислот в клубнях топинамбураИмеются сведения об аминокислотном составе клубней и травытопинамбурапроизрастающеговСтавропольскомкрае.Однако,качественный состав и количественное содержание аминокислот в том илиином растительном сырье зависит от многих факторов: от природныхусловий произрастания, от качества почв, времени сбора и др.В связи с этим, целью данного исследования было: изучитькачественный состав и количественное содержание аминокислот в клубняхтопинамбура заготовленных в Таджикистане.3.2.2. Определение качественного аминокислотного составаДля установления качественного состава необходимо было извлечьаминокислоты из растительного сырья. Предварительно были установлены60оптимальныеусловияэкстракцииаминокислотизлекарственногорастительного сырья: экстрагент 40% этиловый спирт, соотношение сырье экстрагент 1:100, измельченность сырья 2 мм, температура экстракции кипящая водяная баня, время экстракции 60 мин.Методика.
1 г. клубней топинамбура измельченного до размера частиц,проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм, помещали вкруглодонную колбу, прибавляли 60 мл 40% этилового спирта и нагревали накипящей водяной бане с обратным холодильником в течение 45 мин. Послеохлаждения извлечение фильтровали через ватный тампон в мерную колбувместимостью 100 мл.
Экстракцию повторяли с 40 мл 40% этилового спиртав течение 15 мин, после охлаждения фильтровали в ту же мерную колбу.Объем раствора в колбе доводили 40% этиловым спиртом до метки иперемешивали. Извлечение упаривали под вакуумом до 30 мл (раствор А).Качественныйаминокислотныйсоставклубнейтопинамбураисследовали с помощью качественных реакций, методы ТСХ и методаВЭЖХ.К 1 мл раствора А извлечения из клубней топинамбура прибавляли по 1мл 0,25% спиртового раствора нингидрина и нагревали на кипящей водянойбаневтечение5минут.Появляетсякрасно-синееокрашивание,усиливающиеся при дальнейшем нагревании.
Данная реакция подтверждаетналичие аминокислот в сырье.Для подтверждения полученных данных был применен метод ТСХ,описанный в литературе [16].На линию старта хроматографической пластинки «Сорбфил ПТСХ –АФУФ» размером 15×15 см наносили по 0,005 мл раствора А, извлечение изклубней и по 0,002 мл 0,5% водных растворов аланина, метионина, глицина,глютаминовой кислоты, хроматографировали восходящим способом всистеме растворителей: 95% этиловый спирт, н-бутанол-диэтиловый эфиркислота уксусная-вода (9:6:3:1); н-бутанол- кислота уксусная-вода (4:1:5); нбутанол-кислота уксусная-вода (4:1:2).61При система растворителе 95% этилового спирта зона адсорбцииоставались на линию старта.
Все зона адсорбции при система растворителе нбутанол-диэтиловый эфир- кислота уксусная-вода (9:6:3:1) вытянулись ввиде хвостов.При система растворители н-бутанол- кислота уксусная-вода (4:1:5) всезона адсорбции произошло неполное разделение зона адсорбции. Наилучшееразделение наблюдалось при использовании системы растворителей нбутанол-кислота уксусная-вода (4:1:2).Время насыщения камеры парами растворителя 2 часа.После прохождения фронтом растворителей расстояния равного 12 смпластинку вынимали из камеры, высушивали на воздухе, обрабатывали0,25% спиртовым раствором нингидрина и нагревали в сушильном шкафупри температуре 105 0С в течение 5 мин..
Результаты представлены на рис.3.16.Рисунок. 16. Схема хроматограммы аминокислот1.– извлечение из клубней; 2. – 0,5% раствор глицина,3.– 0,5% раствор аланина; 4. – 0,5% раствор глютаминовой кислоты;Подвижная фаза: н – бутанол - уксусная кислота – вода (4:1:2).Проявитель: 0,25% спиртовый раствор нингидрина.На рис. 16, видно, что извлечение из клубней топинамбура образует рядзон адсорбции.
Rf 0,19 соответствует аланину, зона с Rf 0,25 соответствуеткислоте глютаминовой, зона Rf 0,35 – 0,37 - метионину.62Такимобразом,висследуемыхклубняхтопинамбураметодомтонкослойной хроматографии были обнаружены аминокислоты: аланин,метионин, глицина, глютаминовая кислота и ряд неидентифицированныхаминокислот.Однако идентифицировать все зоны на хроматограммах затруднительноиз-за отсутствия «свидетелей», а кроме того некоторые зоны имеют близкиезначения Rf. В связи с этим, для более детального изучения содержанияаминокислот, дальнейшие исследования проводили с использованиемаминокислотного анализатора.3.2.3. Определение содержание аминокислот в клубнях топинамбурас помощью аминокислотного анализатораОпределение аминокислот проводили по методике, описанной в гл. 2.2.1Результаты качественного и количественного определения аминокислотв клубнях и траве топинамбура представлены на рис.
17. и в табл. 1.Рисунок. 17. Хроматограмма извлечения из клубней топинамбура63Таблица 1Сравнительные результаты определения аминокислотного состава вобразцах клубней топинамбура заготовленных в ТаджикистанеНаименованиеаминокислотпервая серияСодержаниеаминокислот,%ОксипролинАспарагиноваякислотаТреонинСеринГлютаминоваякислотаПролинГлицинАланинЦистинВалинМетионинИзолейцинЛейцинТирозинФенилалонинОксилизинЛизинГистидинАргининСуммавторая серияСодержаниеаминокислот,%Процент отсуммы аминокислот0,0520,439Процент отсуммысвободныхкислот1,0779,0890,0890,8761,45014,2670,8120,2110,6244,3894,36912,9190,2390,2271,1403,8933,97018,5670,6380,2220,2460,0970,2360,0380,1720,3150,0680,2160,0150,3230,1000,6084,83013,2094,5965,0932,0084,8860,7873,6516,5221,4084,4720,3116,6872,07012,5880,4430,2140,2690,0340,2660,0340,1850,3210,0400,2160,0600,3480,1200,8926,1407,2153,4854,3810,5544,3320,5543,0135,2280,6523,5180,9775,6681,95414,528Как следует из эксперимента, в образцах клубней топинамбура (образцы 1и 2) содержится 19 аминокислот.
Причем, и в первом, и во втором образцеобнаружены одни те же аминокислоты, но общее содержание аминокислотразлично, хотя и находится в пределах допустимых отклонений.Выявлено, что содержание аминокислот в клубнях топинамбура находитсяв пределах от 4,83 до 6,14% аминокислот.Из табл.1.также следует, преобладающими аминокислотами во всехобразцах являются: аспарагиновая кислота (9 - 14% от общего содержанияаминокислот), глютаминовая кислота (12 -18% от общего содержанияаминокислот), пролин (7 -13% от общего содержания аминокислот).643.3.
Исследование углеводов в клубнях топинамбураВ последние годы большое внимание уделяется определению углеводовв лекарственном растительном сырье [17,102,103,116].Работы по определению углеводов в топинамбуре немногочисленны иосновном посвящены идентификации углеводов с помощью качественнойреакции, хроматографией на бумаге и хроматографией в тонком слоесорбента [11]. Однако, полной картины содержания углеводов в топинамбуреполучено до настоящего времени не было[40,69].В готовом сырье определяли качественный состав и количественноесодержание углеводов поэтапно: на первом этапе идентифицировали сахара спомощью качественных реакций; на втором этапе определяли сахарапомощью хроматографии в тонком слое сорбента (ТСХ); на третьем этапеустанавливали качественный состав и количественное содержание сахаров спомощью высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ).3.3.1.
Качественное определение углеводов методом ТСХДля определения углеводов использовали раствор А, приготовленныйдля качественного анализа аминокислоты.Для очистки от полифенольных соединений 15 мл раствора Апропускали через колонку диаметром 1 см с 3 г алюминия оксида дляхроматографии II степени активности- получали очищенное водноеизвлечение (раствор Б). Раствор Б получен из клубней топинамбура.Свободные сахара определяли реакцией Бертрана с реактивом Фелинга.К 1 мл раствора Б прибавляли 1 мл жидкости Фелинга (смесь реактива 1 иреактива 2) и нагревали на кипящей водяной бане. В случае наличия визвлечении свободных сахаров выпадал красно - оранжевый осадок меди (I)оксида.
Связанные сахара определяли реакцией с реактивом Фелинга послекислотного гидролиза. К 1 мл раствора Б прибавляли 1 мл кислоты серной65разведенной и нагревали на кипящей водяной бане в течение 5 мин. РастворБ получен из клубней топинамбура. После охлаждения, к гидролизатуприбавляли 1 мл жидкости Фелинга. При нагревании извлечения из клубнейнаблюдали выпадение красно - оранжевого осадка во всех извлечениях,объем осадка извлечения значительно превышал объем осадка до проведениягидролиза.На основании проведенных исследований, выявлено, что свободные исвязанные сахара содержатся в водных извлечениях из клубней топинамбура.Полученные данные подтверждены методом хроматографии в тонкомслое сорбента (ТСХ) на пластинках «Сорбфил ПТСХ – АФ-А-УФ».Время насыщения камеры парами растворителей - 2 часа.На линию старта одной хроматографической пластинки наносили впервую точку 0,001 мл раствора Б полученного из клубней, во вторую точку0,001 мл 5% раствора фруктозы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
