Диссертация (1141267), страница 5
Текст из файла (страница 5)
Состоят из циклических ядер,связанныхдубильныемеждусобойвеществауглероднымипроизводныматомами.главнымКонденсированныеобразомкатехинов26лейкоактицианидов, а также производные флаваны. Встречаются среди нихароматические соединения, значительно реже в их образовании принимаютучастие стильбаны, и возможно, флаванолы. Из ароматических соединенийнаиболее изучен пигмент желтого дерева – манлурин [79,117,133].Для качественной оценки и разделения дубильных веществ используютразделительную хроматографию на бумаге и на колонках.Разделение дубильных веществ осуществляют с помощью реакцииосаждения. При нагревании водных извлечений с раствором формалина икислотой хлористоводородной концентрированной в осадок выпадаютконденсированные дубильные вещества, гидролизируемые остаются врастворе. При добавлении к фильтрату спиртового раствора калия ацетата восадок выпадают гидролизируемые дубильные вещества [133,117].Хроматографию в тонком слое сорбента используют для определениякатехинов в лекарственном растительном сырье.
Система растворителей: н –бутанол – кислота уксусная ледяная – вода (40:12:28). Проявитель: 1%раствор ванилина в кислоте хлористоводородной концентрированной.Данная система была исследована в различных соотношениях: (4:1:2), (4:1:5)[24,30,58].Методом ТСХ оценивали гидролизируемые дубильные вещества,используя системы растворителей: бензол – метанол – кислота уксуснаяледяная (48:8:4), (46:8:15).
Установлено, что танин остается на стартовойлинии, другие соединения распределяются по пластинке. При нагреваниипластинки в сушильном шкафу при 40 0С в течение 15 мин дубильныевеществаобнаруживаютсявизуально.Характернымреагентомдляопределения танина является аммония молибдат [58,79].Для количественного определения дубильных веществ используют рядметодов,такихкак:гравиметрические,титриметрические,фотоколориметрические, нефелометрические. Однако, эти методы являютсятрудоемкими.Крометого,гравиметрические,титриметрические(перманганатометрический) методы дают завышенные результаты [34,50].27Такие методы, как спектрофотометрические, полярографические ихроматографические определения дубильных веществ в растительном сырьеи извлечениях из него больше распространены в настоящее время, т.к.
нетребуют больших затрат времени, более просты в исполнении, являютсяболее точными и эффективными [8, 20,34,50].Для количественного определения дубильных веществ в корнях щавеляконского [34], в коре калины обыкновенной и калины гордовины [50]применялиспектрофотометрическийметод,основанныйнареакциидубильных веществ с железо – тартратным реактивом в присутствии буферас рН 8,2.Этот же метод использован для определения дубильных веществвцветках, листьях и корневищах с корнями первоцвета лекарственного; в коредуба, соплодиях ольхи и в водных извлечениях из данного сырья [18,20].Для определения галловой кислоты и галлотанинов в плодах бархатаамурского использован метод высокоактивной жидкостной хроматографии.Хроматографирование проводили при условиях: колонка 250 ×0,4 мм,сорбент Kromosil 100 – 5 С18, размер частиц 5 мкм, температура термостата380С, длина волны детектирования 280 нм, подвижная фаза: ацетонитрил,0,01% раствор фосфорной кислоты.
Содержание галловой кислоты 59 – 109мг/%, галлотанинов – 118 – 161 мг/% [79].Разработана методика определения катехинов в почках и листьях чернойсмородины с использованием метода ВЭЖХ – МС при условиях анализа: дляразделения на ВЭЖХ – системе Agilent 1100 использовали колонку ProtocolС18 (4,6 × 250 мм, 5 мкм) октадецилсиликагель. Раствор А: 0,1% раствормуравьиной кислоты; раствор В: ацеталетрин.
Скорость подачи подвижнойфазы – 0,5 мл/мин, разделение проводили в режиме градиента 4 – 20% В – 25мин.; 20%В – 30 мин; 20 – 50% В – 50 мин. Масс – спектрометрическоедетектирование проводили на времяпролетном масс – анализаторе Agilent6230 в режиме регистрации положительных ионов, поток газа – осушителя – 9л/мин, диапазон регламентируемых масс – 100 -1000Да.
Установлено, что28количественное содержание катехинов в почках черной смородины (2,34 мг/г)более чем в 2 раза выше, чем содержание катехинов в листьях (0,97мг/г) [103].1.4.4. Методы определения аскорбиновой кислотыМетоды, используемые для количественного определения аскорбиновойкислоты можно подразделить на следующие группы: объемные, физико –химические и биологические.К объемным методам в первую очередь необходимо отнести методикуТильманса – использование 2,6 - дихлорфенолиндофенолята натрия, кактитранта, при определенииаскорбиновой кислоты в извлечениях израстительного сырья [15,18,172].Учитывая,чтовещества,содержащиесульфидрильнуюгруппуглютатиона и цистаина, танина и некоторых других соединений такжевосстанавливают2,6дихлорфенолиндофенолят-натрия,зачастуюнаблюдаются завышенные результаты, что, несомненно, относится к числунедостатковданнойметодики.Кнедостаткамметодаотноситсянеустойчивость реактива Тильманса и окраски, которая появляется воттитрованномрастворе.Крометого,частоаскорбиноваякислотасодержится в виде дигидроаскорбиновой кислоты, которая биологическиактивна, однако реактивом Тильманса не определяется.
[162,171].Для анализа аскорбиновой кислоты предложен йодометрический метод[31,152]. Но этот метод также имеет ряд ограничений: йод в кислой средевосстанавливает кроме аскорбиновой кислоты танин, эфирное масло, пектин,жиры и завышает результаты.Титрометрическийметодопределенияаскорбиновойкислоты,основанной на окислении аскорбиновой кислоты смесью КВrО3 и КВr вприсутствии КJ и с последующим титрованием продукта реакции растворатиосульфата натрия предложен для определения аскорбиновой кислоты втаблетках и растворах для инъекций [171].29Чащедругихиспользуютфотоколориметрические,физикоэкстракционно–химические–методы:фотометрические,спектрофотометрические в сочетании с хроматографией в тонком слоесорбента [151,71,146,173].Для анализа аскорбиновой кислоты известен фотоколориметрическийметод, основанный на реакции окисления – восстановления с 2,6 дихлорфенолиндофенолятом натрия или с желтым фосфоромолибденовымгетерокомплексом [119,143].В последнее время для оценки лекарственного растительного сырья насодержаниеаскорбиновойкислотывсечащеприменяютметодвысокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) [80].
Данныйметод является наиболее информационным в настоящее время.При помощи метода ВЭЖХ кислоту аскорбиновую определяликоличественно в плодах бархата амурского. Исследование проводили приследующих условиях: колонка 250 × 4,6 мм. Сорбент Kromosil 100 – 5 С18,размер частиц 5 мкм, температура термостата 380С, длина волныдетектирования 280 нм, подвижная фаза: ацетонитрил, 0,01% растворфосфорнойкислотыградиентныйрежимэлюирования,скоростьэлюирования 1 мл/мин [80].Аналогичные условия анализа были использованы при определенииаскорбиновой кислоты методом ВЭЖХ листьях, цветках и корневищах скорнями первоцвета лекарственного.
Ошибка единичного определения придоверительной вероятности 0,95 не превышает ± 4,5%. Показано, чтоотсутствует систематическая ошибка, т.к. относительная ошибка методадобавок меньше относительной ошибки единичного определения [19].Сравнительную оценку фотоколориметрического и ВЭЖХ методовопределения кислоты аскорбиновой в плодах шиповника проводили нажидкостном хроматографе с УФ – детектором с переменной длиной волны.Использовали колонку длиной 250 × 4,6 мм, заполненную сорбентом«Силосорб С» с величиной частиц 7,5 мкм.
Подвижная фаза - 0,1 м фосфорно30– молибденовый буфер с рН 3,0. Детектировали при длине волны 254 нм.Скорость потока элюента 1,7 мл/мин [107,120].Количественноеопределениеаскорбиновойкислотыитиаминагидрохлорида в траве звездчатки средней проводили методом ВЭЖХ приследующих условиях: колонка 250 × 4,6 мм, заполненная сорбентом Kromosil100 – 5 С18, размер частиц 5 мкм, температура термостата 380С, длина волныдетектирования 255 нм, подвижная фаза: ацетонитрил, 0,1% растворфосфорнойкислоты,градиентныйрежимэлюирования,скоростьэлюирования 1 мл/мин, время регистрации 6 мин [105].Определение аскорбиновой кислоты в почках черной смородиныметодом ВЭЖХ осуществляли в аналогичных условиях: колонка 250 × 4,6мм. Сорбент Kromosil 100 – 5 С18, размер частиц 5 мкм, температуратермостата 380С, длина волны детектирования 280 нм, подвижная фаза:ацетонитрил, 0,01% раствор фосфорной кислоты градиентный режимэлюирования, скорость элюирования 1 мл/мин [104].1.4.5.
Определение сапонинов в сырье и фитопрепаратахСтруктура сапонинов очень разнообразна, поэтому общих химическихметодов для определения сапонинов в настоящее время не существует. Дляустановления присутствия сапонинов в лекарственном растительном сырьепользуются реакциями, которые можно разделить на три группы:1. Реакции, основанные на физических свойствах сапонинов.2. Реакции, основанные на химических свойствах сапонинов.3. Реакции, основанные на биологических свойствах сапонинов.К физическим свойствам сапонинов относится способность их в водныхрастворах образовывать пену при взбалтывании.К химическим свойствам сапонинов относится их способностьосаждаться гидроксидом бария и магния, солями меди и ацетатом свинца изводных растворов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
