Диссертация (1141252), страница 6
Текст из файла (страница 6)
В исследованиипринимали участие 4 группы здоровых добровольцев (по 10 добровольцев вкаждой группе), которые принимали перорально препарат в дозах 25 мг (капсулыбыли изготовлены для исследования), 200, 400 и 600 мг (по 2, 4 и 6 капсул по 100мг соответственно):1-ая группа – 25 мг;342-ая группа – 200 мг;3-я группа – 400 мг;4-я группа – 600 мг.Для каждой из групп осуществлялось последовательное включениедобровольцев с промежуточной оценкой параметров безопасности. Группа (10добровольцев) делилась на три когорты (3+3+4).
Первоначально в исследованиевключали первую когорту (3 добровольца), которая принимала препарат в дозе 25мг однократно. После оценки промежуточных результатов анализов безопасности(общий и биохимический анализы крови, общий анализ мочи, клиническая оценкасостояния здоровья) через 7 суток исследования, исследователь принималрешение о включении в исследование второй когорты, и через 7 суток послеоценки безопасности включения первых двух когорт, включали третью когорту изгруппы, которая продолжала прием препарата в дозе 25 мг однократно. Всенежелательныереакции(включаясдвигилабораторныхпоказателей),регистрировались и учитывались при анализе результатов исследования. Попромежуточнымрезультатамисследования1-ойгруппыдобровольцевсоставлялся отчет по безопасности исследуемой дозы препарата.
На основанииотчета по безопасности принималось решение об эскалации дозы для следующейгруппы добровольцев.Основные требования к добровольцам были следующие: мужской пол,возраст – 18-45 лет включительно, вес от 60 до 100 кг включительно, индексмассы тела от 18 до 32 кг/м2, верифицированный диагноз «здоров».Данноеисследованиепроводилосьссоблюдениемтребованийзаконодательных документов и этических принципов, изложенных в ФЗ № 61 «Обобращении лекарственных средств» от 12 апреля 2010 г.
[45], в соответствии справилами Надлежащей клинической практики [59] и регламентировалосьдействующим законодательством.Период приема препаратавключал в себя периодстационарногонаблюдения (отбор проб крови для ФК анализа и мониторинг нежелательныхреакций/нежелательныхявленийвусловияхстационара)ипериода35амбулаторного наблюдения с отбором проб крови для проведения ФК анализа на2, 3, 4, 5, 6, 7 сутки и последующего наблюдения на 14 и 28 сутки.Длительность периода скрининга составляла до 14 дней. Длительностьпериода приема препарата: период стационарного наблюдения – 2 суток (48часов),периодамбулаторногонаблюдения–28суток(визитывисследовательский центр на 3-и, 4-ые, 5,-ые, 6-ые, 7-ые, 14-ые и 28-ые сутки).Общая продолжительность исследования для добровольца составила до 43 дней.Дляанализафармакокинетическихпараметровучитывалиданныедобровольцев, получавших дозу препарата и сдавших не менее 75% проб крови.График отбора проб крови для изучения фармакокинетики был следующим: 0 (доприема препарата), 0.5, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 24, 36, 48, 72, 96, 120,144, 168часов после приема препарата.
Кровь для определения фармакокинетическихпараметров отбиралась в обработанные натриевой солью гепарина пробирки«Вакутейнер» в объеме не более 4 мл для каждой временной точки. Затем кровьцентрифугировали в течение 10 минут при скорости 3000 оборотов в минуту.Плазму замораживали при температуре минус 35°С и передавали в лабораториюдля проведения фармакокинетического анализа.2.4 Программное обеспечениеСтатистическую обработку полученных данных при разработке и валидацииметодики количественного определения тиозонида проводили при помощипрограммногообеспеченияChemStation(ver.B.03.01-SR1),AgilentTechnologies,США.
Фармакокинетические параметры и описательную статистикурассчитывали модельно-независимым методом при помощи пакета MS Excel срасширениемдляпроведенияфармакокинетическогоанализаBoomer36(разработано JoelI. Usansky, Ph.D., AtulDesai, M.S. and DianeTang-Liu, Ph.D.;Department of Pharmacokinetics and Drug Metabolism Allergan, Irvine, CA 92606,США).Были рассчитаны следующие фармакокинетические параметры:1. Значения площади под кривыми «концентрация-время» (AUC);2. Максимальная концентрация (Сmax);3. Время достижения максимальной концентрации (Тmax);4.
Минимальная концентрация (Сmin);5. Период полувыведения (Т ½);6. Кажущийся общий клиренс при приеме препарата внутрь (CL/F);7. Время удерживания вещества в плазме (MRT);8. Показатель скорости всасывания (Сmax/AUC);9. Константа элиминации (kel).Статистический анализ результатов определения концентраций тиозонида вплазмекровиипараметровфармакокинетикизаключалсяврасчетесреднеарифметических (Mean) и среднегеометрических (GMean) значений,стандартного отклонения (SD), коэффициента вариации (CV, %), медианы(Median) и их интервальной оценки (Доверит, L-90%, U-90%), а также быливыделены максимальное (Max) и минимальное (Min) значения для каждогофармакокинетического параметра.37ГЛАВА3.РАЗРАБОТКАИВАЛИДАЦИЯМЕТОДИКИКОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ ТИОЗОНИДА В ПЛАЗМЕ КРОВИТиозонид является инновационным лекарственным средством, в литературеотсутствуют данные по биоаналитическим методикам определения тиозонида вплазме крови людей.По химической структуре тиозонид представляет собой - {1R,2S + 1S,2R}-1(6-Бром-2-хлорхинолил-3-ил)-4-(диметиламино)-2-(нафталин-1-ил)-1фенилбутан-2-ол - порошок белого или белого с желтоватым оттенком цвета.Препарат не растворим в воде, не растворим в изотоническом растворе, 1г/лрастворим в метаноле, 10 г/л в хлороформе (раствор облучают на ультразвуковойбане в течение 10 минут).
Структурная формула тиозонида представлена наРисунке 1:Рисунок 1. Структурная формула тиозонида ({1R, 2S + 1S, 2R}-1-(6-Бром-2хлор-хинолин-3-ил)-4-диметиламино-2-(нафталин-1-ил)-1-фенилбутан-2-ол)C31H28N2OClBrМолекулярная масса: 559.93.383.1 Методика пробоподготовкиНа сегодняшний день при проведении исследований методом ВЭЖХвыделяют следующие основные способы подготовки образцов перед их вводом вприбор, а именно: жидкость-жидкостная экстракция (ЖЖЭ), твердофазнаяэкстракция (ТФЭ), осаждение белков.Жидкостная экстракция (ЖЖЭ) – тип пробоподготовки, который отличаетсяселективностью извлечения, простотой исполнения и сравнительно невысокойстоимостью. Анализируемый образец доводят до необходимого значения pH,далеедобавляюторганическийрастворитель,перемешивают,отделяюторганический слой, затем удаляют экстрагент при нагревании под током азота(или производиться упаривание под вакуумом).
Далее перерастворяют сухойостаток в подходящем растворителе.Процедура ТФЭ состоит из нескольких стадий: нанесение пробы накартридж с сорбентом, последовательное пропускание через картридж различныхрастворителей, которые элюируют посторонние вещества, затем следуетфинальная стадия элюирование аналита с сорбента. Далее производят упариваниеэлюата с последующим перерастворением сухого остатка, если необходимоконцентрирование пробы. [49, 67]. При валидации биоаналитической методикиприменениеТФЭпрактическиполностьюобеспечиваетсоответствиенеобходимым требованиям по повторяемости и правильности [67]. Вместе с тем,у этой процедуры есть и ряд недостатков, основными из которых являютсятрудоемкость и относительная дороговизна.Методосаждениябелков–этопроцедураудалениябелковизбиологической матрицы путем их осаждения различными реагентами.Для анализа тиозонида был выбран метод осаждения белков.
Данныйспособ пробоподготовки является наиболее простой и быстрой процедурой39удаления белков биологической матрицы, а также экономичным в сравнении сЖЖЭ и ТФЭ.Биологическиематрицыв(кровь,данномслучаеплазма,моча)представляют собой сложные смеси эндогенных соединений: белки (главнымобразом), липиды, различные соли, которые могут взаимодействовать саналитами в процессе разделения и мешать хроматографическому определениюисследуемого вещества, создавая дополнительные пики на хроматограмме иоказывая влияние на ионизацию молекул аналита. Белки, в значительныхколичествах присутствующие в плазме крови, могут необратимо адсорбироватьсяна хроматографической колонке, что приведет к ухудшению эффективности ирезкому сокращению срока службы колонки.
Суть метода состоит в том, чтобыдостичь таких значений рН, при которых происходит коагуляция белка, например,кпробедобавляюттрифторуксусную,сильныетрихлоруксусную)органические[68,69],кислоты(муравьиную,смешивающиесясводойорганические растворители, в основном - метанол [70, 71], ацетонитрил [72, 73],реже этанол или соли металлов: цинка, свинца и др. Методом осаждения белковможно добиться удаления до 98 % белков плазмы [74].Следует отметить, что необходимо учитывать возможность возникновенияреакцийосаждающегореагентасопределяемымЛВ(гидролиз,комплексообразование) и оценивать растворимость ЛВ в выбранных условиях.Такжеследуетучитыватьпроцессразбавленияпробыисоотношениекомпонентов осаждающий реагент - объем плазмы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
