Диссертация (1140912), страница 8
Текст из файла (страница 8)
Во все лунки вносили по 100 мкл приготовленного непосредственно перед употреблением субстратного раствора и выдерживали 1015 мин при температуре 2024о С в темном месте. Ферментативную ре-38акцию останавливали, добавляя по 50 мкл стоп-реагента во все лунки. Затемнемедленно проводили учет результатов ИФА.Учет результатовУчет результатов проводили при длине волны 492 нм спектрофотометрически с использованием фотометра АИФ-М/340. Результаты оценивали, переводя в условные единицы оптической плотности (U/ml).
Калибровочная криваястроилась на основании раститровки положительного контроля. За 1000 U/mlпринимали соответствующее рабочему разведению исследуемых образцов сывороток значение оптической плотности.Статистическая обработка результатовСтатистическая обработка результатов исследования осуществлялась сприменением пакета статистических программ STATISTICA 6.0. В случаях, когда исследуемые выборки имели нормальное распределение, использовалисьпараметрические критерии. Определялось среднее арифметическое и его стандартное отклонение, для оценки существенности различий двух выборок применялся критерий Стьюдента. При проведении множественных сравнений учитывалась поправка Бонферрони. Различия считались достоверными при р <0,05.При распределениях, отличающихся от нормального, анализ полученныхрезультатов осуществлялся с применением непараметрических критериев.
Выявление различий в средних тенденциях для зависимых и независимых выборокосуществлялось с использованием соответственно критерия Уилкоксона и критерия Манна-Уитни. Вычисление значимости различий долей (процентов) проводилось по методу углового преобразования Фишера.Таким образом, проведено обследование 187 человек, из них 45 практически здоровых лиц, с применением методов, позволивших достаточно полноохарактеризовать иммунологический статус больных патологией шейки и теламатки до начала и после проведения противоопухолевого лечения. Необходимый комплекс выполненных исследований позволил подвести логическоеобоснование положениям, выдвигаемым на защиту.39ГЛАВА 3 СОДЕРЖАНИЕ РАСТВОРИМЫХ МОЛЕКУЛ CD95,РАСТВОРИМЫХ МОЛЕКУЛ HLA I КЛАССА И HLA-DRВ СЫВОРОТКЕ КРОВИ БОЛЬНЫХПАТОЛОГИЕЙ ШЕЙКИ И ТЕЛА МАТКИ3.1 Содержание растворимых молекул CD95У больных раком шейки матки средний сывороточный уровень суммарнойфракции растворимых молекул CD95 достоверно превышал норму в 2,5 раза и соответствовал 925,8+98,3 U/ml.
В норме его содержание равнялось 374,3±23,8 U/ml.У больных злокачественными опухолями тела матки сывороточный уровень белкасоставил 395,353,7 U/ml, что достоверно не отличалось от уровня значений здоровых лиц и было достоверно ниже, в 2,3 раза, чем у больных РШМ. При доброкачественной патологии тела матки, у больных миомами, средний сывороточныйуровень суммарной фракции растворимых молекул CD95 составил 507,4+49,8U/ml, превышая норму в 1,4 раза (р<0,05) и достоверно отличаясь от данного показателя у больных РШМ в 1,8 раза. Различия с содержанием sCD95 молекул убольных злокачественными опухолями тела матки были недостоверны. В случаяхаденомиоза сывороточный уровень белка соответствовал 480,4+30,4 U/ml и достоверно не отличался от сходных показателей у больных злокачественными илидоброкачественными опухолями тела матки.
Однако различия со средним сывороточным уровнем суммарной фракции растворимых молекул CD95 у больныхраком шейки матки были достоверны, (в 1,9 раза) и сохранялись различия (р<0,05)с показателями контрольной группы.Выявленные отличия в концентрациях суммарной фракции растворимыхмолекул CD95 у больных патологией шейки и тела матки указывают на участиеэтого белка в формировании иммунного ответа при данных заболеваниях. Однако механизмы этого вмешательства, по-видимому, различны, более активныу больных раком шейки матки, а при патологии тела матки, вероятно, экспрессия мембранной формы данного антигена на иммунокомпетентных клетках вусловиях иммуносупрессии менее выражена.40Анализ влияния гистологического варианта строения злокачественнойопухоли тела матки на уровень суммарной фракции растворимых молекулCD95 показал, что у больных аденокарциномами его значение составило545,7+60,1 U/ml, что в 1,5 раза превышало норму (р<0,05).
У больных опухолями, имеющими железисто-плоскоклеточное строение, уровень белка соответствовал 364,5+55,6 U/ml, не отличаясь от уровня в группе контроля и у больныхаденокарциномами. У больных саркомами матки содержание sCD95 молекулсоставило 278,2+61,0 U/ml, не отличалось статистически значимо от нормы, нобыло меньше (р<0,05) в 1,9 раза, чем у больных аденокарциномами и в 1,3 раза(р<0,05)меньше,чемвгруппеженщин,страдающихжелезисто-плоскоклеточными опухолями. Представленные данные свидетельствуют отом, что наиболее агрессивный вариант опухолей тела матки, плохо отвечающий на последующую противоопухолевую терапию – саркомы матки – сопровождается более выраженной иммуносупрессией, которая, в частности, проявляется снижением образования sCD95 молекул. Напротив, вариантам заболевания, протекающим относительно более благоприятно и лучше поддающимсяпоследующему лечению, сопутствует более высокий уровень данного белка.Железисто-плоскоклеточный рак, имеющий худший клинический прогноз, чемаденокарцинома, сопровождается более низкой экспрессией CD95 молекул наповерхности иммунокомпетентных клеток и, следовательно, менее выраженнойактивацией иммунного ответа.
Возможно, выявленные отличия в уровне sCD95молекул отражают особенности функционирования иммунной системы, связанные с развитием того или иного морфологического варианта опухоли, и могут служить в качестве прогностического фактора течения заболевания.Подтверждением вышеприведенным данным являются изменения содержания суммарной фракции растворимых молекул CD95 в зависимости от степени дифференцировки опухолевого процесса в матке. У больных высокодифференцированными аденокарциномами, имеющими наиболее благоприятноетечение, уровень sCD95 молекул достоверно превышал норму в 1,9 раза(697,0+63,5 U/ml), у больных умереннодифференцированными аденокарцино-41мами – достоверно не отличался от нормы, но в 1,8 раза (387,5+36,2 U/ml) былниже (р<0,05), чем в предыдущей группе.
В случаях аденокарциномы низкойстепени дифференцировки, имеющий плохой прогноз, содержание данногобелка (290,6+36,1 U/ml) не отличалось от нормы и значений этого показателя вгруппе больных умереннодифференцированной аденокарциномой, но былозначимо ниже, в 2,4 раза, чем у больных высокодифференцированными опухолями (рис.1).КонцентрацияsCD95, U/ml700697,0*600500374,3400290,0**300238,0**20010001234обследованныегруппыРисунок 1 – Содержание суммарной фракции растворимых молекулCD95 в зависимости от степени дифференцировки опухолевого процесса в матке1 группа – больные высокодифференцированными аденокарциномами,n=22,2 группа – больные умереннодифференцированными аденокарциномами,n=19,3 группа – больныенизкодифференцированнымиаденокарциномами,n=14,4 группа – контрольная, n=45.* – статистически значимые различия в сравнении с контролем, (р<0,05);** – статистически значимые различия в сравнении с группой больных высокодифференцированными аденокарциномами, (р<0,05).42Индивидуальный анализ изменений уровня sCD95 молекул в зависимостиот степени дифференцировки новообразования выявил достоверные отличия почислу лиц, имевших повышенное содержание белка, среди пациенток с высокодифференцированными аденокарциномами и умереннодифференцированнымиаденокарциномами (6 из 24 и 1 из 19 соответственно, р=0,03) и среди пациенток свысокодифференцированными аденокарциномами и низкодифференцированнымиаденокарциномами (6 из 24 и 0 из 14 соответственно, р=0,002).
Полученные данные указывают на возможность использования определения уровня sCD95 молекул в качестве дополнительного фактора прогноза заболевания.Известно, что риск лимфогенной диссеминации определяется в первую очередь степенью дифференцировки опухоли и возрастает у больных низкодифференцированными новообразованиями. Подобные опухоли обычно характеризуются более глубокой инвазией миометрия и частым переходом на шейку матки, кроме того при них чаще наблюдаются лимфогенные метастазы [8].
В этих условияхснижение сывороточного содержания растворимых молекул CD95 может свидетельствовать о более глубокой дисфункции иммунной системы у этой группыбольных, по сравнению с пациентками, имеющими высокодифференцированныеновообразования. Таким образом, степень дифференцировки опухолевого процесса взаимосвязана с уровнем суммарной фракции растворимых молекул CD95 всыворотке крови больных.В прогнозировании течения злокачественных процессов тела матки важнымфактором является глубина инвазии опухоли в миометрий.
Проанализировано изменение сывороточной концентрации растворимых молекул CD95 в зависимостиот глубины инвазии опухоли тела матки.Во всех исследованных группах пациенток содержание суммарной фракциирастворимых молекул CD95 достоверно отличалось от показателя в контрольнойгруппе. Кроме того, у больных опухолями тела матки с инвазией более 1/2 миометрия (490,1+47,9 U/ml), исследуемый показатель был в 1,2 раза ниже, чем уженщин с опухолями, локализованными в пределах эндометрия (575,5+71,0 U/ml)или с опухолями тела матки с инвазией менее 1/2 миометрия (576,3+62,7 U/ml).43Однако выявленные различия были недостоверны.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
