Диссертация (1140912), страница 7
Текст из файла (страница 7)
Во всех наблюдениях диагноз заболевания был подтвержден даннымипатологоанатомического исследования послеоперационного материала. На основании клинико–инструментального обследования пациенток и с учетомпостхирургической классификации РШМ и опухолей тела матки у 61 больных(73,5%) установлена I, у 22 (26,5%) – II стадия заболевания.Проведенное лечение зависело от стадии заболевания, гистологическоготипа строения опухоли и включало различные виды оперативных вмешательств (таблица 1), преимущественно тотальную гистерэктомию с придатками – 79 человек (55,6%) или субтотальную гистерэктомию без придатков – 25(17,6%).Значительно реже были выполнены такие операции, как консервативнаямиомэктомия – 17 (12,0%), субтотальная гистерэктомия с придатками 15(10,6%) и тотальная гистерэктомия без придатков – 6 (4,2%).На ранних стадиях рака шейки матки симптоматика была очень скудна.В качестве первого симптома заболевания большинство пациенток (13 человек– 15,3%) отмечало появление контактных кровотечений, усиление влагалищ-32ных выделений-белей, реже – жалобы на боли внизу живота (6 женщин –7,1%).
Клиническая картина опухолей тела матки характеризовалась меноррагиями и маточными кровотечениями в межменструальный период и в постменопаузе (60 человек – 92,3%), схваткообразными болями внизу живота (39 человек – 60,0%). Выявление опухоли в результате обследования в лечебныхучреждениях (сопутствующая патология, профосмотр) имело место в 100%наблюдений (83 человека).Таблица 1– Виды оперативных вмешательств, проведенных обследованным больным в зависимости от патологии шейки и тела маткиЛокализацияопухолиРак шейкиматкиn=18Опухолитела матки,n=65Аденомиоз,n=6ВидоперацииКоличествобольныхПроцент отобщего числабольныхс даннойлокализацией,%Процент отобщего числаобследованныхбольных, %,n=142Тотальнаягистерэктомияс придатками1688,911,3Тотальнаягистерэктомия211,11,4Тотальнаягистерэктомияс придатками6193,843,0Тотальнаягистерэктомия46,22,8Тотальнаягистерэктомияс придатками233,31,4Консервативнаямиомэктомия116,70,7Субтотальнаягистерэктомияс придатками3502,133Продолжение таблицы 1ЛокализацияопухолиМиомаматки,n=53ВидоперацииКоличествобольныхПроцент отобщего числабольныхс даннойлокализацией,%Консервативнаямиомэктомия1630,211,3Субтотальнаягистерэктомия2547,217,6Субтотальнаягистерэктомияс придатками1222,68,4Процент отобщего числаобследованныхбольных, %,n=142В качестве сопутствующей патологии у пациенток преобладали заболевания сердечно–сосудистой системы (48 женщин – 33,8%) и желудочно–кишечного тракта (37 человека – 26,0 %), остеохондроз (19 человек – 13,4%).
В44,4 % случаев (63 человека) пациентки страдали избыточным весом. Воспалительные заболевания женских половых органов или доброкачественные опухоли были выявлены у 76 женщин (54,9%). Реже встречались сопутствующие заболевания почек (12 человек – 8,5%) и бронхо–легочной системы (7 больных –4,9%). Половина пациенток – 81 человека (57,0%), по данным гинекологического анамнеза, находилась в постменопаузальном периоде.Гистологическая характеристика опухоли у обследованных пациентокустановлена в соответствии с «Морфологической классификацией злокачественных новообразований» (WHO, 2003). У больных РШМ во всех случаяхбыл выявлен плоскоклеточный рак шейки матки (18 человек – 100%).
У больных опухолями тела матки преобладал гистологический вариант аденокарцинома – 55 (84,5%), реже встречалась саркома матки – 6 (9,3%) или железистоплоскоклеточный рак – 4 (6,2%) случаев. У больных аденокарциномами преимущественно имела место высокая степень дифференцировки опухоли – 22(40,0%), реже встречались умереннодифференцированные (19 – 34,5%) и низкодифференцированные (14 – 25,5%) новообразования. Инвазия опухоли у 1034больных (18,2%) распространялась только на эндометрий, у 22 (40,0%) – менее1/2 миометрия, у 23 (41,8%) – более 1/2 миометрия.У больных миомами матки (53 человека) преобладала интерстициально–субсерозная (15 женщин – 28,3%) локализация миоматозного узла, реже встречались субсерозная (12 пациенток – 22,6%), субмукозная или интерстициально–субмукозная локализации (9 больных в каждой группе – 17,0%) и интерстициальная локализация (8 женщин – 15,1%).
У 10 женщин (18,9%) количество миоматозных узлов составило 4-6, у 28 пациенток (52,8%) имело место наличие 23 узлов, у 15 (28,3%) – одного узла.Таким образом, количество обследованных больных было достаточнымдля получения статистически достоверных результатов клинических и лабораторных исследований, составивших основу работы.2.2 Методы исследования и леченияКлиническое обследованиеКлиническое обследование начиналось с беседы, во время проведения которой врач выяснял жалобы больной, получал анамнестические данные, а такжезнакомился с медицинской документацией, относящейся к данной пациентке.При проведении соматического обследования использовался системный подход. Осуществлялись осмотр и пальпация молочных желез, периферическихлимфоузлов, аускультация и перкуссия органов грудной клетки, пальпация иперкуссия органов брюшной полости.
Проводился осмотр шейки матки с помощью зеркал, влагалищно-брюшностеночное и ректальное исследование,кольпоскопия, оценивались данные цитологического и гистологического исследования. Обязательным для диагностики рака шейки и тела матки являласьгистероскопия, раздельное выскабливание цервикального канала и полостиматки.
Величина опухоли и состояние лимфатических узлов определялось спомощью УЗИ и компьютерной томографии. Результаты обследования регистрировались в формализованной карте.35Инструментальные методы диагностикиИнструментальные методы диагностики включали маммографию (69,0%)и/или ультразвуковое исследование (УЗИ) молочных желез (22,5%), ножевуюбиопсию шейки матки (21,1%), рентгенографию грудной клетки (100,0%), компьютерную томографию малого таза (77,5%) и УЗИ органов брюшной полости(100,0%), УЗИ малого таза (100%). По показаниям выполнялось исследованиежелудочно–кишечного тракта (10,6%).Всем больным проводилось гинекологическое обследование и гистерскопия (66,9%) с раздельным выскабливанием цервикального канала и полостиматки (100%).Иммунологические исследованияИммунологические исследования были выполнены на кафедре молекулярнойбиологииииммунологии(заведующий–д.б.н.,профессорВ.В.Новиков) Нижегородского государственного университета им.
Н.Н. Лобачевского. Все анализы выполнялись в динамике: до начала лечения и после егоокончания. Для получения образцов сыворотки использовали кровь, взятую изкубитальной вены. Для образования сгустка образцы крови последовательновыдерживали при температуре +37С 30 минут в термостате и в холодильникепри температуре +4С. После этого свернувшуюся кровь центрифугировали 15минут при 200g. Сыворотку собирали в сухие, чистые пластиковые микропробирки.
Полученную сыворотку хранили при температуре –40 – 60°С в холодильнике до 6 месяцев.Используемые моноклональные антителаДля проведения иммуноферментного анализа с целью выявления растворимых форм дифференцировочных молекул применяли мышиные моноклональные антитела (МКА) серии ИКО, продуцируемые гибридомами, полученными в Российском онкологическом научном центре им. Н.Н.Блохина профессором Барышниковым А.Ю. Список используемых в работе антител приведен втаблице 2.36Таблица 2 – Краткая характеристика использованных в работе антителНаименованиеантителНаименованиедифференцировочныхмолекулпо CD классификацииДругиеназвания молекулИКО-20CD38Т10ИКО-60CD50ICAM-3ИКО-184CD54ICAM-1ИКО-160CD95Fas/Apo1ИКО-53Альфа-цепьHLA–I классаИКО-1HLA-DRОпределение уровня растворимых дифференцировочных молекул в сыворотке крови проводили двухсайтовым иммуноферментным методом (ИФА):суммарных фракций антигенов с использованием поликлональных антител вкачестве подложки и моноклональных антител, конъюгированных с ферментомпероксидазой корня хрена; олигомерных фракций с использованием одних итех же моноклональных антител для подложки и для конъюгата [23; 25; 22].Подготовка реагентовДля промывания планшетов с иммуносорбентом, разведения исследуемых/контрольных образцов и конъюгата использовали фосфатно-солевой раствор (ФСР-Т), содержащий 0,9 % NaCl; 0,1 % Na2HPO4; 0,1 % твин-80.
Допустимый интервал рН – 7,27,6.Блокирующий раствор готовили следующим образом. Сначала готовили 10%-ный раствор пептона ферментативного фирмы «Difko» на физиологическомрастворе, содержащем 0,1 % фенола и 0,1 % мертиолята. Затем непосредственноперед употреблением готовили 2 %-ный раствор пептона с раствором ФСР-Т.Для создания конъюгатов с пероксидазой хрена применяли моноклональные антитела серии ИКО против соответствующих дифференцировочных молекул или молекул гистосовместимости.37Для проявления пероксидазной реакции в качестве субстрата использовали раствор ортофенилендиамина (ОФД). Обычно 10 мг ОФД растворяли в 10мл 0,1 М цитратного буферного раствора (рН 4,95,1), содержащего 0,05 % перекиси водорода.Для остановки ферментативной реакции использовали стоп-реагент - 5%ный раствор серной кислоты.Проведение ИФАДля сорбции антител на твердую фазу использовали модифицированныеультрафиолетовым облучением разборные полистироловые планшеты производства «ВНИИ Медполимер».
Для связывания на твердом носителе растворимых форм белков были взяты направленные против поверхностных антигеновлимфоцитов периферической крови человека козьи поликлональные антитела.Поликлональные антитела для сорбции разводили 0,85%-ным раствором NaCl всоотношении 1:500. Антитела иммобилизовывали в концентрации 510 мкг/млна планшетах в течение 24 часов при температуре 2024о C в объеме 100 мкл.Планшеты инкубировали при комнатной температуре 24 часа во влажной камере, затем 56 раз отмывали раствором ФСР-Т.В первый ряд лунок сорбированного планшета вносили по 100 мкл положительной контрольной сыворотки (К+) в следующих разведениях: цельнаясыворотка, 1:2, 1:4, 1:8, 1:16, 1:32, 1:64 и т.д. Сыворотку разводили растворомФСР-Т.
Для контроля над фоновыми реакциями в 23 лунки вносили по 100мкл раствора ФСР-Т. В остальные лунки планшета вносили по 100 мкл исследуемых образцов сыворотки. Исследуемые образцы сывороток предварительноразводили раствором ФСР-Т в соотношении 1:1. Планшеты инкубировали прикомнатной температуре 24 часа и отмывали, как описано выше.Затем во все лунки планшета вносили по 100 мкл конъюгата в рабочемразведении. Планшет инкубировали при температуре (37±1) оС 1 час и промывали 6 раз раствором ФСР-Т.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
