Диссертация (1140142), страница 10
Текст из файла (страница 10)
Данные анамнеза включали сведения опродолжительности и характере течения заболевания, провоцирующихфакторах, распространенности и локализации процесса, используемыхметодах лечения и их эффективности, наличии аналогичных симптомов удругих членов семьи.Для выявления сопутствующей патологии различных органов исистем, был проведен ряд общеклинических обследований больных до ипосле проведенной терапии.Проводилиинструментальныеисследования(ультразвуковоеисследование органов брюшной полости, щитовидной железы, почек,органовмалоготаза,ЭКГ),принеобходимостипациентыбыликонсультированы терапевтом, эндокринологом, гинекологом (урологом) идругими специалистами.ЛабораторноепараметровисследованиекровипроводилииммунологическойвлабораторииклиническихимежклиническойПервогоМГМУбиохимическихбиохимическойим.иИ.М.Сеченова.Исследования выполнялись по стандартным общепринятым методикам всемпациентам до начала лечения и после проведенной терапии.2.3.1 Определение уровней цитокинов и фактора роста эндотелиясосудов: обоснование и методы оценкиСложностьвитилиго,клеточныхявляется,этиопатогенетическихмеханизмов,участвующихочевидно,критическойточкойаспектовзаболевания.Какдлявразвитиипониманияпоказановгл.1,58современные научные данные о кожных заболеваниях с депигментацией, вчастности, данные о межклеточном взаимодействии кератиноцитов имеланоцитов, опосредованных цитокинами и факторами роста, позволяютспециалистам глубже оценить возможную терапевтическую роль этихмедиаторов для лечения витилиго [Nguyen T.V.
et al., 2013; Nouri-Koupaee A.et al., 2015].Хроническоевоспалениеявляетсяважнымкомпонентомэтиопатогенеза витилиго. Поскольку витилиго представляет собой системноехроническоеаутоиммунноевоспалительноезаболевание,важнейшимэтиологическим фактором которого является патогенетическая взаимосвязьмеждуокислительнымстрессомихроническимивоспалительнымипроцессами, вторичными по отношению к повышению уровней цитокиновклеток Th1/Th17 (ИЛ-1, 17, ИФН-γ и ФНО-α), то предложить оригинальное иинновационное лечение можно лишь воздействуя на эту первопричину.Очевидно, что возможность эффективной модуляции клеточнойсигнализации посредством конкретных цитокинов, антител и факторов ростаможет представлять собой многообещающую терапевтическую цель.Как было отмечено в гл.1, важнейшим звеном патогенеза витилигоявляется разрушение меланоцитов цитотоксическими (CD8+) лимфоцитами[van den Boorn J.G. et al., 2009].
Эти клетки продуцируют ряд цитокинов,которые взаимодействуют с пептидами, регулирующими дифференцировкумеланоцитов [Elela M.A. et al., 2013; Tembhre M.K. et al., 2013]. У больныхвитилиго, как правило, выявляется увеличение концентраций цитокинов,при этом вокругочаговвитилиго формируется провоспалительноеокружение, наблюдается также повышенный уровень провоспалительныхцитокинов интерлейкинов -1, 6, 8, ФНО-α, в сыворотке крови. Имеютсясообщения о том, что ФНО-ɑнепосредственно участвует в патогенезезаболевания [Alghamdi K.M.
et al., 2012].Повышенные уровни провоспалительных цитокинов, катехоламинов иоксида азота (NO), а также нарушенная активность факторов роста59уменьшают экспрессию антиоксидантных молекул, являющихся основнымипрооксидантными факторами, наблюдаемыми при витилиго [Westerhof W.,d’Ischia M., 2007; Thannickal V.J. et al., 2000; Jain D. et al., 2008].Наличие хронического воспаления и нарушения иммунного ответаиндуцируют апоптоз кератиноцитов. В частности, ФНО-α уменьшаетактивацию пути PI3K/Akt и подавляет механизм, блокирующий ядерныйфактор NF-κB, активируя таким образом этот фактор.
Усиленный NF-kBпровоспалительный ответ приводит к сверхэкспрессии Th1-цитокинов, такихкак ИЛ-6, 33 и ФНО-α, усиливая отрицательную обратную связь [Li P. et al.,2015].Апоптоз кератиноцитов индуцирует снижение секреции факторов ET,SCF и b-FGF [Choi H.R. et al., 2010] с последующей нарушенной стимуляциеймеланоцитов; ИЛ-33 также способствует нарушению взаимодействия междукератиноцитами и меланоцитами за счет снижения секреции факторов роста[Li P. et al., 2015].
Нарушение роста меланоцитов является основнойпричиной снижения уровня меланина в области витилиго. Высокие уровниИЛ-1 и 33 в области витилиго свидетельствуют о важнейшей ролиповышения экспрессии данных интерлейкинов в развитии витилиго.Хроническое провоспалительное микроокружение, в основном определяемоеуровнями ИЛ-1, 33 и ФНО-α, является ключевым фактором, нарушающимвзаимодействие между кератиноцитами и меланоцитами, что, в своюочередь, приводит к нарушению влияния факторов роста.Полученные к настоящему времени убедительные данные о развитиииммуннойреакциипротивмеланоцитовпривитилигопослужилиоснованием к изучению в рамках нашего исследования концентрацийосновных провоспалительных цитокинов в качестве своего рода биомаркеровдля оценки патогенетической обоснованности применения ОТП в леченииданного заболевания.Цитoкиновыйстатусбольныхвитилигопутемопределенияконцентраций важнейших цитокинов с помощью иммуноферментного60анализа (ИФА) с использованием соответствующих мoноклональныхантител, иммoбилизированных на поверхности лунок полистирoловогопланшета из наборов тест-систем «ИФA-БЕСТ».В ходе определения также оценивали концентрацию фактора ростаэндотелия сосудов в сыворотке крови пациентов с витилиго.На первом этапе образцы плазмы инкубировали в лунках симмобилизированными антителами (АТ), специфичными к пространственноудаленным эпитопам исследуемого антигена.
Связанные с АТ рецепторныеантагонисты к исследованным цитокинам, выявляли при инкубации сантителами,конъюгированнымисферментнойметкой.Количествосвязанного коньюгата определяли цветной реакцией с использованиемсубстрата(пероксидазыхрена)ихромогена(тетраметилбензидина).Останавливали реакцию добавлением в лунки по 50 мкл стоп-реагента,представляющего собой раствор серной кислоты в концентрации 1 моль/л.Результаты ИФА регистрировали с помощью спектрофотометра, измеряяоптическую плотность на длине волны 450 нм. Измерения проводили непозднее 10-15 мин после остановки реакции.2.3.2 Оценка содержания меланина в кожеС целью количественной оценки содержания меланина в пораженныхучастках кожи применяли неинвазивный метод диагностики – мексаметрию.Исследование было выполнено с помощью аппарата CUTOMЕTER MPА 580CK Electronic (Германия) с насадкой MЕXAMЕTER MX 18.
Принцип методазаключается в том, что электромагнитные волны инфракрасной (870 нм),зеленой (568 нм) и красной частоты (660 нм), которые генерируютсядатчиком-измерителем, проходят через кожу и поглощаются гемоглобином имеланином, рассеиваясь коллагеновыми волокнами дермы, проходя затемобратный путь через слои дермы и эпидермиса.61Спектральный состав отраженного кожей света видимого диапазонаопределяется преимущественно количеством гемоглобина и меланина, приэтом меланин способен поглощать свет в широком длинноволновомдиапазоне (от ультрафиолетового до инфракрасного). Гемоглобин имеетхарактерные полосы поглощения в спектральных диапазонах около 420 и545-575 нм.
Свет, oтраженный от исследуемой ткани, воспринимаетвстроенный приемник. При помощи инфракрасных волн двух частот,подобранных, так, чтобы достичь двух различных уровней поглощения светамеланином, измеряется соответственно его количество, и устанавливаетсясреднее значение.В зависимости от локализации поражения пациенту было предложенозанять удобное для него положение. К пораженному участку кожи подносилидатчик, который излучает свет трех длин волн.
Приемноеустройствоопределяет свет, отраженный от кожи. Результаты, полученные приизмерении, выводились на табло в цифровом виде.2.3.3 Оценка качества жизни пациентовКачество жизни пациентов с витилиго оценивали с помощьюдерматологического индекса качества жизни (ДИКЖ), для этого проводилианкетирование больных. Метод был предложен исследователями изВеликобритании в Finlay A.
и Khan G. (1994) и адаптирован к применению вРоссии Кочергиным Н.Г. в 2001 г. Анкетирование проводили до и послелечения спустя 6 и 12 мес.Анкета состоит из 10 вопросов, которыеохватывают различные аспектыжизнибольного:профессиональные,бытовые, сексуальные, социальные, личностные. Целью исследованиеявляется оценка степени влияния кожного заболевания на образ жизнибольного.Вопросы для определения ДИКЖ:62•Испытывали ли Вы зуд, жжение или болезненность на прошлойнеделе?•Испытывали ли Вы ощущение неловкости или смущение в связис состоянием Вашей кожи?•Как сильно Ваши проблемы с кожей мешали Вам заниматьсяуборкой дома или покупками?•Насколько сильно состояние Вашей кожи влияло на выборВашего гардероба на прошлой неделе?•Как сильно влияло состояние Вашей кожи на Ваш досуг исоциальную активность на прошлой неделе?•На прошлой неделе состояние Вашей кожи мешало Вамзаниматься спортом?•Пропускали ли Вы учёбу, отсутствовали на работе из-засостояния Вашей кожи? Если Вы ответили «нет», то насколько сильно Васбеспокоило состояние Вашей кожи, когда вы находились на работе илиучёбе?•Влияло ли состояние Вашей кожи на Ваши отношения сродственниками, партнерами, друзьями на прошлой неделе?•Насколько сильно Ваши проблемы с кожей влияли на Вашусексуальную жизнь?•На прошлой неделе насколько сильно лечение заболевания кожипричиняло Вам неудобства, отнимало время, создавало проблемы?На каждый вопрос предлагается 4 варианта ответа, каждый изкоторых оценивается соответственно от 0 до 3 баллов.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
