Диссертация (1140130), страница 9
Текст из файла (страница 9)
Контролем явилась культурамакрофагов, к которой добавляли растворитель без микробной взвеси. Затемстекла промывали в 6 порциях стерильного раствора Хенкса, переносили встерильные пенициллиновые флаконы с 2 мл среды 199 с добавлением 20%инактивированной сыворотки и пенициллина - 100 ед/мл и вновьинкубировали при +370 С в течение 5 часов. После инкубации стеклаподсушивали, фиксировали 20 минут и окрашивали по Май-Грюнвальду сдокрашиванием по Романовскому-Гимзе. Мазки высушивали и с помощьюиммерсионного масла и просматривали в микроскопе при увеличении 90x7.В мазках подсчитывали процент клеток с апоптозом. Средний показательвычисляли по трем экспериментам.
При условии обнаружения в контрольныхмазках 94±1% жизнеспособных макрофагов подсчитывали процент клеток сапоптозом в опытных образцах.2.2.5. Определение содержания антистрептолизина-ООпределение содержания антистрептолизина-О (АСО) в сывороткекрови проводили с использованием набора реагентов производства НПФ«Абрис+», Санкт-Петербург. Для качественного определения содержанияАСО в индивидуальные лунки тест-пластины помещали калибраторы иисследуемые образцы сыворотки крови в объеме 20 мклСО (стрептолизинО), иммобилизированного на частицах латекса, быстро перемешивалисодержимое лунок индивидуальным шпателем до гомогенного состояния.49Реакционную смесь перемешивали круговыми движениями со скоростью 80оборотов в минуту в течение 2 минут.
Процесс агглютинации регистрировалив течение 1 минуты после окончания движения тест-пластины. Приполучении равномерно-гомогенной молочной суспензии концентрацию АСОсчитали <200 МЕ/мл, при образовании мелких агрегатов – 200 МЕ/мл, четковидимых агрегатов >200 МЕ/мл. Полуколичественное определение АСОпроводилисразведениемисследуемыхпробибуферавразныхсоотношениях, получая соответствующее содержание АСО (МЕ/мл) согласнотаблице в инструкции по применению. Конечным результатом анализасчитали пробу с наибольшим разведением.2.2.6. Статистические методыСтатистический анализ и обработка собранных данных выполнялись вR (версия 3.2, R Foundation for Statistical Computing, Vienna, Austria),прикладных программах Microsoft Excel, Statistica 7.0 Stat Soft. В качествеописательных статистик использовались среднее и стандартное отклонение(), также расчитывались медианы и квартильный размах (Me [Q1; Q3]).Вариационные ряды анализировались на соответствие закону нормальногораспределения с помощью признака Шапиро – Уилка.Для сравнения количественных и порядковых показателей по двумгруппам использовался непараметрический тест Манна-Уитни, при большемчисле групп – тест Краскела-Уоллиса.
Сравнение повторных измеренийосуществлялось с использованием Т-критерия Вилкоксона.Статистическаязначимостьассоциациймеждукачественнымипоказателями по частоте встречаемости факторов оценивалась с помощьюточного критерия Фишера.Для анализа факторов, влияющих на качественные показатели,проведения многофакторного анализа и построения диагностическихмоделей также использовалась логистическая регрессия.
Для значимых50регрессоров оценивалось отношение шансов (OR – odds ratio), отношениерисков (RR–relate drisk) и 95% доверительный интервал (CI) для них.Бисериальный коэффициент корреляции вычислялся, когда одна переменнаяизмерялась в номинальной дихотомической шкале, а вторая переменная вколичественной. При анализе коэффициентов корреляции интерпретациявеличины силы связи смещена влево до 0,85.Для сравнения качества диагностики и выбора лучших моделейпроводился ROC-анализ (Receiver Operator Characteristic). Для каждоймодели строилась ROC-кривая (ROC curve) и выбирался пороговый уровень,соответствующий лучшему сочетанию чувствительности (sensitivity) испецифичности (specificity). Далее модели сравнивались по уровню AUC(area under ROC curve), а также чувствительности и специфичности длявыбранного порогового уровня.
Для оценки силы связи между изучаемымиколичественнымипризнакамииспользовалсянепараметрическийкоэффициент корреляции Спирмена (rho). Для оценки CI распространенностииспользовались интервалы Джефри с уровнем доверия в 95%. Критическоезначение уровня статистической значимости при проверке нулевых гипотезпринималось равным 0,05.51Глава 3. СОБСТВЕННЫЕ ДАННЫЕ.КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКАЭПШТЕЙНА-БАРР ВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ,АССОЦИИРОВАННОЙ С БАКТЕРИЯМИ3.1.
Состояние преморбидного фона, клиническая симптоматикас учетом возраста пациентов, форм тяжести, периода заболеванияИзучение анамнестических данных выявило наличие неблагоприятногопреморбидного фона у всех больных (таблица 3.1). Патологию периодабеременности отмечали у 54% матерей обследуемых пациентов, в том численеинфекционную – у 49%, инфекционную – у 39%. Неинфекционнаяпатология беременности включала гестоз – у 36%, угрозу прерываниябеременности – у 33%, фетоплацентарную недостаточность – у 21%, анемию– у 28% женщин. Инфекционную патологию периода беременностирегистрировали в форме острой респираторной инфекции – у 30%,герпесвирусной инфекции – у 24% матерей. У 36% женщин отмечалипатологическое течение родов, из которых затяжные роды составили 10%,стремительные – 7%, роды путем кесарева сечения – 19%.Отягощенный семейный анамнез имел место более чем у половиныобследованных детей, в том числе аллергопатология (28%), перенесенныегерпесвируные инфекции (22%), вредные привычки (42%).У 38% пациентов в период новорожденности имели место один илинесколько таких факторов риска, как асфиксия (12%), недоношенность(20%), искусственное вскармливание (39%), признаки перинатальнойпатологии ЦНС (42%).Патологию со стороны ЦНС регистрировали у 22%, ССС – 20%, МВС –9%, эндокринной системы – 6% обследованных детей.
Аллергопатологию(атопический дерматит, аллергический ринит, бронхиальная астма) выявилиу 27% пациентов. Частые острые респираторные заболевания встречали у5246%, в том числе в виде фаринготонзиллита – у 15% пациентов.Герпесвирусную инфекцию перенесли 38% обследованных, в том числе вформе инфекционного мононуклеоза – 12% детей.Таблица 3.1. Анамнестические данные больных с учетом формы тяжестиЭБВИ АсБ.Среднетяжелая формаТяжелая формаабс.
(%)Патология периода беременности:1. Неинфекционная: гестоз угроза прерывания беременности ФПН анемия2. Инфекционная: ОРЗ ГВИРВсе больныеабс. (%)(достоверносьразличий междуформами тяжести)58 (52%)53 (47%)39 (35%)33 (29%)18 (16%)29 (26%)37 (33%)28 (25%)23 (21%)17 (65%)14 (54%)10 (38%)13 (50%)11 (42%)10 (38%)17 (65%)14 (54%)10 (38%)0.280.660.820.060.0060.230.0030.0080.0775 (54%)67 (49%)49 (36%)46 (33%)29 (21%)39 (28%)54 (39%)42 (30%)33 (24%)Патологическое течение родов: затяжные стремительные роды путем кесарева сечения32 (29%)5 (4%)6 (5%)21 (19%)17 (65%)9 (35%)4 (15%)5 (19%)0.001<0.00010.09149 (36%)14 (10%)10 (7%)26 (19%)Патология периода новорожденности: асфиксия недоношенность искусственное вскармливание ППЦНС44 (39%)12 (11%)13 (12%)35 (31%)46 (41%)9 (35%)5 (19%)15 (58%)19 (73%)12 (46%)0.820.32<0.0001<0.0010.6653 (38%)17 (12%)28 (20%)54 (39%)58 (42%)Перенесенные заболевания: патология ЦНС патология ССС патология МВС патология ЖКТ эндокринная патология аллергопатология ОРЗ,в т.ч.
фаринготонзиллит ГВИ,в т.ч. инфекционный мононуклеоз25 (22%)15 (13%)8 (7%)17 (15%)7 (6%)24 (21%)45 (40%)10 (9%)43 (38%)12 (11%)5 (19%)12 (46%)4 (15%)15 (58%)1 (4%)13 (50%)19 (73%)11 (42%)10 (38%)4 (15%)1<0.0010.24<0.000110.0060.004<0.00110.530 (22%)27 (20%)12 (9%)32 (23%)8 (6%)37 (27%)64 (46%)21 (15%)53 (38%)16 (12%)Отягощенный семейный анамнез: аллергопатология герпесвирусная инфекция вредные привычки63 (56%)25 (22%)17 (15%)46 (41%)18 (69%)13 (50%)13 (50%)12 (46%)0.270.007<0.0010.6781 (59%)38 (28%)30 (22%)58 (42%)112 (81%)26 (19%)Анамнестические данныеВСЕГОабс. (%)138 (100%)Сопоставление анамнестических данных пациентов с учетом тяжестиЭБВИАсБ (таблица 3.1) выявило у матерей детей больных тяжелой формойболее высокую частоту инфекционной патологии периода беременности53(65%), в том числе острые респираторные заболевания (54%).
Изнеинфекционной патологии беременности достоверные различия отмечалипо частоте встречаемости фетоплацентарной недостаточности, которуюрегистрировали у 16% больных среднетяжелой формой и 42% пациентов стяжелой формой ЭБВИ АсБ (p<0,05). У матерей пациентов с тяжелой формойпатологическое течение родов встречали чаще, чем со среднетяжелойформой (в 65% и 29% соответственно; p<0,05). Затяжные роды чаще имелиместо при тяжелой форме (35%), чем при среднетяжелой (4%) (p<0,05). Впостнатальном периоде при тяжелой форме чаще выявляли недоношенность(58%), искусственное вскармливание (73%)(p<0,05). При среднетяжелойформе данные факторы риска констатировали в 12% и 31% больныхсоответственно.В постнатальном периоде при тяжелой форме значительно чащевыявляли сведения о перенесенных ОРЗ, в том числе тонзиллофарингите – у73% и 42% больных против 40% и 9% пациентов при среднетяжелой форме(p<0,05).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
