Диссертация (1139664), страница 19
Текст из файла (страница 19)
При осмотре полиморфные высыпания накоже, трещины, сухость кожи, кожный зуд отмечали девять человек (29,1±8,2%).Два человека (6,5±4,4%) жаловались на общую слабость, головокружение,утомляемость. Нередко регистрировалось несколько синдромов у одного и тогоже пациента [56, 103, 104, 105].Только три пациента (9,7±5,3%), которые выделяли бластоцист, никакихжалоб не предъявляли. Именно этих лиц можно с полным основанием считатьистинными бессимптомными носителя бластоцист.При сборе анамнеза у выявленных нами выделителей бластоцист – 80% лицотмечали регулярное употребление некипяченой воды.
Из всех пациентов, укоторых выделили бластоцист, 19 человек (61,3±8,7%) отмечали склонность кчастому кашицеобразному (2-3 раза в день) или неустойчивому (чередованиезапоров с поносами) стулу. Жалоб на жидкий стул ни у одного пациента не было[56, 103, 104, 105].При сравнении способов детекции бластоцист в кале микроскопическимметодом и ПЦР при использовании праймеров Bh1 совпадение положительныхрезультатов отмечено в 88,8% – 32 положительные пробы в ПЦР с праймером Bh1117среди 36 положительных проб, подтвержденных микроскопически; и 94,4% прииспользовании праймеров Bh2 – 34 положительные пробы в ПЦР с праймеромBh2 среди 36 положительных проб, подтвержденных микроскопически) (таблица5.6.3.).Таблица 5.6.3Сравнение эффективности различных наборов праймеров длядиагностики бластоцистоза у больныхРезультатыРезультаты ПЦР,Результаты ПЦР, применениеобследования 77 применение праймеров Bh1праймеров Bh2пациентовмикроскопическположительные отрицательные положительныеотрицательныеим методомПоложительные,32n=36 (100%)88,8% 411,2%3494,4%25,6%Отрицательные,n=41 (100%)37,3%92,7%921,9%3278,1%таблицыследует,Из38чтоприисследованиимикроскопическиотрицательных проб методом ПЦР с использованием праймеров Bh1 у 3пациентов (7,3%) был получен положительный результат.
При использованиипраймеров Bh2 в группе пациентов с микроскопически отрицательными результатами,амплификационный метод позволил обнаружить нуклеотидные последовательностиДНК бластоцист в 21,9% случаев (9 пациентов). При этом следует отметить, что всеположительные результаты, полученные с использованием праймеров Bh1 приисследовании микроскопически отрицательных проб, были также положительными припроведении ПЦР с праймерами Bh2 [56, 103, 104, 105].Полученные нами данные свидетельствуют о высокой степени совпадениярезультатов метода ПЦР с использованием праймеров Bh1 и Bh2 и микроскопическойиндикации, что свидетельствует о высокой чувствительности идентификации ДНКбластоцист в пробах кала.Отрицательные результаты ПЦР в пробах с заведомым содержаниембластоцист, полученные в четырех пробах (11,2%) при использовании праймеров118Bh1 и в двух пробах (5,6%) при использовании праймеров Bh2, возможнообусловленытехническимиошибкамивметодикепостановкиреакции,результатом чего, вероятнее всего, явилось попадание в рабочий растворингибирующихисследованийпримесей.Несмотрядемонстрируют,чтонадваэто,методарезультаты–проведенныхмикроскопическийимолекулярно-биологический, при комплексном использовании увеличиваютвыявляемость бластоцист, то есть повышают эффективность диагностики этогопротозооза.Более высокая «пропускная» способность метода ДНК-диагностики делаетего предпочтительным при массовых обследованиях различных контингентовнаселения на наличие возбудителей паразитарных болезней – патогеннныхпростейших и гельминтов.119Глава 6.
ВОЗМОЖНОСТИ ПРИМЕНЕНИЯ МОЛЕКУЛЯРНЫХ МЕТОДОВВ СИСТЕМЕ ЭПИДЕМИОЛОГИЧЕСКОГО НАДЗОРА ЗАПАРАЗИТОЗАМИКакпоказалипрактическиеиспытаниясозданныхнамиПЦРдиагностикумов применение молекулярно-биологических методов в эпиднадзореза паразитарными болезнями возможно при работе в стационарных условиях для: рутинной диагностики паразитарных болезней, например, при массовыхобследованиях, или в сложных для традиционных методов диагностики случаях оперативного определения степени контаминации окружающей средыпаразитарными объектами патогенными для человека и оценки уровнябиологической опасности этих объектов определенияналичиялекарственнойустойчивостипаразитовивозможности выбора оптимальной тактики лечения (сохранение возбудителя нафонестандартнойэтиотропнойтерапиислужитпризнакомпоявлениярезистентности патогена к используемому лекарственному препарату) верификации изменения ареалов паразитарных болезней, более широкоераспространение которых, можно предполагать на основании результатовизучения изменения климата, полученных современными компьютернымикартографическими методами – географическими информационными системами(ГИС)Расширение спектра диагностических методов за счет увеличения долиПЦР в рутинной диагностике паразитарных болезней позволяет оптимизироватьлабораторнуюдиагностику,улучшитьдифференциальнуюдиагностикувсложных случаях и при микст-инфекциях/инвазиях, а также снизить трудозатратыпри массовых обследованиях.
Это достигается за счет более высокой посравнению с другими методами чувствительностью, специфичностью и болеенизкой зависимостью от квалификации персонала, то есть от так называемого«человеческого фактора».120Быстрое обнаружение присутствия маркеров лекарственной устойчивостималярийных паразитов у больного молекулярными методами позволяет сократитьчисло смертельных случаев от этой инфекции за счет оперативного изменениятактики лечения.
Это особенно важно в условиях выявления исключительнозавозных случаев потенциально летальной тропической малярии на территорииРоссийской Федерации.Другойважнойсферойиспользованиямолекулярно-биологическойиндикации и идентификации в области диагностики малярии является раннееобнаружение у больных возбудителей трехдневной малярии типа Чессон. Этимштаммам P.vivax свойственна продукция большого числа ближних рецидивов иотносительно меньшая податливость традиционной противомалярийной терапии,чтотребуеткорректировкистандартныхпротоколовспецифическойпротивомалярийной терапии у таких больных.Выявление завозных больных трехдневной малярии типа Чессон идоказательство эпидемиологической роли штаммов типа Чессон в развитии у нихмалярийной инфекции позволит своевременно скорректировать тактику лечениятаких пациентов и сократить число неизбежных повторных обращений заквалифицированной медицинской помощью.Значительныевозможностипредставляютсяприкомбинированиимолекулярных методов с методами медицинской географии.
При наложенииданных, полученных с помощью молекулярно-паразитологических методов нацифровые тематические карты ГИС можно отслеживать изменения ареаловраспространения различных видов и штаммов возбудителей паразитарныхболезней, а также их переносчиков. Особое значение это имеет при мониторингераспространения паразитарных и тропических заболеваний на новые территории,какследствиесоответствующихклиматическихизменений.Точностьиадекватность компьютерных карт ареалов паразитарных болезней и ихпереносчиков радикально увеличивается, если для их построения использоватьданные, подтвержденные молекулярно-биологическими методами.121Применение ПЦР при амебиазе не ограничивается исследованием тканей ижидкостей организма. Перспективным является использование ПЦР длядифференциации амебных ДНК, выявляемых при исследовании фекалий лиц,выделяющих амебные трофозоиты и/или цисты E.histolytica, E.dispar иE.moshkovskii,различитькоторыемикроскопически(копроскопически)невозможно.6.1.
Мобильная паразитологическая лабораторияВ настоящее время ПЦР-диагностика – это удел крупных лечебнопрофилактическихучрежденийсистемыМинистерстваздравоохраненияРоссийской Федерации, некоторых частных лечебных центров и учрежденийсистемы Роспротребнадзора. На периферии в первичном звене здравоохраненияпока не существует материальных и кадровых ресурсов для рутинногоиспользования возможностей ПЦР-диагностики.В некоторых ситуациях, особенно при возникновении эпидемическихосложнений, применение ПЦР может стать критической технологией воперативном установлении этиологической причины эпидемической вспышки инепосредственном экстренном принятии оптимального управленческого решенияпо купированию эпидемического осложнения и не допущению дальнейшегораспространения заболеваемости и увеличения числа больных.Экономически обоснованным решением для работы в условиях отсутствиястационарных ПЦР-лабораторий в отдаленных районах нашей страны, можетстать разработка и создание мобильных ПЦР лабораторий, оснащенныхстандартным набором апробированного оборудования, смонтированного на базедоступных,выпускаемыхпромышленностьюпередвижныхплатформнаколесном или гусеничном ходу.Указанный подход способен обеспечить повышение эффективностиэпидемиологическоговозможностиоргановнадзораизапаразитарнымиучрежденийболезнямиРоспотребнадзораииукрепитьМинистерстваздравоохранения России в области борьбы с паразитарной патологией на основе122повсеместного использования новых информационных телекоммуникационныхтехнологий и инновационных диагностических систем.В соответствии с этими задачами нами была создана и обоснована рабочаяконцепция мобильной ПЦР лаборатории для целей усиления профилактических ипротивоэпидемическихмероприятийпосокращениюсоциальногоиэкономического ущерба от массовых и социально значимых паразитозов.
Вдальнейшем в содружестве и кооперации со специалистами ГАОУ ВПО«Московский физико-технический институт» (МФТИ) была разработана рабочаяконструкторская документация мобильной паразитологической лаборатории набазе автобуса ПАЗ, серийно выпускающегося ОАО «Павловский автобус» [55].Также был получен патент Российской Федерации № 2568516 «Мобильнаяпаразитологическая лаборатория» (Приложение 2).В предлагаемом нами совместно с инженерным корпусом МФТИ научноконструкторскимоснащаетсярешениеммобильнаяисчерпывающимбиологического,наборомэнтомологическогоипаразитологическаялабораториясовременногомолекулярно-санитарно-паразитологическогооборудования, преимущественно отечественного производства.
Указанный наборпризванобеспечитьнеобходимоговозможностьнаборакомплексногоэкстренныхвыполнениялабораторныхиоптимальнодиагностическихисследований, необходимых для принятия оперативных управленческих решенийпокупированиюнеблагоприятнойэпидемическойситуациинаосновеполученных достоверных данных об этиологической причине вспышки иосновныхзадействованных факторах передачи возбудителяпаразитарнойболезни, приведшей к возникновению эпидемической вспышки.Влабораториипредусмотренырабочиеместамикроскописта,молекулярного паразитолога и энтомолога (рисунок 6.1.1.). Также лабораториябудет оснащена компьютерным оборудованием с подключением к системеспутниковой навигации GPS/ГЛОНАСС, что обеспечит оптимизацию сбора,хранения, обработки, доступа, отображения и распространения пространственнокоординированных данных, которые будут использоваться для оперативной связи123с федеральными и региональными центрами индикации и идентификациипатогенов, проведения обощенного компьютерного анализа и решения научных иприкладных задач, мониторинга, поддержания санитарно-эпидемиологическогоблагополучия и оптимизации профилактики населения по социально значимымпаразитозам в интересах обеспечения биологической безопасности нашей страны.Конструктивно мобильная лаборатория состоит из двух отсеков: кабинаводителя и лабораторный (рабочий) отсек, - между которыми располагаетсяперегородка (Приложение 1).
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
