Диссертация (1139664), страница 22
Текст из файла (страница 22)
Е.И. Марциновского в отношении патогенногопростейшегоBlastocystishominis,донедавнеговремени,считавшегосянепатогенным. В этих исследованиях было показано, что B.hominis не толькоассоциируется с патологией желудочно-кишечного тракта, но и может вызыватьгенерализованную патологию у иммунокомпрометированных субьектов. Во всехтаких случаях диагноз бластоцистоза ставился на основании микроскопических иПЦР исследований.Для этого нами были выбраны и синтезированы праймеры длядиагностикиB.hominiss.Подобраныамплификации для этих праймеров.наиболееэффективныережимы138Из 36 микросокпически подтвержденных лиц, выделявших бластоцист, у32 наличие бластоцист в фекалиях было подтверждено в ПЦР с оригинальнымнабром праймеров Bh1 и у 34 – с оригинальным набором праймеров Bh2.Полученные результаты свидетельствуют о высокой степени совпадениярезультатов в ПЦР с обоими использованными праймерами и классическихмикроскопических исследованиях.ИспользованиесозданноговНИИМПиТМПЦР-диагностикумабластоцистоза доказало свою эффективность не только в диагностике больных, нои в процессе обследования декретированных контингентов.
Выделителибластоцист составили около 9,2% среди 337 планово обследованных лиц,проходивших регулярный профилактический осмотр и обследование на наличиевозбудителей кишечных инфекций («декретированные контингенты»). Среди лиц,выделяющихбластоцисты,достоверночащевыявляласьсопутствующаякишечная патология, что можно расценить, как проявление патогенностибластоцист или повышенный риск инвазирования этими паразитами на фонехроническихзаболеванийжелудочно-кишечноготракта.Толькоутрехвыделителей бластоцист жалобы на состояние здоровья отсутствовали.НаиболеевысокиепоказателиинфицированностиB.hominissбылиустановлены при хроническом холецистите – 1 6,1±6,6%, при бронхиальной астме– 12,9±6%, что позволяет рассматривать данных простейших как потенциальныйэтиопатогенетический ко-фактор развития этих заболеваний [105].Не всё так однозначно оказалось с ПЦР-диагностикой такого массового исоциально значимого паразитоза, как токсоплазмоз.
В настоящее время в Россиивыпускаетсянесколькокоммерческихтест-системдляПЦР-диагностикитоксоплазмоза. В качестве материала для исследования наставления к этим тестсистемам предлагают исследовать кровь, амниотическую жидкость и слезнуюжидкость.Токсоплазмы крайне редко присутствуют в кровеносной системе даже впериод активных клинических проявлений. Тем более паразита нет в крови вовремя латентной стадии бессимптомного токсоплазмоза. Поэтому ни у одной из139150 обследованных нами женщин с серологически верифицированным диагнозомтоксоплазмоз в пробах крови не было обнаружено фрагментов генома Toxoplasmagondii с помощью реакции ПЦР. 48 исследований было выполнено с помощьюПЦР в реальном времени [204].Широкиеоткрываютсяперспективыприпроведенииприменениямассовыхмолекулярныхобследованийметодовнаселениядляустонавления истинных уровней пораженности различных контингентовпаразитозами [56].
Для этих целей более целесообразным представлялосьиспользованиенемоно-ПЦР-диагностикумов,акомплексныхсистем,позволяющих одновременно осуществлять ПЦР-диагностику важнейших,наиболее массовых для нашей страны кишечных протозоозов (лямблиоз,амебиаз, бластоцистоз, криптоспоридиоз).В процессе создания комплексной системы ПЦР-диагностики былсоставлен набор оптимальных праймеров к четырем основным возбудителямкишечныхпротозоозоввсочетаниисвыпускаемымотечественноймикробиологической промышленностью набором реагентов для ПЦР (PCRcore). Следует отметить, что представленная комплексная система можетиспользоваться в постановке классической ПЦР и легко адаптируется дляПЦР в реальном времени.ПрактическаяосуществленавапробациясериисозданныхполевыхПЦР-диагностикумовэпидемиологическихбылаисследований,выполненных в разных очагах паразитарных болезней.Энтомологический мониторинг зараженности комаров-переносчиковдирофиляриями проводился в 2006-2011 гг. в ЦАО России.
Зараженностькомаров разных родов D.repens различалась незначительно – от 1,9% у Aedesдо 3,3% у Anopheles. Для D.immitis эти показатели составили – от 0,8% уAedes, до 1,3% у Culex. Этот патоген был обнаружен только у одной самкиAnophelesза все время наблюдений.Изучение пораженности населения малярией проводилось в 2006 г. вдвух городах и трех сельских населенных пунктах Республики Кыргызстан.
В140результате обследования 60 больных с клиническими признаками малярии,диагноз был верифицирован в ПЦР у всех. Одновременное обследование 157здоровых членов семей больных малярией ни в одном случаев не выявилоприсутствия фрагментов ДНК P.vivax в крови здоровых лиц.Изучениемолекулярно-генетическойструктурыпопуляцийвозбудителей трехдневной малярии в разных очагах Кыргызстана показало,что все возбудители связаны с периодически происходящим завозом штаммовиз соседних Республик Таджикистана и Узбекистана.
На территорииКыргызстана завозные штаммы циркулируют непродолжительное время, что взначительной степени определяет отсутствие укоренения инфекции в очагах.С помощью ПЦР была проведена необходимая для Таджикистанапроверка достоверности отсутствия местной передачи трехдневной малярии.Исследования были проведены в 2012-2014 гг. на территории четырех ранееэндемичных по малярии районов Республики Таджикистан.
Кроме ПЦРдиагностики одновременно использовали диагностические экспресс-тесты,предоставленные ВОЗ и микроскопию препаратов крови. Всего былообследовано свыше 2000 человек. ПЦР-диагностикой было охвачено – 750. Нив одном исследовании не было обнаружено присутствие возбудителеймалярии. Указанные исследования стали достаточным основанием дляподтвержденияэлиминациималяриинатерриторииТаджикистанавсоответствии с требованиями ВОЗ.Скриниг населения в очагах висцерального лейшманиоза в Папскомрайоне Узбекистана (2007-2009 гг) впервые показал наличие бессимптомныхноситетелй Leishmania infantum среди детей – жителей очагов висцеральноголейшманиоза в Узбекистане. Ранее не только в Узбекистане, но и в другихэндемичных по висцеральному лейшманиозу странах СНГ не было известно оналичии бессимптомных носителей L.infantum.
В дополнение к обнаружениюбессимптомныхносителейбылодоказано,чтовозбудительспособендлительно персистировать в организме переболевших – от одного до десяти141лет – даже после проведения полноценного курса специфической этиотропнойтерапии глюкантимом.Проведенныйкомплексразноплановыхэкспериментальныхиэпидемиологических исследований обеспечил создание широкого спектраактуальных ПЦР-диагностикумов для индикации и идентификации геномов ифрагментов геномов патогенных простейших и гельминтов как в клиническомматериале,такпаразитарныхиприболезнейпроведениивразныхполевыхисследованийклимато-географическихвочагахпровинцияхумеренного и субтропического климата.СозданныевозбудителейПЦР-диагностикумытрансмиссивныхпозволяютпаразитарныхвыявлятьболезнейналичие(малярия,лейшманиозы, дирофиляриозы) и паразитозов нетрансмиссивной природы(лямблиоз, амебиаз бластоцистоз, криптоспоридиоз).Помимо клинической лабораторной работы очень перспективнымпредставляется использование молекулярных методов в эпидемиологическихисследованиях.
Апробация ПЦР-диагностикумов в очагах трансмиссивныхпаразитозов позволила получить важные для науки и практики эпиднадзораданные о сроках функционирования очагов и достоверности отсутствияпередачи возбудителей на конкретных территориях.Изучениюиопределениюреальнойпораженностинаселениякишечными протозоозами будет способствовать созданная комплекснаясистема выявления массовых кишечных протозоозов (лямблиоз, амебиаз,бластоцистоз, криптоспоридиоз).Такимобразом,инструментарийактуальныхметодологиюудалосьне(ПЦР-диагностикумы)паразитозов,номолекулярногопаразитарными болезнями.толькосоздатьдляматериальномониторингаразноообразныйвыявлениянаполнитьзавозбудителейразработаннуюсоциальнозначимыми142ВЫВОДЫ1. В рамках концептуально нового понятия «молекулярная паразитология»разработанаметодологияпаразитарнымимониторингаболезняминаосновезасоциальноиспользованиязначимымимолекулярно-биологических методов.2. Показана возможность индикации и идентификации фрагментов геномапаразитарных патогенов на только в тканях и жидкостях организма больного,но в фекальных массах и организме членистоногих – переносчиков.3.
Подобраныуникальныеоптимальныепараметрыпраймерыивыполненияэкспериментальноопределенымолекулярно-биологическойдиагностики как трансмиссивных: малярия, лейшманиозы, дирофиляриозы,так и нетрансмиссивных – лямблиоз, амебиаз, бластоцистоз, криптоспоридиоз– паразитозов.4. Возможность применения молекулярных методов диагностики паразитозовлимитируется наличием генетических фрагментов патогена в доступном дляисследования биологическом материале пациента. Поэтому малоэффективнойоказалась ПЦР-диагностика токсоплазмоза в образцах периферической крови.5. Сопоставление эффективности ПЦР-диагностики бластоцистоза с «золотымстандартом» - микроскопическим определением патогена показало совпадениев 88,8% с набором праймеров Bh1 и 94,1% - с набором Bh2.6. Для проведения массового скрининга населения на инвазированностькишечнымипротозоозамисозданакомплекснаяПЦР-системадляодновременного выявления в одной пробе кала фрагментов геномавозбудителей наиболее массовых и социально значимых протозоозов –лямблиоза, амебиаза, бластоцистоза и криптоспоридиоза.7.
С помощью ПЦР-диагностики удалось доказать формирование в эндемичныхпо висцеральному лейшманиозу очагах детей – бессимптомных носителей143Leishmania infantum.8. Показано, что в очагах висцерального лейшманиоза в Узбекистане ворганизме лиц, переболевших этой инфекцией, возможно персистированиевозбудителя на протяжении 1-10 лет после выздоровления на фонепроведенной специфической этиотропной терапии глюкантимом.9.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
