Диссертация (1139658), страница 2
Текст из файла (страница 2)
Провестианализмедико-биологическихисоциальныхфакторов,определяющих риск развития ЛТИ и ТБ у детей.2. Оценить клинические факторы прогрессирования туберкулезной инфекции(от латентной к активной) у детей.3. Определить иммунный статус детей с ЛТИ и больных ТБ.4.
Изучить распределение частот аллелей и генотипов полиморфизмов геновIFNG (T-1488C) и МСР1 (С-2508Т), а также их связь с прогрессированиемтуберкулезной инфекции у детей.5. Выявить ассоциацию полиморфизма гена IFNG (T-1488C) с уровнемпродукции специфического ИФН- при прогрессировании туберкулезнойинфекции у детей.86. Определить значимость специфических белков (ЕSAT6-CFP10, ESAT6, 85а,CFP32B, Rv2660c) при развитии туберкулезной инфекции у детей.7. Установить информативность показателей уровня индуцированного ИФН-специфическими белками (ППД-Л, ЕSAT6-CFP10, ESAT6, 85а, CFP32B,Rv2660c) для диагностики и дифференциальной диагностики туберкулезнойинфекции у детей.8.
Разработать и обосновать алгоритм персонифицированной диагностикитуберкулезной инфекции у детей.Научная новизнаСтратифицированы и выделены дополнительные факторы, которые можнорассматривать в качестве предикторов (прогностических факторов) ЛТИ и ТБ удетей.Выявлены новые механизмы в патогенезе туберкулеза, обусловленныегенетическими мутациями и особенностями специфического иммунного ответа,определены признаки прогрессирования туберкулезной инфекции у детей.Проведенкомплексныйанализвзаимосвязиклинических,иммунологических показателей и генетических изменений при ТБ у детей.Впервые установлено, что маркером высокого риска прогрессированиятуберкулезной инфекции у детей является гетерозиготный генотип полиморфноговариантаT-1488CгенетическогогенапоказателяIFNG.рискаПриэтомвкачествепрогрессированияидополнительноготяжелоготечениязаболевания у детей впервые установлен гетерозиготный генотип полиморфизмаС-2508Т гена МСР1.
Зарегистрирована база данных "Молекулярно-генетическиепредикторы туберкулезной инфекции у детей" (2017620361 RU).Определены специфические белки – маркеры (ЕSAT6-CFP10, ЕSAT6, 85а,Rv2660c и CFP32B) латентной и активной туберкулезной инфекции у детей.Разработан способ оценки активности туберкулезной инфекции у детей иподростков (2586279 RU).9Наоснованиивсестороннейоценкианамнестических,клинических,молекулярно-генетических признаков и уровня специфического иммунногоответа в зависимости от стадии туберкулезной инфекции у детей разработаны двепрограммы для ЭВМ по выявлению и ранней диагностике туберкулезнойинфекции у детей с определением риска ее прогрессирования (2017610653 RU и2017610590 RU).
Разработан новый алгоритм персонифицированной диагностикитуберкулезной инфекцииу детей с высоким уровнем диагностическойэффективности.Теоретическая и практическая значимость работыРезультаты, полученные в ходе исследования, расширяют представление оЛТИ у детей и участие генов IFNG и МСР1 в ее прогрессировании. Проведенныеисследования позволили установить специфические антигены, ответственные зараннюю стадию туберкулезной инфекции. Определена связь специфическогоиммунного ответа, клинического состояния и генотипа полиморфного вариантагена IFNG, что значительно расширяет представление об иммунопатогенезе ТБ.Данные о наличии гетерозиготного генотипа полиморфного варианта генаIFNG (T-1488C) могут быть использованы в качестве дополнительного критерияприформированиигруппвысокогорискапрогрессированияЛТИ,агетерозиготного генотипа полиморфного варианта гена МСР1 (С-2508Т) –прогрессирования ТБ, в первую очередь у детей, имеющих социальные факторыриска. Знания о наличии или отсутствии значимого генотипа полиморфизма генаIFNG могут быть использованы для персонифицированной ранней диагностикитуберкулезной инфекции у детей.Выделенные и стратифицированные значимые клинические факторы рискаразвития ЛТИ и ТБ позволят определить детей группы высокого риска повозникновению ЛТИ и ее прогрессированию.Выявленные специфические иммунологические критерии, связанные сразличными клиническими состояниями организма (от отсутствия туберкулезной10инфекции и ПВА до развития активного ТБ), позволят дифференцироватьлатентную и активную туберкулезную инфекции.Разработанныйалгоритм,порезультатамкомплекснойоценкианамнестических, клинических, иммунологических и молекулярно-генетическихданных, позволяет: на педиатрическом этапе выявить группу с высоким рискомЛТИ, на фтизиатрическом – провести дифференциальную диагностику латентнойи активной инфекции, а также определить риски прогрессирования ЛТИ у детей,чтовсвоюочередьдаетвозможностьсвоевременноорганизоватьпринципамдоказательнойпрофилактические мероприятия.Методология и методы исследованияНастоящаяработавыполненасогласномедицины.
Для выполнения диссертационного исследования применялисьметоды, основанные на принципах общенаучной и частнонаучной методологии,общелогические (анализ и синтез) и эмпирические (изучение и анализ научнойлитературы, наблюдение, исследование), а также статистические методы,соответствующиепоперечное,цели изадачам работы.
Исследование проспективное,соответствуетосновнымметодологическимпринципам(комплексность, целостность, объективность и достоверность). В работеиспользованы современные специальные методы исследования: выделение ДНКизцельнойкрови,аллель-специфическаяПЦРдлягенотипирования,количественное определение ИФН- с использованием ИФА.
Работа являетсясамостоятельнымфедеральногофрагментомплановойнаучно-исследовательскойгосударственного бюджетногообразовательногоработыучреждениявысшего образования «Омский государственный медицинский университетМинистерства здравоохранения Российской Федерации» (ОмГМУ) (№ гос.регистрацииАААА-А15-115123110105-5«Разработкановыхпрограммитехнологий снижения потерь здоровья детского населения»).
Базой проведениянаучного исследования являлся ОмГМУ, кафедра педиатрии ДПО. Клиническаячасть работы организована на базе КУЗ ОО «Специализированная детская11туберкулезная клиническая больница» (главный врач – А. Л. Ванюков), КУЗ ОО«Клиническийпротивотуберкулезныйдиспансер»(главныйврач–М. П. Татаринцева), БУЗ ОО «Городская детская клиническая больница № 2 им.В.
П. Бисяриной» (главный врач – А. П. Пилипенко) г. Омска. Иммунологическиеи молекулярно-генетические исследования проведены на базе ФБУН «Омскийнаучно-исследовательскийРоспотребнадзораинститут(директор–природно-очаговыхН. В. Рудаков)инфекций»(соглашениеонаучно-исследовательской работе от 19.06.2014).
На проведение исследований полученоразрешение этического комитета ОмГМУ. Для участия детей в исследовании отродителей или их законных представителей было получено добровольноеинформированное согласие.Основные положения, выносимые на защиту:1. Основными прогностическими факторами риска для развития ЛТИ явилисьмедико-биологические, для ТБ – социальные.
Клинические проявлениятуберкулезнойинфекцииудетейнепретерпелисущественногопатоморфоза в современных условиях. Иммунологический ответ при ЛТИхарактеризовался активацией Т-клеток и повышением спонтанного уровняИФН-γ, а при развитии заболевания – его недостаточной продукцией.2. У детей с ЛТИ гомозиготный генотип по аллелю Т полиморфного вариантагена IFNG (T-1488C) встречался чаще, чем у больных туберкулезом.Гетерозиготный генотип полиморфизма гена IFNG (Т-1488C) связан сриском развития заболевания, его прогрессированием и ассоциирован соснижением выраженности иммунного ответа против отдельных МБТантигенов (ППД-Л, ЕSAT6-CFP10, ESAT6, 85а, CFP32B, Rv2660c).3.
Установлено, что белки ЕSAT6 и Rv2660c являются маркерами раннейстадии развития ЛТИ, а гибридный белок ЕSAT6-CFP10 – активнойтуберкулезнойзаболевания.инфекции,преимущественнонастадииразвития124. Установлен высокий уровень диагностической эффективности (95,1%)разработанноготуберкулезной«Алгоритмаинфекцииуперсонифицированнойдетей»сдиагностикииспользованиемкомплексаклинических, иммунологических и молекулярно-генетических критериев.Степень достоверности и апробация результатов исследованияСтепень достоверности результатов определяется соответствием дизайнаисследования критериям доказательной медицины, достаточным объемомнаблюдений, репрезентативностью комплексного обследования пациентов сиспользованием современных лабораторных методов исследования и обработкиполученных данных в соответствии с поставленными задачами, методамистатистического анализа с использованием программных пакетов анализаOpenEpi версия 3, Statistica 6,0 и StatPlusPro 5.9.8.
Сформулированные задачисоответствуют цели исследования. Результаты исследования, положения, выводыи практические рекомендации аргументированы фактическим материалом илогически вытекают из анализа полученных данных. Размер выборки пациентов(310 детей), достаточный для получения доказательных данных, был рассчитан впрограмме OpenEpi версия 3, исходя из генеральной совокупности детей Омскойобласти на 2013 г. (378900) и отчетных форм по туберкулинодиагностике.Основные положения работы были представлены и доложены на различныхнаучных форумах: II Всероссийской научно-практической конференции смеждународным участием «Актуальные вопросы профилактики, диагностики илечения туберкулеза у детей и подростков» (Москва, 2014); VIII Российскомфоруме с международным участием «Здоровье детей: профилактика и терапиясоциально-значимыхНациональнойзаболеваний.ассоциацииСанкт-Петербург-2014»;фтизиатров(Санкт-Петербург,3-мКонгрессе2014);XIIIМеждународном конгрессе «Современные проблемы иммунологии, аллергологиии иммунофармакологии» (Москва, 2015); III Всероссийской научно-практическойконференции с международным участием «Актуальные вопросы профилактики,диагностики и лечения туберкулеза у детей и подростков» (Москва, 2015); VI13Всероссийской научно-практическая конференции с международным участием«Актуальные вопросы внутренней патологии.
Дисплазия соединительной ткани»(Омск,2015);IVВсероссийскойнаучно-практическойконференциисмеждународным участием «Актуальные вопросы профилактики, диагностики илечения туберкулеза у детей и подростков» (Ялта, 2016); II Съезде врачей общейпрактики (семейных врачей) Сибирского федерального округа (Омск, 2016); VВсероссийской научно-практической конференции с международным участием«Актуальные вопросы профилактики, диагностики и лечения туберкулеза у детейи подростков» (Казань, 2017); 6-м Конгрессе Национальной ассоциациифтизиатров (Санкт-Петербург, 2017); VI Всероссийской научно-практическойконференции с международным участием «Актуальные вопросы профилактики,диагностики и лечения туберкулеза у детей и подростков» (Сочи, 2018).Личный вклад автораАвтор осуществляла разработку общей концепции и дизайна исследования,лично проводила выполнение всех этапов работы: сбор клинического ибиологического материала, статистическую обработку данных, обобщение,интерпретацию научных результатов, обсуждение результатов исследования иформирование выводов.
В соавторстве написала и опубликовала печатные работыв журналах, рекомендованных Перечнем ВАК, в которых отражены полученныерезультаты исследования.Диссертационное исследование выполнено при поддержке Гранта РФФИ№16-16-55001/16-17«Новыевозможностипрофилактикитуберкулезакаксоциально значимого заболевания у детей» по изучению молекулярногенетических предикторов ЛТИ для совершенствования профилактическихмероприятий по ТБ у детей Омской области.ПубликацииПо теме диссертации опубликовано 36 печатных работ: 16 статей визданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ для14публикации основных научных результатов исследований, из них 3 статьи визданиях, цитируемых в международной базе данных SCOPUS; тезисы докладов –16; патент на изобретение – 1, база данных – 1, программы для ЭВМ – 2.Объем и структура диссертацииМатериал диссертации изложен на 258 страницах компьютерного текста,иллюстрирован 51 таблицами и 35 рисунками.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
