Диссертация (1139640), страница 15

Просмтор этого файла доступен только зарегистрированным пользователям. Но у нас супер быстрая регистрация: достаточно только электронной почты!

Текст из файла (страница 15)

Вязкость РЖ определяли наротационном вискозиметре DV-II+ (Brookfield, США) с использованиемспециального SS-адаптера для образцов малого объема. Значения показателявыражали в Па·с. Поверхностное натяжение определяли с помощьютензиометра JYW-200С (Китай), результат выражали в мН/м.В клинических группах использовали комплекс методов, которыйпозволял для расчета этих же показателей использовать до 0,2 мл РЖ[Novochadov V.V., Krylov P.A., 2016]. Для проведения измерений вначале изпластикового капилляра заданного внутреннего диаметра Dj = 0,8 мм подконтролем видеосъемки цифровой камерой Nikon Coolpix L830 (Япония) наградуированном фоне фиксировали процесс образования и свободногопадения двух капель биологической жидкости.

Капли принимали впластиковую мини-кювету известной массы для дальнейших измерений.Обработав данные видеорегистрации на этом этапе с помощью программWindow MoveMaker и Image Tool, находили диаметр капли Dk в моментотрыва (мм) и время образования капли (с). Из значений показателей длядвух капель брали среднее.83Находили среднюю массу капли mк, разделив на 2 величину приростамассы кюветы при измерении на торсионных весах Δm (мг). С учетомвзаимного сокращения размерностей при переводе размерностей, итоговаяформула для расчета плотности РЖ (г/мл) принимала вид:ρ = 6mк /π Dk3 ,где mк – средняя масса капли РЖ, мг;Dk – средний диаметр капли РЖ в момент отрыва, мм;Вязкость определяли расчетным сравнительным методом Пуазейля скалибровкой по глицерину. После подстановки значений для калибровки,формула расчета определения вязкости РЖ (Па·с) имела вид:η = 0,689 ρt ,где 0, 689 – коэффициент пересчета;ρ – плотность РЖ, г/мл;t – среднее время до отрыва капли, сДляизмеренияповерхностногонатяженияkиспользовалисталагмометрический метод.

Во время отрыва капли РЖ от нижнего концакапилляра ее масса уравновешивается силой поверхностного натяжения F,которая равняется произведению  на периметр зоны отрыва капли (md g =πDj σ).Дляповышенияточностикоррекции,необходимоустановитьпоправочный коэффициент k, который может быть определен какотношение известного значения  для глицерина к значению, полученному вопытной пробе микровидеометодом (он оказался равен 1,025).

Такимобразом, в соответствии с установленными значениями k и внутреннегодиаметра капилляра, окончательная формула для расчета  (мН/м) приметвид:84σ = kmкg / π Dj = 3199 mк (3).где 3199 – коэффициент пересчета;mк – средняя масса капли РЖ, мгКоэффициент трения скольжения μ был определен для всех проб РЖна горизонтальной поверхности, при фиксации максимальных показаниймикродинамометра растяжения ДЭП1-1Д-0,1Р-1 (Пэт-Вес, Санкт-Петербург,Россия) при начале движения эталонного груза массой 10 г и площадьюоснования 1 см2 в условиях контакта "стекло - стекло" при полномсмачивании исследуемой жидкостью.

Это полностью соответствовалоформуле:μ = Ff /mg = 0,01Ff ,где 0,01 – коэффициент пересчета;Ff – показания микродинамометра, НКоэффициент трения скольжения является безразмерной величиной.2.4.2. Микрокристаллизация и компьютерная кристаллографияРЖМорфологическоеисследованиефацийРЖпроводилисиспользованием метода клиновидной дегидратации [Шатохина С.Н., 2006;Мартусевич, 2010]. Пробирка с 0,5 мл РЖ помещалась в холодильник на 812 часов.

За этот отрезок времени происходило осаждение крупных частиц иформирование осадка. Затем проводили забор надосадочной жидкости вколичестве 0,02 мл при помощи полуавтоматического дозатора и наносиликаплю на предметное стекло. Каплю высушивали при температуре 20-25 oC,относительной влажности 65-70% в течение трех часов. По истечении этоговремени получали фацию РЖ, которая представляла собой высушеннуюпленку (рис. 2.3).85АБРисунок 2.3. - Микроскопия фации ротовой жидкости. А. Краевая зона,представленная преимущественно белками и полисахаридами.

Б. Центральнаязона, преставленная кристаллизованными электролитами. Ув. 10На качественном уровне морфологическое исследование слюнывключало в себя выделение наиболее типичных типов структуропостроенияв периферической и центральной зоне фации.Количественный анализ объектов был осуществлен с помощьюаппаратного компьютерного комплекса, включающего исследовательскиймикроскоп класса Цейс, цифровую камеру, компьютер с пакетом встроенныхпрограмм для визуализации. Осуществляли цифровую съемку фации подмикроскопом при увеличении 10 и сохраняли файл в JPEG-формате.Радиальную морфометрию фаций производили с помощью программы«ImageJ 1.48v» (США) с выводом результатов в формат Microsoft OfficeExcel (Microsoft, США).

Раздельно определяли интегральную яркостьпериферической и центральной зон фации в системе RGB, захватывая в86выделенную зону не менее 20% их общей реальной площади. Дляколичественного доказательства циркадианной зависимости оцифрованныеизображения фаций РЖ были использованы для расчета трех показателей:– радиальной толщины краевой зоны (R, мкм);– гомогенности краевой зоны, %; безразмерногобелково-кристаллическогокоэффициента(БКК),отражающего соотношение площадей краевой и центральной зон; коэффициента структуропостроения, как числа взаимопереходов на 1мм границы между зонами [Постнова М.В.

с соавт., 2010].2.4.3. Биохимические исследования РЖИсследования проводили на автоматическом анализаторе «SINOWABS-300» (рис. 2.4А), с помощью коммерческих наборов реактивов фирмы«DiaSys» (Германия). Определяли концентрации альбумина (г/л), ионовкальция (ммоль/л), фосфатов (ммоль/л), активности α-амилазы (мкКат/л) ищелочнойфосфатазы(мкКат/л)всоответствиисинструкциямипроизводителя.Рисунок 2.4.

- Биохимический анализатор SINOWA BS-300 (А) ипланшетный сканер Bio-Rad (Б) для исследования РЖДля количественного выявления биологически активных молекулиспользовали методику твердофазного иммуноферментного анализа (рис.2.4Б). Концентрации MMP-8 и TIMP-2 в РЖ определяли с помощью87коммерческих сертифицированных наборов производства Quantikine®, R&DSystems(США)счувствительностью0,060нг/мл и0,064нг/мл,соответственно.Для определения концентрации цитокинов использовали наборыCloud-Clone Corp.

(США). Набор High Sensitive ELISA Kit TNFa имелчувствительность 0,55 пг/мл, ELISA Kit IL-1b – 5,9 пг/мл, набор дляопределения MIP-1a – 5,7 пг/мл. Измерения проводили на автоматическомуниверсальном ридере для микропланшет Bio-Rad (iMark, Japan), всоответствии с инструкциями производителей.2.4.4. Определение основных пародонтопатогенов с помощьюПЦР-диагностикумовЗабор жидкости периимплантационной борозды производили спомощью стерильных бумажных штифтов-накопителей, далее материалпомещали в растворы для выделения ДНК с использованием наборовреагентов(производствоООО«ДНК-Технология», Москва,Россия).Детекцию основных пародонтопатогенов (A.

actinomycetemcomitans, P.gingivalis, B. forsitus, T. denticola и P. intermedia) осуществляли в одной пробеметодом Real-time ПЦР с использованием мультипраймерных наборовпроизводства ООО «Генлаб» (Москва, Россия). Использовали коммерческиеотрицательные и положительные контрольные образцы, амплификациюпроводили согласно режимам в инструкции к набору. Результаты выражаликак число копий в 1 мл и показателя обсемененности, рассчитываемого какдоля данного патогена от общей бактериальной обсемененности в процентах[Шибаева А.В., 2015].2.5.

Определение биометрических характеристик и типа рельефаокклюзионных поверхностей боковых зубовДля комплексной оценки биометрических характеристик рельефаокклюзионныхповерхностейввиделокализациихарактерных88окклюзионных контактов и функциональных осей зубов использовалиоттиски слепки, необходимые в технологии изготовления ортопедическихконструкций. Оттиски получали классическим методом, но при снятииоттиска с верхней челюсти применяли особое устройство (в нижней съёмнойчасти) для формирования протетической плоскости с ориентацией позрачковой и носоушной линиям.

В итоге получали пару диагностическихгипсовых моделей челюстей, основания цоколей которых оказывалисьпараллельными между собой, а также параллельными зрачковой иносоушной линиям. В этих моделях пространственное расположение точек,принадлежащихповерхностям зубов, а также их взаимоотношениясоответствовали их положению в лицевом черепе (рис. 2.5А).Метод окклюзографии оказался наиболее приемлемым как дляопределения биометрических характеристик и топографии окклюзионныхконтактов боковых зубов верхней и нижней челюстей в положениицентральной окклюзии непосредственно в полости рта, так и на гипсовыхмоделях.Методокклюзографиибылприменендляисследованиябиометрических характеристик и топографии окклюзионных контактовбоковых зубов верхней и нижней челюстей в положении центральнойокклюзии.

Растровое изображение окклюзограммы получали в специальноразработанном устройстве [Машков А.В., 2015.].Для этого получали обзорную окклюзограмму в полости рта пометодике А.В. Машкова и соавт. (2011), и регистрировали окклюзионныеконтакты в полости рта или на моделях (рис. 2.5Б).Растровоецифровойизображениекамеры,оценкуокклюзограммыбиометрическихполучалисхарактеристикпомощьюрельефаокклюзионных поверхностей зубов завершали определением площадейокклюзионных контактов и околоконтактных зон с помощью специально89компьютерной программы анализа окклюзограмм Occluso 2.0 (Россия,Свидетельство о государственной регистрации № 2012610639 от 10.01.2012).АБРисунок 2.5.

- Устройство для получения идентичных пар моделей челюстей(А) и внешний вид полученной с этих моделей окклюзограммы (Б)Далее последовательно подходили к определению ФОР для каждого избоковых зубов и типа ФОР пациента (рис. 2.6).На основании полученных первичных данных о площадях контактныхи околоконтактных зон каждого из боковых зубов определяли следующиефункциональные показатели.Первичные данные для каждого зуба, получаемые при анализецифрового изображения окклюзограммы, включали в себя величиныплощади контактных зон (от контакта, нулевого разобщения, до 0,25 ммразобщения, Sк), площади околоконтактных зон (разобщение в пределах от0,25 мм до 0,75 мм включительно – Sд, в пределах от 0,75 мм до 1,5 мм – Sп).Для всех этих зон были рассчитаны соответствующие периметры Pк, Pд и Pп.На основании полученных первичных данных каждого из боковых зубовопределялиэмпирически.следующиефункциональныепоказатели,обоснованные90Функциональная площадь дробления (мм2), представляющая собойплощадь оклюзионного контакта и прилегающей к нему зоны приразобщении в 0,25 мм при аппроксимации ее к усеченному конусу.Рассчитывается по формуле:ФПД=0,25 Pк+SкФункциональная площадь перетирания (мм2), представляющая собойплощадь околоконтактной зоны при разобщениях между 0,5 мм до 1,5 ммпри аппроксимации ее к усеченному конусу.

Характеристики

Список файлов диссертации