Диссертация (1139637), страница 25
Текст из файла (страница 25)
40) [128] Для инвазирования одного животного использоваливзвесь 100 - 150 метацеркариев O. felineus в 50 мл физиологического раствора.Всего было заражено 50 животных, которые содержались в типовом виварии. Врезультате падежа, а также выбраковке животных, исследованию подверглись35 особей. Контрольную группу составили 5 интактных животных, 30 вошли восновную группу (по 5 особей соответственно указанным месяцам).Группа животных, состоящая из 5 особей, подвергшаяся острому опытучерез 1 месяц после инвазии числилась под № 1, группа, подвергшаяся опытучерез 2 месяца – под № 2, через 3 месяца - № 3, через 6 - № 4, через 9 - № 5, через 12 - № 6.
Отбор животных и распределение их по группам производился послучайному принципу.Рисунок 40. Метацеркарии Opisthorchis felineus.В процессе работы с животными руководствовались требованиями правил гуманного обращения с ними на основании приказов МЗ СССР № 755 от128 12.08.77 «О мерах по дальнейшему совершенствованию организационных формработы с использованием экспериментальных животных», № 701 от 27.07.78 «Овнесении дополнений в приказ Министерства здравоохранения СССР №755 от12.08.77» [189] и «Международными рекомендациями по проведению медикобиологических исследований с использованием животных» от 1985 г и на основании Директивы Совета Европы 86/609 ЕЭС [300].
Проведение клинических иэкспериментальных исследований одобрено решением этического комитета медицинского института Сургутского государственного университета (приказ№178 от 14 апреля 2012 г).В день операции животных не кормили. После оценки поведенческой реакции и взвешивания, за 20-30 минут до операции, производили премедикацию(пропись представлена выше). До начала операции производили осмотр склер,измерение ректальной температуры, катетеризацию мочевого пузыря для оценки цвета мочи.
Все данные фиксировали в операционном журнале. Оперативноевмешательство выполняли в экспериментальной операционной с соблюдениемправил асептики под гексеналовым наркозом (3-3,5 мл 2% раствора). Передвведением гексенала из краевой ушной вены производили забор 20 мл кровидля лабораторных исследований. Для выявления признаков механической желтухи в плазме крови определяли уровень щелочной фосфатазы (ЩФ), общегобилирубина и его фракций в автоматическом биохимическом анализаторе«Olympus AU 640» (Olympus Corporation, Япония); при клиническом исследовании в качестве маркеров воспаления определяли скорость оседания эритроцитов (СОЭ) и количество форменных элементов белой крови («CELL-DYN3700», Abbott Laboratories S.A., США).После лапаротомии (рис. 41) производилась холецистэктомия, макроскопическая оценка слизистой пузыря и забор жёлчи для последующего исследования.
Холангиомано- и дебитометрию осуществляли по методике описанную вмонографии С.А. Шалимова [255]. Канюляцию магистральных жёлчных путей(в месте слияния пузырного и общего печёночного протоков) производили пластиковой трубкой для билиарного эндопротезирования (Wilson Cook) 10 Fr (3,3129 мм), внутреннюю поверхность которой предварительно обрабатывали жидкимсиликоном. С помощью аппарата Вальдмана, заполненным изотоническим раствором, измеряли исходное внутрипротоковое давление; создавая повышениедавления в системе посредством подсоединённого через тройник шприца емкостью 20 мл, отмечали давление открытия сфинктера сосочка ДПК, после чеготрехкратно (с интервалом в 1 минуту) измеряли остаточное давление в желчных протоках.
Используя эту же систему для манометрии, дебитометрию проводили дважды по 1 мин под давлением в 2,45 кПа. Вначале изучали дебит чистого изотонического раствора, а затем на его основе взвеси описторхов из расчёта до 50 паразитов на 10 мл жидкости (что примерно соответствует крайневысокой степени инвазии у людей).Рисунок 41.
Печень и жёлчный пузырь кролика.Условия дебитометрии, а именно, концентрация паразитов, давление в2,45 кПа, приближающееся к величине секреторного давления печени у людей,обусловлены стремлением создания ситуации максимально приближающейся кестественным условиям человеческого организма, чему в большой степени способствует размер внутреннего диаметра дуоденального сосочка подопытногоживотного, который приближается к таковому у человека. Несмотря на миниатюрные размеры внепечёночных жёлчных протоков кроликов, внутреннийдиаметр сосочка, как мы выяснили, составляет 2,86 ± 0,11 мм.В качестве следующего этапа эксперимента выполнялась дуоденотомия.130 После обнаружения сосочка ДПК оценивались его форма, размеры, наличиеотёка, гиперемии.
Затем сосочек с небольшим участком стенки ДПК иссекался.По окончании опыта производилась эвтаназия животного путём внутривенноговведения 20 мл 2% раствора гексенала.Измерение внутреннего диаметра сосочка осуществлялось по методике,описанной в разделе 2.1.1.С целью изучения микроскопического строения сосочка, последний нарезался в поперечном направлении. Для чего, после извлечения катетера, для восстановления естественной формы сосочка, макропрепарат в течение 10-15 миннаходился в физиологическом растворе, затем фиксировался в 10% растворенейтрального формалина и после проводки в спиртах заливался парафином.Срезы окрашивались гематоксилином и эозином и пикрофуксином по Ван Гизону на соединительную ткань.
Микроскопия и фотографирование производились в проходящем свете на видеокомплексе Nicon DXM-1200 (Nicon, Япония),для морфометрии использовалось программное обеспечение Nikon NIS-ElemetsAdvanced Research (Ver. 4.00).Пузырную желчь подвергали макро- и микроскопической оценке по следующим параметрам: цвет, прозрачность, наличие, количество и характер макровключений и осадка; микроскопию выполняли в проходящем свете на микроскопе фирмы ZEISS «Axiockop 40» (Германия), оценивали клеточный состав,наличие кристаллов, слизи, паразитов и других включений (отсутствия паразитов в желчи являлось критерием исключения животного из основной группы).С целью подтверждения влияния застоя жёлчи, в том числе на фоне описторхозного папиллита, на развитие воспалительных явлений в жёлчных путях,в частности на развитие вторичного инфицирования жёлчи, производились бактериологические исследования последней. Микрофлору изучали следующимобразом.
Из каждой порции пузырной жёлчи готовили серийные разведения скоэффициентом 10, из которых брали по 0,1 мл для посева на 5% кровянойагар, среду Эндо, желточно-солевой агар и агар Сабуро. При появлении изолированных колоний микроорганизмов производили их идентификацию с исполь-131 зованием общепринятых методов [157].Статистическую обработку проводили методами, описанными в главе 2.1.1.В таблице 17 приведены нормальные физиологические и лабораторные показатели половозрелых кроликов, используемые в нашей работе [89, 102, 239].Таблица 17Нормальные физиологические и лабораторные показатели животныхВес (кг)t (0C)СОЭ(мм/ч)2,5 – 4,338,5 – 39,51,0 – 3,0Лейкоциты Палочкояд.
Сегментояд. Эозиноф.лейк. (%) лейк. (%)(%)(×109/л)3,8 - 12,06,5 - 835 - 430-2Билирубин БилирубинЩФобщийпрямой(млмоль/л)(мкмоль/л) (мкмоль/л)3,4 – 8,50,0 – 5,119 - 1733.1.2. Гидродинамическая модель работы БСДК.3.1.2.1. Моделирование работы БСДК в условиях in vitro.Для изучения влияния величины просвета канала на его способность пропускать жидкость, содержащую плотные включения, с целью создания математической модели работы БСДК, был смоделирован принцип работы сосочка invitro. Использование искусственной модели обусловлено так же необходимостью создания критически малых размеров внутреннего диаметра канала, которые к концу эксперимента у лабораторных животных получить не удалось.С целью моделирования общего желчного протока животных использовали трубку из лабораторного стекла длиной 40 мм с внутренним диаметром 3мм.
После нагревания над горелкой на конце трубки формировали конусовидное сужение (наподобие терминального отдела общего желчного протока), сдлиной канала в 3 мм и диаметрами в 3,0, 2,5, 2,0, 1,5, 1,0 и 0,5 мм (трубка каждого диаметра изготовлялась в трёх экземплярах). Разброс значений величиндиаметров обусловлен следующими причинами: верхнее значение (3,0 мм) –соответствием общепринятому размеру диаметра сосочка, нижнее (0,5 мм) –задачей эксперимента. Изготовить трубки с пропускным сечением соответствующих среднему диаметру дуоденальным сосочкам животных (для точногосравнения количества протекавшей по ним жидкости) нам не удалось в силу ихмалых различий, составляющих сотые доли миллиметра.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
