Диссертация (1139576), страница 40
Текст из файла (страница 40)
Применение экспериментальной взвеси V+S длялеченияживотныхслигатурнымпародонтитомпродемонстрироваловозможность колонизации слизистой оболочки полости рта, что констатировалиболеечемуполовиныживотных,взятыхвэксперимент,причемколонизирующая ассоциация стабильно сохранялась в течение недели послезавершения приема пробиотической микробной взвеси животными.Первые результаты исследований Streptococcus salivarius K12 в качествекандидатного пробиотического штамма были выполнены на рубеже новоготысячелетия, когда было показано, что данный штамм продуцирует дваактивных бактерицидных фактора саливарицинA и саливарицин B,закодированные в мегаплазмиде [398, 460].Далее было установлено, что бактериоцины Streptococcus salivarius K12ингибируют рост других видов стрептококков: кариесогенных стрептококков (S.mutans, S. sobrinus), возбудителей ангины, заболеваний дыхательных путей илегких (возбудителей воспалительных заболеваний слизистой оболочки полостирта, с которыми связывают развитие галитоза — неприятного запаха изо рта (P.gingivalis, P.
intermedia, F. nucleatum, Micromonas micros, Eubacteriumsaburreum)[156,157].Этопозволилоисследователямразработатьпробиотический препарат для применения в виде геля в полости рта «Лородент»,249содержащий живые бактерии штамма Streptococcus salivarius K12. Препаратуспешноприменялсяоториноларингологами,гастроэнтерологами,стоматологами в США, Великобритании, с 2000 г. — в Новой Зеландии, а теперь— и в России.Учитывая приведенный спектр действия саливарицинов, который включаетважнейшие пародонтопатогенные виды, очевидна целесообразность примененияданного штамма в комплексном лечении пародонтита. По нашим данным, этоболее целесообразно, чем описанный в литературе ранее патент РФ наприменение лактобацилл, для которых не доказано наличие антагонистическогодействия на пародонтопатогенные виды [68].
Недостатком перечисленныхлекарственных форм является использование монокультур, которые невыдерживают конкуренции с биопленкой пародонтопатогенного типа. Поэтомув результате наших экспериментальных исследований на «крысиной модели»пародонтита было обосновано применение двух симбионтных штаммов —Streptococcus salivarius К12 и Veillonella parvula (Заявка на изобретение РФ«Пародонтальная повязка» № 2015140848 / 15(062920)).
В проведенных намиэкспериментах наблюдалась длительная персистенция данных видов вбиопленке(28исследованием,суток),чтоподтвержденнаясопровождалосьмасс-спектрометрическимснижениемколичественнойобсемененности стафило-энтерококковой ассоциации.В плане изучения патогенеза воспалительных заболеваний пародонта икоррекции существующих направлений лечения крайне важную роль играетфункциональноесостояниеиммуннойсистемыивчастноститакоймалоизученный компонент, как факторы врожденного иммунитета [15, 16,62, 63, 92, 211, 317, 389, 458].Поэтому в нашем исследовании была проведена оценка взаимосвязей такихфакторов, как лейкоциты, антимикробные пептиды — дефензины, цитокины иToll-like-рецепторы иммунокомпетентных клеток.
Новизна исследованияопределялась оценкой этих факторов в десневой жидкости, то есть внепосредственном контакте с биопленкой, формируемой в естественных250условиях полости рта.Воспалительныезаболеваниятканейпародонтаявляютсявоспалительными процессами, развивающимися после выброса нейтрофилов вответ на распространение поддесневой бактериальной биопленки [291].Предполагается, что нейтрофилы оказывают протективное действие ипредотвращают бактериальные инфекции, но они могут также оказыватьповреждающее действие на ткани пародонта. У больных ХП наблюдаетсяувеличенный выброс нейтрофилов в полость рта, с повышенной экспрессиейгенов семейства Bcl-2 и сниженной проапоптозной активностью [306]. Привыходе из кровотока в очаг воспаления у лейкоцитов меняется экспрессия генови фенотипа [148].Полиморфноядерные лейкоциты относятся к первой линии защиты противинфекций и главным источником триггерных рецепторов, экспрессированных намиелоидныхклетках(TREM-1),способныхусиливатьпродукциюпровоспалительных цитокинов и регулировать апоптоз.
Различная регуляцияTREM-1 гингипаинами P. gingivalis может являться новым механизмом, спомощью которого P. gingivalis манипулирует врожденным иммунитетоморганизма хозяина, помогая развитию хронического воспаления в тканяхпародонта [148].Пародонтит представляет важный пример повреждения тканей организмачеловека, опосредованного нейтрофилами. Нейтрофилы, премированные илистимулированныеналичиемилиперсистенциейинфекции,проявляютповышенный и экстенсивный ответ.
Это, в свою очередь, ведет к деструкциитканей, связанной с активностью нейтрофилов [124, 291, 306, 385].В нашем исследовании было показано, что среднее содержаниелейкоцитов в периферической крови у пациентов с ХП разных степеней тяжестимало отличалось друг от друга, а также от значений у практически здоровыхлюдей. Однако у больных ХГ оно было статистически достоверно значимо ниже,чем у здоровых людей, больных ХП легкой и средней степенями тяжести. Ещеменьше было содержание лейкоцитов у больных КАП.251В смывах из полости рта у здоровых людей контрольной группы в нашемисследовании содержание нейтрофилов составило 1,01·106 — 2,33·106клеток/мл, а у больных с воспалительными заболеваниями полости ртастатистически достоверно выше: при ХГ от 3,3·106 до 5,9·106 клеток/мл, ХПЛ —3,1·106 — 4,2·106 клеток/мл, ХПС — 5,0·106 — 6,3·106 клеток/мл, ХПТ 9,8·106 —14,8·106 клеток/мл, у больных КАП — 12,2·106 — 17,5·106 клеток/мл.
При этомразница в содержании Нф у больных с различной степенью тяжести пародонтитатакже была статистически достоверно значимой.Какизвестно,вещества,выделяемыенейтрофилами,частичноответственны за деструкцию тканей при пародонтите. Полученные нами данныесогласуются с результатами исследований, показавших, что содержаниенейтрофилов в смывах из полости рта отражает степень тяжести пародонтита иэффективность проводимых терапевтических мероприятий [141]. LakschevitzF.S. с соавторами (2013) [306] показали, что у больных пародонтитом посравнению со здоровыми людьми, нейтрофилы после миграции в полость ртаприобретают измененный транскриптом с повышенной экспрессией геновсемейства Bcl-2 и сниженной проапоптозной активностью, что характеризуетфенотип более долго живущих нейтрофилов. Вероятно, это влияет на тяжесть ипротяженность воспалительных реакций при заболеваниях полости рта.Учитывая то, что нейтрофилы осуществляют важные регуляторныемеханизмы, можно предположить, что повышенная чувствительность кпародонтиту у людей с врожденной дисфункцией нейтрофилов не может бытьадекватно объяснена нарушениями иммунного контроля пародонтопатогенныхбактерий, особенно когда эти состояния рефрактерны к стандартной терапиипародонтита и антибиотикам.
Поэтому необходимы системные биологическиеподходы на уровне транскриптома, протеома и метаболома нейтрофилов,которые позволят дать бóльшие представления о нейтрофилах, кроме ихспособности фагоцитировать и убивать патогены, но и участие в регуляцииответа хозяина и резолюции воспаления [300, 361].
Тем не менее окислительный252и протеолитический арсенал нейтрофилов, очевидно, связан с повреждениемтканей при пародонтите.При оценке функциональной (фагоцитарной) активности оронейтрофилову больных с воспалительными заболеваниями пародонта оказалось, чтопоказатель активности был статистически достоверно выше, чем у нейтрофиловпериферической крови. При этом наблюдалась тенденция к снижениюфагоцитарной активности лейкоцитов, наибольшая у пациентов с ХПТ.
Поданным других исследователей, которые оценивали фагоцитарную активностьсо штаммом пародонтопатогена, установлено, что через 30 минут послевзаимодействия P. gingivalis с ПМЯЛ больных хроническим (62,16 ± 19,39%) иагрессивным пародонтитом (43,26 ± 26,63%) наблюдался более активныйфагоцитоз P. gingivalis, чем у людей со здоровым пародонтом (24,43 ± 19,87%)(p < 0.05). При этом лейкоциты секретировали значительно большее количествоактивных форм кислорода, чем при отсутствии любого стимула (p < 0.05).
Такжеустановлено увеличение выделения АФК при взаимодействии лейкоцитов с A.Actinomycetemcomitans [236].Согласно патогистологическим исследованиям, Нф формируют «стенку»между соединительным эпителием и зубным налетом с патогенными микробами,которая играет роль антимикробной секреторной структуры и фагоцитарногоаппарата [417]. Зазор между нейтрофилами и бактериальной биопленкой,образующийся при хроническом воспалении, позволяет предположить, чтоуклонение бактерий от нейтрофилов является основной характеристикойпародонтита.Гиперактивация нейтрофилов также может приводить к повреждениютканей и усиливать распространенность и тяжесть воспалительных заболеванийпародонта [417].
Пониженный клиренс нейтрофилов в дальнейшем приводит кперсистенции и активации нейтрофилов в пародонтальных тканях. Дефектыклиренса апоптозных нейтрофилов могут быть хотя бы частично ассоциированыс повышенной чувствительностью к пародонтиту пожилых людей [250].253Однако уклонение бактерий от бактерицидной системы нейтрофиловвместе с задержкой их апоптоза может трансформировать их из защитников вразрушителей. Поэтому израильские ученые G. Nussbaum и L. Shapira (2011)[361] считают, что на современном этапе попытки индуцировать реакцииорганизма, супрессирующие или активирующие нейтрофилы, преждевременны.Активация нейтрофилов при инфекционных и воспалительных процессахприводит к быстрому высвобождению дефензинов — антимикробных пептидов(АМП), которые затем обнаруживают во многих жидкостях организма [191, 392].Дефензиныобладаютширокимспектромактивности,относительнойселективностью по отношению к мишени (бактериальным мембранам),стремительностью развития механизмов активности АМП и низкой частотойпоявления резистентных штаммов [286].В настоящее время ведутся исследования о возможности применения АМПдля профилактики образования биопленок и разрушения уже существующих.Так как резистентность к антибиотикам в основном связана с низкой скоростьюи низкой метаболической активностью бактерий в таких сообществах,использование АМП для ингибирования формирования биопленки может бытьпотенциально привлекательным терапевтическим подходом.Действительно, в связи с главным механизмом действия АМП,основанным на их способности к пермеабилизации и/или формированию пор вцитоплазматических мембранах, они обладают высоким потенциалом действиятакже на медленно растущие или даже не растущие бактерии [189, 190].В нашем исследовании наблюдались значительные вариации содержанияHNP 1–3 в десневой жидкости у разных людей даже из одной группы.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
