Диссертация (1139576), страница 41
Текст из файла (страница 41)
При этомчисло людей с высоким содержанием α-дефензинов увеличивалось с ростомтяжести воспалительных процессов в области зубодесневой борозды, хотясодержание HNP 1–3 в десневой жидкости у представителей контрольнойгруппы и пациентов с ХПЛ статистически достоверно не отличалось, но было в5 раз меньше, чем у больных ХПС, в 6 раз меньше, чем у больных ХПТ, а такжев 3,3 раза, чем у больных КАП. У больных ХГ уровень α-дефензинов был254статистически достоверно в 1,5 раза выше, чем у людей со здоровым пародонтом.Следует отметить, что у 20% представителей контрольной группы спомощью ПЦР была выявлена ДНК одного и только у 4% — двух видовпародонтопатогенов. Именно у них в области исследуемых нами участковзубодесневой борозды были выявлены высокие уровни содержания αдефензинов.
У людей, не имеющих пародонтопатогенов в области зубодесневойборозды, среднее содержание HNP 1–3 в десневой жидкости варьировало вдиапазоне 313–729 ng/ml, почти в 2 раза ниже, чем в целом по группе.Такая же тенденция выявлена и у больных с воспалительнымизаболеваниями полости рта. При этом наблюдались умеренно статистическидостоверные корреляции между содержанием HNP 1-3 в десневой жидкости иналичием в пародонтальных карманах P. gingivalis (R = 0,596), T. denticola (R =0,612), T. forsythia (R = 0,673), количеством видов в ассоциациях (R = 0,447) иколичеством инфицированных участков (R = 0,396).
Кроме этого, отмеченыумеренные корреляции с количеством кариозных поверхностей (R = 0,506),пародонтальным индексом PI (R = 0,397), API (R = 0,269), глубинойпародонтальных карманов (R = 0,392) и возрастом (R = 0,412). Выявленныекорреляции соответствовали распределению пациентов по группам (R = 0,447) иналичием у пациентов сопутствующих сердечно-сосудистых заболеваний (R =0,394). С содержанием α-дефензинов в десневой жидкости умеренноотрицательно коррелировали различия по полу (R = –0,269) и привычка курения(R = –0,337).В исследованиях других авторов показано, что в нейтрофилах из участковповреждения тканей пародонта также наблюдались высокие уровни αдефензинов. По-видимому, пародонтопатогены (например, P.
gingivalis, T.denticola) более резистентны к фагоцитозу и антимикробным пептидам, чемнепатогенные (Actinomyces naeslundii и Streptoccus sanguinis). Кателицидинможет нейтрализовать антинейтрофильный лейкотоксин, продуцируемый A.Actinomycetemcomitans [244].Уровни α-дефензинов в плазме периферической крови были в 4–5 раз255ниже, чем в десневой жидкости как у стоматологически здоровых людей, так и убольных с воспалительными заболеваниями тканей пародонта. Причемсодержание HNP 1–3 в плазме периферической крови больных с различнымиформами воспалительных заболеваний полости рта было статистическидостоверно выше в 2–7 раз, чем у практически здоровых людей с интактнымпародонтом.
У больных ХП уровни α-дефензинов коррелировали со степеньютяжести заболевания: ХПТ в 1,4 раза > ХПС в 2,5 раза > ХПЛ при р < 0,05.Содержание HNP 1-3 в плазме периферической крови статистическидостоверно умеренно коррелировало с тяжестью воспалительных реакций вполости рта (R = 0,494), возрастом (R = 0,472) и полом пациента (R = –0,369), атакже со стоматологическими показателями — глубиной пародонтальногокармана (R = 0,456), количеством кариозных поверхностей (R = 0,449); слабокоррелировало с индексом API (R = 0,187) и индексом КПУ (R = –0,190). Наличиев содержимом пародонтальных карманов пародонтопатогенных видов бактерий1 порядка P. gingivalis (R = 0,397) и T. forsythia (R = 0,388) статистическидостоверно умеренно коррелировало с содержанием HNP 1–3 в плазмепериферической крови.
Слабая корреляция отмечена для T. denticola (R = 0,203)и количества видов пародонтопатогенов в ассоциациях (R = 0,236) изаболеваниями ЖКТ (R = 0,268).Следует отметить, что полученные нами данные об уровнях содержанияHNP 1–3 у больных ХП частично соответствовали результатам, описаннымиранее другими исследователями [52, 58].Таким образом, полученные нами данные позволяют утверждать, чтосодержание α-дефензиновHNP 1–3в десневой жидкостии плазмепериферической крови, может быть связано с возрастом и полом пациента,состоянием гигиены полости рта, наличием кариозных поверхностей ипародонтопатогенных видов бактерий P.
gingivalis, T. denticola, T. forsythia,сопутствующих заболеваний и других признаков.Распознавание микробов в значительной степени опосредуется Toll- likeрецепторами, которые представлены на лейкоцитах и взаимодействуют с256консервативными патоген-ассоциированными молекулярными паттернами.Распознавая специфические лиганды, TLR-2 и TLR-4 взаимодействуют сбольшинством пародонтопатогенов [140, 143, 382, 442].Мы оценили экспрессию TLR-2 и TLR-4 на клетках из содержимогозубодесневой борозды (смывов десневой жидкости раствором Хэнкса),окрашенных антителами к CD282 (TLR-2) или СD284 (TLR-4), меченных FITC.Препараты просматривали под микроскопом ECLIPSE 50i (Nicon, Япония) приувеличении ×1000.
Были отобраны по 20 человек из каждой группы.Относительная частота выявления клеток, экспрессирующих CD282 (TLR2), у пациентов контрольной группы составила 10,3 ± 3,2% и СD284 (TLR-4) —13,6 ± 3,4%, в группе пациентов с ХП в фазе обострения статистическидостоверно в 3 раза ниже — 4,1 ± 2,1% и 5,7 ± 2,3% (p < 0,05), у больных ХГ —15,1 ± 1,9% и 8,6 ± 2,3% и у пациентов с КАП 5,3 ± 2,1% и 4,6 ± 1,9%.Так как ранее нами было установлено, что клеточных элементов в десневойжидкости меньше, чем требуется для иммунофенотипирования в проточномцитометре [92], мы определили экспрессию TLR-2 и TLR-4 на лейкоцитах,выделенных из периферической крови обследованных пациентов согласностандартным методикам.
Причем экспрессия TLR-2 и TLR-4 на лейкоцитахпериферической крови у разных людей, независимо от группы, к которой онипринадлежали, значительно варьировала от полного отсутствия до 100%-нойэкспрессии на моноцитах у отдельных индивидов [52, 92].Проведенное нами двойное окрашивание CD14/CD282 и CD3/CD284лейкомассы из периферической крови и клеток цельной крови позволилопоказать, что экспрессия TLR-2 на моноцитах и TLR-4 на лимфоцитах былаочень низкой и не превышала 1%. Самый высокий уровень экспрессии маркеровCD282 (TLR-2) был на лимфоцитах людей со здоровым пародонтом 1,06 ± 0,45%(0,51–1,51 %), в абсолютных значениях 24,38 ± 10,35 (14,03–34,73) млн. кл./литр.С помощью моноклональных антител к CD282 и CD284 на поверхностиосновных популяций лейкоцитов периферической крови (нейтрофилов,моноцитов и лимфоцитов) выявлена экспрессия TLR-2 и TLR-4: самая высокая257— TLR-2 у людей со здоровым пародонтом на лимфоцитах, в меньшей степенина моноцитах и самая низкая — на нейтрофилах периферической крови.
В то жевремя у здоровых людей больше всего было выявлено TLR-4+-нейтрофилов, вменьшем количестве — лимфоцитов и еще меньше — моноцитов.При ХП экспрессия TLR-2 была выше на моноцитах, но ниже нанейтрофилах и лимфоцитах по сравнению с контролем; экспрессия TLR-4 вышена моноцитах и лимфоцитах, но ниже на нейтрофилах.У больных ХГ TLR-2 больше всего экспрессировали лимфоциты, вменьшей степени — моноциты и еще меньше — нейтрофилы.
TLR-4 былобольше на моноцитах, меньше — на лимфоцитах и нейтрофилах. У пациентов сКАП преобладали CD282+-моноциты, в меньшей степени выявляли CD282+лимфоциты и CD282+-нейтрофилы. Уменьшение экспрессии TLR-4 наблюдали вряду: моноциты, нейтрофилы, лимфоциты.Экспрессия CD284 (TLR-4) на лейкоцитах периферической крови уобследованных нами пациентов имела такой же характер, а выявленныетенденции были статистически достоверны (р < 0,05).Итак, экспрессия рецепторов врожденного иммунитета TLR-2 и TLR-4на лейкоцитах десневой жидкости и периферической крови (нейтрофилах,моноцитах и лимфоцитах) у людей со здоровым пародонтом имелаодинаковый характер, но варьировала при различных формах воспалительныхзаболеваний тканей пародонта.Пониженная экспрессия TLR и нарушение сигнальных путей могутуменьшать факторы защиты, относящиеся к врожденному иммунитету,приводить к персистенции бактерий и усиливать воспаление.
М. Benakanakere ссоавт. (2015) [140] считают, что P. gingivalis может индуцировать ДНКметилирование TLR2 и таким образом модулировать врожденные защитныемеханизмы, что может способствовать повышению чувствительности кпародонтиту. По данным S. M. Sarah и др. (2006) [406], экспрессия TLR-2значительно увеличена при гингивите по сравнению с экспрессией TLR-4, но258снижена при хроническом пародонтите. Хотя F.
S. Lakschevitz и др. (2013) [306]считают, что у пациентов с ХП увеличена экспрессия TLR.Внастоящеевремяещенедостаточноданныхоспособностимноговидовых биопленок полости рта специфически стимулировать ответныереакции, а также их сравнительных оценок с отдельными бактериями в пределахмикробныхсообществ[139,238].Заболеванияпародонтавключаюткомплексную сеть взаимодействий между планктонными микробами илибиопленками и клетками организма. С помощью модельных систем, основанныхна совместном культивировании этих клеток и бактериальных биопленок, былиполучены четкие различия между планктонными бактериями и биопленками,патогенами и комменсалами, влиянием на клеточный ответ живых и мертвыхбактерий [345].В то же время известно, что многовидовые биопленки обладаютуникальными признаками, а в зависимости от их видового состава они могутбыть ассоциированы со здоровым пародонтом, гингивитом или пародонтитом,что было подтверждено нами при использовании сканирующей электронноймикроскопии в сочетании с ПЦР-диагностикой.Более того, R.
Peyyala и соавт. (2013) [384] выявили специфическиемедиаторы, уровень которых был значительно выше при стимуляциимноговидовыми биопленками по сравнению с тем, который можно было быожидать при простом аддитивном эффекте монобиопленок. Наконец, многиебиопленки проявляют ингибирующее действие либо не изменяют нормальныефоновые уровни медиаторов, трансляции и секреции и/или разрушаютразличныемедиаторыконтрастируетсвмодельныхуровнямисистемахмедиаторов,биопленок.ожидаемыхприЭточастостимуляциимонобиопленками или при заражении планктонными бактериями [385].R.
A. McLaughlin и A. J. Hoogewerf (2006) [340] представилидоказательства того, что биопленки и планктонные бактерии по-разномуреагируют на цитокины. Так, биопленки S. aureus ATCC, обработанные 2 ng/mLIL-1β в течение 6 часов, содержали в 2,5 раза больше клеток, чем259необработанные. В планктонных культурах увеличения роста бактерий ненаблюдалось. С помощью проточной цитометрии было показано, что IL-1βсвязывался с 63% клеток биопленки, но только с 11% планктонных клеток.Авторы считают, что бактерии в биопленке ускользают от защитных реакцийорганизма человека, размножаясь более быстро при выделении медиатороввоспаления активированными протективными клетками.Поэтому мы провели анализ содержания в бесклеточном супернатанте нади поддесневой биопленки и десневой жидкости IL-1β, IL-4, IL-6, IL-8, TNF-α, IL17A и INF-γ. Выбор спектра цитокинов для наших исследований был обусловлених известными свойствами.Было установлено, что концентрация интерлейкинов у всех обследованныхпациентов значительно варьировала.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
