Диссертация (1139576), страница 44
Текст из файла (страница 44)
В отечественной изарубежнойлитературеописаныпопыткиприменениялактококкови270лактобактерий для лечения пародонтита и профилактики рецидивов.К стабилизирующей микрофлоре полости рта относятся также вейлонеллы(Veillonella parvula) и слюнные стрептококки (Streptococcus salivarius), однако ихэффективность при воспалительных заболеваниях пародонта не изучена, что ипослужило основанием для проведения нами экспериментального исследования,которое показало эффективность колонизации биопленки пародонта у крыскандидатными пробиотическими штаммами стабилизирующей микрофлорыполости рта (Veillonella parvula, Streptococcus salivarius).
В экспериментенаблюдаласьдлительнаяперсистенцияданныхвидоввбиопленке,подтвержденная масс-спектромитрическим исследованием, что сопровождалосьснижениемколичественнойобсемененностистафило-энтерококковойассоциации.Антагонистические свойства живых микробов, входящих в составпрепаратов-эубиотиков,играютважнуюрольвобеспечениизащитымакроорганизма от инфекции, с одной стороны, и в регулировании составамикрофлоры в желудочно-кишечном тракте —с другой. Применениеэкспериментальной взвеси Veillonella parvula + Streptococcus salivarius длялеченияживотныхслигатурнымпародонтитомпродемонстрироваловозможность колонизации слизистой оболочки полости рта, что констатировалиболеечемуполовиныживотных,взятыхвэксперимент,причемколонизирующая ассоциация стабильно сохранялась в течение недели послезавершения приема взвеси животным.Учитывая, что в развитии патологии пародонта особую роль играютпатогены, способные к колонизации тканей десны и внутриклеточномупаразитированиювних,особенноприналичиигенетическойпредрасположенности по ряду аллелей DR и DQ HLA генов человека [62, 446],мы провели изучение факторов врожденного иммунитета, через которые,возможно, реализуются варианты генетической предрасположенности кмикробной колонизации пародонтопатогенными видами.Среди факторов врожденного иммунитета в последние годы всё большее271внимание уделяется значению интерлейкинов, дефензинов и toll-подобныхрецепторов.
В настоящее время установлены различные нарушения в системемеханизмов врожденного иммунитета, ассоциированных с этими факторами, вчастности нарушения экспрессии TLR и распознавания лигандов, трансдукциисигналов, выработки эффекторных молекул, а также полиморфизм генов TLR.Показано участие этих нарушений в развитии атеросклероза, инфекционных,аутоиммунных, аллергических и некоторых других заболеваний.Универсальностьмеханизмов,обусловленнаякакширокимпредставительством данных маркеров на разнообразных клетках организма, таки широким спектром лигандов для них, определяет включение молекулярныхфакторов врожденного иммунитета в патогенетические звенья развития многихзаболеваний.
В частности, показано, что дефекты молекул, участвующих втрансдукции сигнала от TLR, лежат в основе повышенной восприимчивости кинфекциям.В нашем исследовании показано, что воспалительные заболеванияпародонтаассоциированысопределенныминарушениямивсоставемолекулярных факторов врожденного иммунитета. Значимость этих механизмовдля широкой клинической практики определяет необходимость внедренияадекватных и надежных методов оценки компонентов систем интерлейкинов,дефензинов и Toll-подобных рецепторов, которые представлены в нашемисследовании и могут быть воспроизведены в условиях клиническойлаборатории лечебно-профилактических учреждений.272Выводы1.Установлена возможность моделирования смешанных микробныхбиопленок с участием пародонтопатогенных видов (Porphyromonas gingivalis,Fusobacterium nucleatum/periodonticum) in vitro и разработана модельформированиясмешаннойбиопленкинаполимернойподложкеизполиметилметакрилата в условиях движения жидкой фазы и анаэробиоза.2.Выявлены существенные морфологические различия процессаформированиямикробнойбиопленкиуграмположительныхиграмотрицательных бактерий при общности основных этапов — адгезии,размножения, формирования микроколоний и безмикробного матрикса вэксперименте in vitro на различных объектах по данным сканирующейэлектронной микроскопии и оценки адгезии in vitro.3.Определены значимые факторы формирования биопленки наповерхности изготовленных образцов (шероховатость и рельеф поверхностиполимерных стоматологических материалов, наличие конгломератов изазубрин, а также степень их сцепления с материалом), в которых принимаютучастие представители резидентных (группы Streptococcus sanguinis, S.
mutans,S. salivarius) и пародонтопатогенных видов бактерий (Aggregatibacteractinomycetemcomitans, Porphyromonas gingivalis, Fusobacterium nucleatum), атакже дрожжевых грибов (Candida albicans), что позволяет обосновать выборсоответствующихматериаловиспособовобработкиобразцовдляизготовления шинирующих конструкций зубного ряда и зубных протезов.4. По данным атомно-силовой зондовой микроскопии и оценки адгезиитест-штаммов in vitro установлена взаимосвязь между шероховатостьюповерхностиматериала для изготовления шинирующих конструкций ииндексом адгезии микроорганизмов на образцах, полученных при обработке вусловиях зуботехнической лаборатории, обеспечивающей минимальнуюстепень шероховатости по сравнению с другими способами обработки (вусловияхстоматологическогофрезеровки образцов).кабинетаилинепосредственнопосле2735.
Смешанная микробная биопленка пародонта в норме и при различныхвоспалительныхпроцессахтканейпародонта(хроническийгингивит,хронический пародонтит, кандида-ассоциированный пародонтит) имеет рядособенностей по видовому составу микробиоты и характеру формируемыхассоциаций микроорганизмов. Сравнительный анализ морфологии смешанноймикробной биопленки при выделении чистых культур в анаэробных условияхи одновременной детекции генетических маркеров пародонтопатогенныхбактерий и дрожжевых грибов рода Candida подтверждает высокую частотувыделенияпародонтопатогенныхвидов1порядкаприхроническомпародонтите (до 100%) по сравнению с катаральным гингивитом (не более20%) и здоровыми лицами (не более 12%), а также грибов рода Candida прикандида-ассоциированном пародонтите в количестве 103 КОЕ/мл и выше (причастоте выявления дрожжевых грибов до 100%).6.
Анализ частоты ассоциаций различных возбудителей в смешаннойбиопленке,формирующейсяприразличныхнозологическихформахвоспалительных заболеваний пародонта, свидетельствует о доминированииассоциаций приоритетных патогенов Porphyromonas gingivalis и Tannerellaforsythia с другими пародонтопатогенными видами 1 и 2 порядка у больныххроническим пародонтитом.7. С помощью экспериментальной модели пародонтита на крысахпоказана возможность колонизации биоплёнки пародонта кандидатнымипробиотическими штаммами Streptococcus salivarius K12 и Veillonella parvulaATCCTM 10790, сохраняющимися в течение 28 суток исследования.8. Сравнительный анализ частоты выявления резистентности кантибиотикам, формирующейся вусловияхсмешанныхбиопленок вклинических условиях, позволил выявить наличие генов резистентности кбета-лактамным антибиотикам — CTX-M-2, Мес-1, VIM, макролидам итетрациклинам — Erm и Tet, а также в единичных случаях — геноврезистентности к карбапенемам, гликопептидам и плазмиды, кодирующиерезистентность к фторхинолонам — QnrB.
Наличие генов, кодирующих274резистентностькантибактериальнымпрепаратам,используемымвпрактической стоматологии, установлено у 13,3% резидентных и 5,5%пародонтопатогенных бактерий, выделенных у пациентов из пародонтальныхкарманов.9. Определены группы антибактериальных препаратов для примененияпри воспалительных заболеваниях пародонта, направленные на эрадикациювозбудителей внутриклеточной локализации и в составе десневой биопленки(макролиды, тетрациклины, фторхинолоны 3–4 поколения).10. Оценка роли молекулярных факторов врожденного иммунитета —цитокинов и α-дефензинов, как маркеров диагностики воспалительныхзаболеваний пародонта, позволила выявить резкое увеличение уровняпровоспалительных цитокинов— TNFα, IL 1β, IL 4, IL 6, IL 17 в десневойжидкости, а также проследить динамику α-дефензинов и особенностиэкспрессии рецепторов TLR-2 и TLR-4 на лимфоцитах у больных хроническимпародонтитом.Установлена умеренно выраженная корреляционная зависимость междусодержанием α-дефензинов в десневой жидкости и наличием P.
gingivalis, T.denticola, T. forsythia (R = 0,612– 0,673), с количеством видов приоритетныхпатогенов в ассоциациях (R = 0,447), менее выраженная – с некоторымиклиническимипараметрамизаболеванияпародонта(количествоминфицированных участков, частотой выявления кариозных поверхностей,индексами PI, API, глубиной пародонтальных карманов) и возрастом (R =0,412) и слабая обратная корреляция содержания α-дефензинов в десневойжидкости с полом и привычкой курения (R = –0,269 –0,337). Также установленаобратная корреляционная зависимость между содержанием IL-1β в десневойжидкости и наличием P.
gingivalis (R =–0,606),количеством видовприоритетных патогенов в ассоциациях (R = –0,577), и прямая — с количествоминфицированных участков (R = 0,408) и экпрессией Toll-like рецепторов нанейтрофилах десневой жидкости. Для всех исследованных интерлейкиновустановлена связь с клиническими параметрами воспаления тканей пародонта,275что может использоваться при диагностике степени тяжести хроническогопародонтита.11. Оценка роли клеточных факторов врожденного иммунитетапоказала, что функциональная активность (фагоцитарная) нейтрофиловполости рта при воспалительных заболеваниях пародонта достоверно выше,чемнейтрофилов периферическойкрови,аэкспрессия рецепторовврожденного иммунитета TLR-2 и TLR-4 на лейкоцитах (нейтрофилах,моноцитахилимфоцитах)имеетдифференциально-диагностическоезначение, так как варьирует в зависимости от формы и степени тяжестивоспалительных заболеваний тканей пародонта.12.
Полученные результаты микробиологического и иммунологическогоисследования позволяют оптимизировать ряд консервативных мероприятийпри комплексном лечении заболеваний пародонта: обосновать выборшинирующих конструкций из полимерных материалов и оксида циркония,рекомендовать ряд антибактериальных препаратов и модуляторов иммунитета.При выборе тактики терапии рекомендуется дифференцированный подход,основанный на оценке состояния смешанной биопленки пародонта, выявлениявнутриклеточныхпародонтопатогенныхврожденного иммунитета.видовисостоянияфакторов276Практические рекомендации и перспективы дальнейших разработок1.
Внедрение метода сканирующей электронной микроскопии примоделировании сэндвич-биопленок в условиях текучих сред, а также вклинической практике при необходимости дифференциальной диагностикивоспалительных заболеваний пародонта в сложных клинических случаях, вчастности хронического гингивита и хронического пародонтита легкой степени.2. Применение методов оценки первичной микробной адгезии иразработанных моделей формирования микробной биопленки на образцахполимерных материалов (Заявка на изобретение РФ «Способ формированиясмешанной биопленки пародонтопатогенных анаэробных бактерий в условияхтекучих сред in vitro» № 2015149913/20(076763)) для выбора стоматологическихматериалов при изготовлении шинирующих конструкций и зубных протезов сучетом характера инфекционной патологии пародонта и слизистой оболочкиполости рта (Пат.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
