Диссертация (1139502), страница 17
Текст из файла (страница 17)
Действие детергентного антисептика – 0,1% мирамистина насмешанную микрофлору слюны.Показано, что при повторном воздействии детергента (в образце – через 1,5часа) флюоресценция не увеличивается, что соответствует гибели микробов.Посев после - роста нет (после кипячения также роста нет). Посев – микробныйпейзаж представлен ниже.Состав микрофлоры смешанной слюны пациента А до проведенияисследования: ОМЧ – 4.Ох10 Х 5 КОЕ/мл.
Str. Mitis – 2х10х5, str.sangius -2х10х5,str. Sangius – 1x10x5, euebacterium lentum- 4x10x4, propionibacterium granulosum –2x10x4, bifidubacterium sp – 8x10x2, lactobacillius sp – 8x10x2, candida sp -4x10x2,s.epidermidis – 6x10x2. После эксперимента роста микрофлоры в исследуемомобразце слюны не выявлено.102Из представленного исследования следует, что исходно флюоресценциянеразбавленной слюны, взятой у здорового пациента, составляет порядка 3000относительных единиц.
После ее разбавления физиологическим раствором (на 0,5мл слюны 1 мл физиологического раствора) интегральная флюоресценциясоставила около 300 относительных единиц. При последующем добавленииравного объема 0,1% раствора мирамистина (антисептик детергентного действия)флюоресценция резко увеличивается (через 10 минут инкубации) до 2000относительных единиц, что свидетельствует о разрушении вегетирующих форммикробов и выхода порфирин - содержащих продуктов в окружающую среду (сбиофизической точки зрения увеличение флюоресценции связано с купированиемтушенияфлюоресценцииактивнымиформамикислород-содержащихсоединений клеточных митохондрий или аналогичных им структур). Через 30минутинтенсивностьфлюоресценцииимеетвыраженнуютенденциюкснижению.
Через 1,5 часа интенсивность флюоресценции субстрата практическианалогична интенсивности исходного раствора мирамистина (Рисунок 21). Прибактериологической оценке исходная концентрация микрофлоры составляла4х10х5 КОЕ/ мл. После воздействия мирамистина микрофлора не высевалась –КОЕ/мл - 0.Таким образом, показано, что метод ЛКД (флюоресцентная составляющая)является объективным, экспрессным и адекватным бактериологическому ипозволяет эффективно оценивать антимикробное действие антисептиков в томчисле по детергентному последействию мирамистина на микробосодержащиесубстраты. Это особенно наглядно и интуитивно понятно подтверждаетсяэкспериментом, заключающимся в том, что если подействовать мирамистином напрокипяченную слюну, интенсивность флюоресценции последней практическибудет без изменений.
То есть применение детергентной технологии сиспользованием практически не флюоресцирующего 0.1- 0.2% растворамирамистина позволяет выявить и визуализировать (в оцифрованном виде) вмикробосодержащемсубстратеналичиекаквегетирующих,такиэлиминированных микробов, что для клинической практики крайне важно и103актуально. Предлагаемая технология также является цифровой и интуитивнопонятной, таким образом конвергентно ориентированной.Нижепредставленырезультаты,экспериментальные исследованияподтверждающиепроведенныес использованием другого антисептика(Рисунок 21). После воздействия раствора хлорамина (синий спектр) набактериальную культуру (красный спектр) происходит элиминация микробов и, витоге, остается только спектр хлорамина (зеленый спектр), но меньшейинтенсивности-флюоресценциямикробаисчезает(уменьшается).Микробиологическое исследование - рост микробов не обнаружен.Рисунок 21.
Сравнительный анализ спектров антисептика 1% хлорамина привоздействии на клинический штамм бактерии Pseudomonas aeruginosa . Времяисследования 2-3 минутыНа представленных примерах показана высокая чувствительность испецифичность цифровых ЛКД - технологий, также, как и их обоснованноеприменение для выбора и экспресс - оценки эффективности антимикробногопрепарата.Этоинформативности,соответствуеттребованиямнаглядности,экспрессностиврачейипоповышениюоднозначностиоценки104результатов исследования субъектом, что объективно позволяет считатьпредставленную ЛКД технологию конвергентно ориентированной.4.4. Исследование возможности применения ПАК ЛКД ИнСпектр М для оценкигигиенического состояния твердых тканей зубаНа Рисунке 22 показана чистка зуба 26 зубной пастой с одномоментнойрегистрацией методом флюоресценции на установке ИнСпектр М (длина волнызондирующего излучения 632,8 нм) результатов исследования у пациента М.Представлены показатели флюоресценции интактного зуба (иммунные зоны) ипоказатели флюоресценции исследуемого зуба в области шейки.
Измеренияпроводили каждую минуту до момента достижения показателей флюоресценциизуба равным показателям интактных тканей (иммунные зоны). Показано, что дажепосле 6 - и минутной чистки показатели флюоресценции практическиприблизились к интактным, но все еще не адекватные им по интенсивностифлюоресценции. Это свидетельствует о том, что как индивидуальную, так ипрофессиональную чистку зубов необходимо проводить под контролем ЛКД, какобъективного и эффективного цифрового экспресс метода. Традиционнорекомендуемое врачами - стоматологами время индивидуальной гигиены полостирта - 2-3 минуты сохранило бы имеющийся неудовлетворительный гигиеническийстатус.
Из представленного рисунка и таблицы следует, что показатель S1(показатель отражения поверхности зуба) по мере чистки увеличивается с 6332отн.ед. до 18400 отн.ед., то есть увеличивается в 3 раза (характеризует очищениеи осветление зуба). Интенсивность флюоресценции S2/S1 (характеризует зубнойналет) наоборот уменьшается по мере очистки зуба, в данном случае с 28465 до4482 отн. ед., то есть более, чем 6,5 раз (интактный зуб – S2\S1=около 500 отн.Ед.).
Это объективно и индивидуально для каждого пациента и характеризуеткачество гигиенической обработки твердых тканей зуба (конвергентно ориентированная технология).105Представленный материал и конвергентно ориентированная ЛКД -методикаособенно важны при работе гигиениста стоматологического, так как позволяетему непосредственно в клинических условиях получить объективную экспресс оценку (диагностическое время регистрации одного спектра– 1-2 секунды)индивидуального гигиенического состояния твердых тканей зуба независимо отвида гигиенической процедуры, пола и гендера оператора (врача-стоматолога) ипациента.Болеетого,демонстрациядинамикипроцессагигиеническойпроцедуры на экране компьютера (обратная связь) позволяет врачу и пациентуоднозначно понимать качество,Рисунок 22. Чистка зуба пастой «доктор Остроумов» и ее оценка методом ЛКД(флюоресцентная составляющая)эффективностьирезультатпроводимоголечения(профессиональнойгигиенической процедуры), что объективно соответствует концепции, цели изадачам исследования.3.5.Исследование биологических жидкостей методом раманфлюоресцентной диагностикиИсследование 50 тест – образцов таких биологических жидкостей, какслюна и плазма крови, посредством раман - флюоресцентного микроскопа на базе106ИнСпектрМспектральныепозволилаэкспресснохарактеристики.inРезультатыvitroоценитьданногоихспецифичныеметодаисследованияпредставлены в виде характерных усредненных спектров (Рисунок 30).Данный конвергентно - ориентированный экспресс ЛКД - метод раман –флюоресцентной диагностики, при формировании эталонной базы данныхспектров, позволит, по – видимому, непосредственно в клинике стоматологиипроводить экспресс исследования биологической жидкости – слюны для раннейдиагностики различных заболеваний организма, вне зависимости от пола игендера объекта (пациента) и субъекта (врача).Рисунок 23.
Спектры флюоресценции слюны на рисунке слева, справа – зеленый плазма крови донора, красный – плазма крови спортсмена после тренировки(спектр близкий к спектру мочи), синий – плазма крови при преэклампсиибеременности (время регистрации каждого спектра до 10 секунд)4.6. Изучение возможности применения ПАК ЛКД ИнСпекр М для экспрессисследования биопсийного материалаИсследования проводили на аппаратуре ИнСпектр М с микроскопом.Биопсийный материал помещали на предметное стекло с последующим егоизучением раман - флюоресцентным методом.107Поиск новых методов исследования, позволяющий экспрессно выявлятьранние гиперпластические изменения органов и тканей челюстно-лицевойобласти, является клинически целесообразным и перспективным. Одним из такихвозможныхметодовявляетсяметодлазернойраман-люминесцентнойдиагностики.
Ниже (Рисунок 24) показаны раман - флюоресцентные спектры,зарегистрированные с помощью аппаратуры ИнСпектр М и верифицированные набазеотделапатоморфологииФГБУ«Национальныймедицинскийисследовательский центр онкологии им. Н.Н. Блохина».Рисунок 24. Изображение раман-флюоресцентных спектров интактных тканей(верхний левый спектр), новообразование, предположительно злокачественнойприроды (верхний правый спектр) и липомы бокового отдела шеи (нижний спектр) усредненные показатели по десяти измерениям каждого вида новообразований.Особенности дифференцировки новообразований и интактной ткани:•Форма люминесценции исследуемой ткани говорит о ее состоянии –норма («двугорбость») или новообразование, новообразование злокачественнойприроды («одногробость»/куполообразная форма). Степень выраженности формыможетварьировать.Крометого,уинтактнойтканипикиактивностилюминесценции постоянны - имеется пик на 565 нм и пик на 595 нм, аполуширина «горбов» имеет определенную величину.108•Форма люминесценции при исследовании биопсийного материала взоне новообразованной ткани также может также быть «двугорбой», что означает,что для исследования выбрана точка, соответствующая интактной ткани срединовообразованной.
Поэтому для точного получения данных важно провестиисследование в нескольких точках.•Различныепики,ширина,формаодногорбойлюминесценцииуказывают на ряд факторов, повлиявших на развитие предположительноновообразования злокачественной природы. К ним, повидимому, относитсявозраст новообразования, характер развития, скорость распространения и т.д.•Спектры липомы характеризуются множественными рамановскимипиками (на фоне флюоресценции новообразования) разной интенсивности иотличаются хорошей воспроизводимостью: в случае ангиолипомы отмечаютсясущественные вариации интенсивности рамановских пиков и интенсивностифлюоресценции исследуемых объектов.Воспроизводимость представленной ЛКД - технологии составила длядоброкачественных новообразований - 100%, для злокачественных – 80 - 85%(верифицированный биопсийный материал).На основании представленных результатов можно констатировать, что ЛКДэкспресс-методраман-флюоресцентнойдиагностикиявляетсяцифровойобъективной медицинской технологией в плане ее применения для индикацииопухолей (доброкачественных и злокачественных) и их дифференциации синтактными тканями.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
