Диссертация (1139502), страница 16
Текст из файла (страница 16)
Типичные спектры флюоресценции удаленных зубов при облучениикариозных очагов лазерным излучением 632,8 нм (120 тест объектов – зубы скариесом дентина класс I по Блэку).Интактная ткань зубов характеризуется на спектрограмме в виде нижнихкривых и при кариесе в виде верхних кривых. Время измерения одного спектра –1-2 секунды.93Рисунок 10. Амплитудно - спектральные характеристики твердых тканейудаленного зуба в норме (спектры слева) и при кариесе дентина (спектры справа).Время измерения одного спектра – 1-2 секунды.Рисунок 11.
Амплитудно-спектральные характеристики твердых тканей зуба приоблучении с длиной волны 530 нм (зеленая часть спектра) в норме (спектограммыслева – синий, черный, розовый) и при кариесе (спектограмма справа – желтыйспектр).Исследование показало, что характерными признаками кариеса являлисьнизкоезначениеобратноотраженногозондирующегоизлучения(пика),94достаточно высокое значение интенсивности флюоресценции Iфлкариозногоочага поражения. При этом, существенно высокое значение интенсивностифлюоресценциипри кариозном поражении вызвано как самим факторомприсутствия анаэробно-аэробной микрофлоры, так и ее количеством (что хорошоизвестно по данным литературы и подтверждает соответствие в полученных намирезультатах).
При этом следует отметить, что при зондирующем излучении 405нм при кариозном процессе отмечается не только увеличение интенсивностифлюоресценции кариозной полости относительно интактной ткани, но и сдвигпика флюоресценции вправо (что в диагностическом плане является болеенаглядным и предпочтительным). Представленная методика является цифровой иинтуитивно понятной, что определило ее применение в настоящем исследовании.Следующим этапом мы исследовали возможность использования раманфлюоресцентнойдиагностикидляоценкистепенименерализации/деминерализации твердых тканей зуба и «камней» подчелюстнойслюнной железы (Рисунки 12 - 13).Рисунок 12.
Интенсивность раман-флюоресцентного спектра для интактного зуба(синий пик) и зуба пораженного начальным кариесом (коричневый пик)95В зоне кариозного поражения интенсивность рамановского пика в 4,5-5 менеевыражена – соответствует спектру фторапатита. Время измерения одного спектра– 1-2 секунды.Рисунок 13. Спектр слюнного камня из протока подчелюстной слюнной железы.Линия 960 см-1 – линия апатита. Время измерения одного спектра – 1-2 секундыНа принципиально новом аппаратно-программном уровне подтверждено,что оптическая диагностика осуществляется в экспресс - режиме (диагностика соскоростью света). Информативность компьютеризированного цифрового ЛКД метода позволяет с высокой аналитической чувствительностью объективнопроводитьиндикациюобъектовминерализации/деминерализацииразрабатываемымнамизуба,методикам.микробнойчтоприроды,соответствуетКомплексстепенитребованиямпозволяеткудовлетворитьтребования врачей (мужчин и женщин) по получению интуитивно понятных,цифровых экспрессных и однозначно воспринимаемых результатов, что будетспособствовать сокращению времени диагностики, повышению объективности иулучшению эргономики лечебно-диагностического процесса и повышениюпрофессионализмаврачей-стоматологов.Последующиеисследованияобъективно отражают представленные положения.
Полученные в экспериментерезультатыбудут апробированы непосредственно в клинических условиях с96целью оценки их эффективности и применимости в соответствии с целью изадачами исследования.4.2.Результаты экспресс ЛКД выявления микробного фактора и оценки егобиоотклика на воздействие антимикробных препаратовИсследования проводили на удаленных зубах в восковом блоке после ихмеханической и медикаментозной обработки. В качестве микробосодержащегообъектаиспользовалисмешаннуюслюну.Динамикумеханическойимедикаментозной обработки оценивали на основе мониторинга процесса методомЛКД на установке ИнСпектр М.
В качестве антисептического средстваиспользовали раствор хлоргексидина 2%. Результаты представлены на Рисунке14.Оценка эффективности механической и антисептическойобработки полости и канала зуба1Рисунок 14. Оценка эффективности механической и антисептической обработкиполости зуба (усредненные показатели для 10 тест - объектов зубов). Результатыэкспресс оценки (одно измерение – 1-2 секунды)Изпредставленныхисследованийследует,чтоЛКД-метод(флюоресцентная составляющая) экспрессно и объективно, в цифровом виде97характеризует исходное состояние визуально «интактного» дентина, какмикробосодержащегообъекта.Обэтомсвидетельствуетто,чтопоследополнительной первой и второй механической обработки этого дентина егофлюоресценция существенно падает и значительно увеличивается только последобавлениямикробосодержащегофактора(смешаннойслюны).Послеантисептической обработки объекта исследования раствором 2% хлоргексидина,показатели флюоресценции резко падают и становятся адекватными показателяминтактного дентина (после повторной антисептической обработки - зеленыйграфик).
Таким образом, убедительно показано, что метод ЛКД (флюоресцентаясоставляющая) в экспресс - режиме определяет наличие микрофлоры и позволяетобъективно, то есть в цифровом виде оценивать действие антисептика намикрофлору рта (5-10 минут - время полного цикла исследования) .4.3. Исследование возможности применения медицинской ЛКД - технологиидля индикации микроорганизмов и оценки антимикробного действияантисептиков.Рисунок 15. Оцифрованные спектры ЛКД (флюоресцентная составляющая)чистых культур выделенных из смешанной слюны (клинические штаммы). 1Staphilococc Aureus, 2-Candida Ablicana, 3-Eshirisia Colli, 4-Streptococcus Pyogenes(слева на право, сверху вниз)98В следующем эксперименте исследовали возможность применениякомпьютеризированной ЛКД - технологии (флюоресцентная составляющая) длявыявления вегетирующих и элиминированных микроорганизмов и их ассоциаций(Рисунок 15 - 17).Рисунок 16.
Спектры флуоресценции культуры e.coli (10х6 КОЕ\мл) в динамике:синяя кривая – в начальный момент времени, пурпурная – через некоторое время,зеленая – после гибели культуры в результате кипяченияТаким образом, детергентное действие кипячения приводит к увеличениюинтенсивности флюоресценции. При повторном кипячении флюоресценция неувеличивается, что соответствует гибели микробов. Посев после кипячения роста нет.Рисунок 17.
Спектры флуоресценции культуры staphylococcus aureus (10х6КОЕ\мл) в динамике: синяя кривая – в начальный момент времени, пурпурная –через некоторое время, зеленая – после гибели культуры в результате кипячения99ВдругоммирамистинаиэкспериментеегопоказанвизуализацияэффектметодомдетергентногодействиякомпьютеризированнойЛКД(флюоресцентная составляющая).Рисунок 18. Спектр флуоресценции исходного раствора микроорганизмов(фиолетовая линия) и спектр флуоресценции после добавления мирамистина(зеленая линия)Такимобразом,показано,чтоприразрушениимикробовихфлюоресценция увеличивается (при воздействии объектов с детергентныммеханизмом действия).
Более того при максимальном детергентном воздействииможно,по-видимому,методомфлюоресцентнойдиагностикиразличатьвегетирующие и элиминированные культуры микробов, что подтверждается темфактором, что при повторном кипячении или добавлении раствора мирамистинафлюоресценция не увеличивается, а посев - после роста микробов не выявил.Методика является цифровой, интуитивно понятной, то есть конвергентноориентированной.В следующем эксперименте методом ЛКД (флюоресцентная составляющая)исследовали действияантисептика – 0,1% - 0,5% раствора мирамистина насмешанную микрофлору слюны (Рисунок 19).
Предварительно определялинаиболее оптимальную концентрацию раствора мирамистина, обладающегодетергентным действием, которое можно визуализировать методом ЛКД(флюоресцентная составляющая) на аппарате ИнСпектр М.100Рисунок 19. Показатели изменения мощности флюоресценции при воздействииразличных концентраций раствора мирамистина на смешанную микрофлоруслюны (соотношение 1:1)Достоверность различий детергентного действия мирамистина (р <0,01)установлена для концентрации 0.1%, 0.2%, 0.5%. Наблюдается выраженноедетергентное действие раствора мирамистина при концентрации 0.1% - 0.5%(характеризуетсяраспадоммикробныхтел,увеличениемчислафлюоресцирующих частиц и ,как следствие, увеличением интенсивностифлюоресценции смеси).Дляпоследующихисследованийиспользовали0.1-0.2%растворымирамистина, вследствие их практически равнозначного детергентного действия.Подтвердили выявленный эффект на тест - объекте смешанной слюны иосуществили его регистрацию в динамике методом ЛКД (флюоресцентнаясоставляющая) (Рисунок 20).101Рисунок 20.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
