Диссертация (1139480), страница 32
Текст из файла (страница 32)
Выраженныймононуклеарный инфильтрат в собственной пластинке слизистой оболочкидесны и выраженная степень инфильтрации нейтрофильными лейкоцитамиболее чем вдвое чаще определялся у носителей аллеля Т гена IL-1β (С -511 Т),у носителей аллеля С гена IL-1β (С -511 Т) статистически значимо чащевыявлялась слабая и умеренная степень инфильтрации мононуклеарнымиклетками и нейтрофильными лейкоцитами (2=7,380; p<0,007), что позволяетговорить об ассоциации аллеля Т с более выраженными воспалительнымиизменениями в слизистой оболочке десны.При анализе генотипов полиморфного локуса (С +3953 Т) гена IL-1βобнаружено, что достоверно чаще у больных с выраженной степенью237инфильтрации мононуклеарными клетками и нейтрофильными лейкоцитамиопределялись генотипы С/Т и Т/Т, при слабой степени выраженностивоспалительных изменений в слизистой оболочке десны статистическизначимо чаще встречался генотип С/С гена IL-1β (С +3953 Т) (2=26,704;p<0,001 и 2=34,860; p<0,001 – соответственно).
Так же при оценкераспределения полиморфных аллелей IL-1β (С +3953 Т) статистическизначимо чаще определялся аллель Т в случае выявления выраженной степенивоспалительного инфильтрата и аллель С гена IL-1β (С +3953 Т) при наличиислабой и умеренной степени воспалительной инфильтрации. Это позволяетконстатировать ассоциацию аллеля Т гена IL-1β (С +3953 Т) с болеевыраженным проявлением воспаленияв слизистой оболочке деснысоответственно 2=30,099; p<0,001 и 2=33,212; p<0,001.В то же время не было выявлено ассоциаций генотипов и аллелейполиморфного локуса гена IL-1RN (VNTR интрон 2) с интенсивностьювоспалительного ответа (2= 4,292; √=1; p>0,05).При анализе распределения генотипов и аллелей полиморфного локусагена TNFα (G -308 А) у пациентов с различной степенью выраженностивоспалительных изменений в слизистой оболочке десны установлено, чтогенотипы G/А, А/А и аллель А статистически значимо чаще обнаруживалисьпривыраженнойстепениинфильтрациикомпартментовдесныиммунокомпетентными клетками CD45RO+, CD68+, CD8+ по сравнению сгенотипом G/G и аллелем G (2=34,971; p<0,001 и 2=28,037; p<0,001 –соответственно).
Преобладание в воспалительном инфильтрате Т-лимфоцитовпамяти, макрофагов и цитотоксических лимфоцитов позволяет считать аллельА гена TNFα (G -308 А) ассоциированным с формированием устойчивыхмежклеточных взаимодействий и персистенции воспаления в слизистойоболочке десны при пародонтите.При анализе распределения генотипов 3R/3R, 3R/2R, 2R/2R и аллелей 3Rи 2R полиморфного локуса гена IL-4 (интрон 3) обнаружено, что у больных с238выраженной степенью воспалительных изменений слизистой оболочки деснычаще определялись генотип 3R/3R (2=12,278; p<0,002) и аллель 3R (2=9,121;p<0,003).
Слабая степень воспалительных изменений в 100% случаевопределялась у носителей генотипа 2R/2R и у половины носителей генотипа3R/2R (2=17,754; p<0,001 и 2=13,491; p<0,001 – соответственно). У больныхс умеренной степенью воспаления слизистой оболочки десны в 33% случаевопределялся генотип 3R/3R и в 41% случаев - 3R/2R гена IL-4 (интрон 3).У носителей аллелей Т гена IL-1β (С -511 Т), Т гена IL-1β (С +3953 Т ),А гена TNFα (G -308 А) и 3R гена IL-4 (интрон 3) в клеточном инфильтратенарастает количество клеток с фенотипом CD8+, CD4+, CD45RO+, CD20+,CD68+,количествовыраженноймежэпителиальныхинфильтрациейлимфоцитовнейтрофильнымивсочетаниилейкоцитами.сМожнопредположить, что большее количество клеток, которые являются мишенямии источником базальной и индуцированной выработки интерлейкинов,определяют выраженные деструктивные процессы в слизистой оболочкедесныиопосредованноиндукциюдифференцировкииактивностиостеокластов, следовательно, и резорбцию костной ткани.При сопоставлении данных клинического, молекулярно-генетическогои морфологического исследований проведенных до начала лечения упациентов с хроническим генерализованным пародонтитом выявленыособенности, обусловленные структурными изменениями в слизистойоболочке десны.
Так, в группе больных с «агрессивным» течениемпародонтита выраженные воспалительные изменения в слизистой оболочкедесны отмечены в 76% случаев, в остальных 24% - имелись умеренныевоспалительные изменения. В группе с «умеренно прогрессирующим»течением пародонтита выраженные воспалительные изменения выявлены в48% случаев, а в 42% и 10% - определялись соответственно - умеренные ислабыевоспалительныеизменения.Идажеулицс«медленнопрогрессирующим» течением пародонтита в 10% случаев имели место239выраженные воспалительные изменения в 42% - умеренные, в 48% - слабыевоспалительные изменения.Для понимания, чем определяется реагирование системы на тканевом,клеточном уровнях, и насколько стабильны межклеточные взаимоотношения,возникшие при взаимодействии «инфект - хозяин», отражающие генетическийконтрольреакциивоспаления,намипредпринятопроспективноеисследование: проведена оценка клинических и морфологических измененийв слизистой оболочке десны под влиянием терапии, а также через 12 месяцевпосле окончания терапии.Проведением базового курса терапии были купированы клиническиепризнаки активного воспаления в тканях пародонта, что сопровождалосьулучшением состояния полости рта пациентов, отсутствием жалоб, связанныхс выраженностью воспаления и подтверждалось значениями индексовкровоточивости (с 2,84 до 0,93 (р<0,001); с 2,86 до 0,21 (р<0,001); с 2,79 до 0,1(р<0,001)соответственноубольныхс«агрессивным»,«умереннопрогрессирующим» и «медленно прогрессирующим» течением пародонтита)и ПМА (с 66% до 11,6% (р<0,001); с 65,9% до 4,1% (р<0,001); с 57,7% до 2,1%(р<0,001)соответственноубольныхс«агрессивным»,«умереннопрогрессирующим» и «медленно прогрессирующим» течением пародонтита).При этом значения индекса кровоточивости и ПМА через 1 месяц после началатерапии у больных с «агрессивным» и «умеренно прогрессирующим»течением пародонтита статистически значимо превышали аналогичныепоказатели больных с «медленно прогрессирующим» течением пародонтита.По окончанию базовой терапии в группе с «агрессивным» течениемпародонтита значения индекса кровоточивости и ПМА достоверно превышалианалогичные показатели больных и с «умеренно прогрессирующим» и с«медленно прогрессирующим» течением пародонтита.
При оценке состояниябиотопа полости рта установлено, что степень дисбиоза статистическизначимо снизилась у всех больных (2=15,026; р<0,001).240При оценке структурных изменений в слизистой оболочке десны,произошедших под влиянием базового курса лечения (через 3 месяца)отмечали снижение плотности лимфо-макрофагального инфильтрата всобственной пластинке слизистой оболочки десны, уменьшение, в рядеслучаев – отсутствие инфильтрации нейтрофильными лейкоцитами, итенденцию к восстановлению показателей клеточного обновления эпителия.Максимальный эффект терапии с позиции нормализации структурыдесны был достигнут у пациентов с «медленно прогрессирующим» течениемпародонтита, в биоптатах слизистой оболочки десны которых через месяцпосле начала лечения статистически значимо уменьшились популяции всехизучаемых клеточных линий воспалительного инфильтрата CD4+, CD8+,CD20+, CD45RO+, CD68+ и Ki67+ клетки воспалительного инфильтрата(U=3,803, p<0,001; U=3,236, p<0,001; U=2,891, 0,004; U=3,660, p<0,001;U=2,276, p<0,023; U=3,777, p<0,001 - соответственно).
Через 1 месяц посленачала лечения в 16 (32%) биоптатах, через 3 месяца в 8 (16%) биоптатахопределялись нейтрофильные лейкоциты в минимальных количествах.Изменялись морфометрические показатели клеточного обновленияэпителия слизистой оболочки десны: снижение объемной плотностиэпителиальных тяжей с 0,71±0,08 до 0,52±0,06 (р<0,05), уменьшение в 1 мм2Ki-67+ эпителиоцитов с 30,65±3,4 до 19,40±3,7 (р<0,05) и Р53+ эпителиоцитовс 28,01±4,8 до 21,67±5,1 (р<0,05), что свидетельствовало об уменьшенииакантоза эпителия и тенденции к нормализации гистиоархитектоники десны.У больных с «умеренно прогрессирующим» течением пародонтитачерез месяц после начала лечения отмечено статистически значимоеуменьшение популяции CD4+ (U=4,147, p<0,001), CD45RO+ (U=4,249,p<0,001) Т лимфоцитов и Ki67+ (U=2,155, p<0,031) клеток воспалительногоинфильтрата в компартментах слизистой оболочки десны.
Только кокончанию лечения (3 месяца) отмечалось существенное уменьшениепопуляции клеток воспалительного инфильтрата с последующей редукциейвоспалительного инфильтрата. Через месяц после начала лечения в 23 (46%)241биоптатах, через 3 месяца в 12 (24%) биоптатах определялись нейтрофильныелейкоциты в минимальных количествах.При оценке морфометрических показателей обновления клеточнойпопуляциивэпителиислизистойоболочкидесныподвлияниемпротивомикробного лечения у лиц с «умеренно прогрессирующим» течениемболезни установлено статистически значимое снижение объемной плотностиэпителиальных тяжей с 0,74±0,06 до 0,59±0,09 (р<0,05), уменьшение на 1 мм2Ki-67+ эпителиоцитов с 30,97±4,2 до 22,27±5,1 (р<0,05) и Р53+ эпителиоцитовс 28,71±5,2 до 23,19±4,3 (р<0,05) вплоть до полного исчезновенияакантотических тяжей в некоторых биоптатах.В биоптатах больных с «агрессивным» течением болезни, в отличие отпредыдущих двух групп пациентов, через 3 месяца отмечалось статистическизначимое снижение популяции клеток с фенотипом CD4+ и CD20+ (U=3,100,p<0,002 и U=2,032, p<0,042 – соответственно).
При этом в собственнойпластинке слизистой оболочки десны соотношение CD4+/CD8+ лимфоцитовуменьшалось, что расценивается как неблагоприятный признак [453].Воспалительный инфильтрат сохранялся в собственной пластинке слизистойоболочки десны, где был представлен популяциями CD68+ макрофагов иCD45RO+ Т лимфоцитов памяти – свидетельство возможности локальнойактивации хронизации воспаления [182, 204, 419] и популяциями CD8+ иCD45RO+ Т лимфоцитов в эпителиальном компартменте слизистой оболочкидесны.ИнтраэпителиальныеCD8+лимфоциты,стимулируяFasL-опосредованный апоптоз эпителия, несут разрушительный потенциал дляэпителиального пласта [175, 177, 498]. Через месяц после начала лечения в 24(48%) биоптатах, через 3 месяца в 18 (36%) биоптатах продолжалиопределяться нейтрофильные лейкоциты – свидетельство активностивоспалительного процесса в десне.Морфометрические показатели клеточного обновления эпителияслизистой оболочки десны на фоне противомикробного лечения у пациентовданной группы не изменялись: объемная плотность эпителиальных тяжей до242лечения - 0,72±0,07 через 3 месяца - 0,69±0,06 (р>0,05), количество на 1 мм2Ki-67+ эпителиоцитов до лечения - 30,42±4,3 через 3 месяца - 29,31±3,7(р>0,05) и количество Р53+ эпителиоцитов до лечения - 27,26±6,1 через 3месяца - 26,09±5,7 (р>0,05 при использовании критерия Крускала-Уоллиса).Метка Ki67 сохранялась в клетках многослойного плоского эпителия какбазального,такисупрабазальногослоев.ЯдернаяметкаР53визуализировалась также в клетках пролиферативной зоны многослойногоплоского эпителия, то есть в эпителиальном компартменте сохранялосьдостаточное количество эпителиоцитов с поврежденной ДНК, а снижениятемпов клеточной пролиферации (метка Ki67) не зафиксировано.
Клеточныйинфильтрат в биоптатах пациентов данной группы был ассоциирован свыраженностью акантоза. Косвенным подтверждением влияния цитокиноввоспалительного инфильтрата на пролиферацию эпителия десны являютсяданные о средней положительной корреляционной связи между числомпролиферирующих клеток (метка Ki67), клеток с поврежденной ДНК (меткаР53) и уровнем лимфомакрофагальной инфильтрации собственной пластинкислизистой оболочки десны (r=0,56, р˂0,001; и r=0,50, р˂0,001 соответственно).Предполагается, что клеточному иммунитету принадлежит рольносителя «регенераторной информации», лимфоциты способны оказывать наклетки-мишени цитогенетический, цитостатический и цитолитическийэффекты [6, 137].Таким образом, структурные изменения слизистой оболочки десны припародонтите в динамике под влиянием базовой терапии характеризовалисьредукцией воспалительных изменений, при этом первой подвергаласьобратномуразвитиюинфильтрациянейтрофильнымилейкоцитами.Лимфомакрофагальный инфильтрат подвергался редукции неравномерно, вбольшинстве случаев плотность мононуклеарной инфильтрации уменьшалась.Вместе с тем в 33,8% наблюдениях отмечалось сохранение клеточногоинфильтрата умеренной и выраженной степени в собственной пластинкеслизистой оболочки десны.243К ранним эффектам проведения базового курса лечения следует отнестиугнетениеактивностиуменьшениемвоспалительноговыраженностипроцесса,инфильтрациичтопроявлялоськомпартментовслизистойоболочки десны нейтрофильными лейкоцитами, а к отсроченным – медленноеисчезновениемононуклеарногоинфильтрата.Анализрезультатовгистологического и иммуногистохимического исследований биоптатовслизистой оболочки десны позволил обосновать выделение 3-х групп больныхпародонтитом, имеющих не разную степень пародонтита, а разный характертечения болезни.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
