Э. Фёршт - Структура и механизм действия ферментов (1128692), страница 41
Текст из файла (страница 41)
Однако результаты кристаллографического анализа позволяют предположить, что модифици. ровалась не та группа, которую имели в виду, а другое участвующее в катализе основание (гл. 12, равд. Е.2) (79). Если все обстоит именно так, то неожиданный результат интереснее ожидаемого, поскольку тем самым обнаружена важная, не известная ранее каталитическая группа. Еще один показательный пример использования аффинных меток связан с исследованием пепснна (см, уравнения (12.29) и (12.30)). Этот фермент содержит два участвующих в катализе ГЛАВА У 248 остатка аспарагиновой кислоты, из которых ионизирован только один.
Ионизированная карбоксильная группа взаимодействует с эпоксидом, поскольку последний вступает в реакцию, конечно, с нуклеофнльной группой. Неионизированная карбоксильная группа взаимодействует с диазоацетильным производным эфира аминокислоты (7.25). Сцц Х2СНСОХНСН(Н)СОзМе ~с е Сц СНСО) гНСН(Н)СОзме ('7 25) Мз Эта реакция катализируется ионами меди, что, вероятно, обусловлено образованием комплекса карбена с медью [80). Известно, что карбен, у которого на внешней оболочке находится только шесть электронов, присоединяется к неионизированным карбоксильным группам по связи Π— Н.
Еше один интересный подход состоит в использовании фоточувствительных аффинных меток (81, 82) — соединений, устойчивых в темноте, но актинизирующихся в результате фотолиза, н способных обратимо присоединяться к ферменту. Обычно в каТаблица 7.!2 Некоторые аффиниые метки а! Субстрат Фермент Афенннан метка О НОСН ССН ОРО' О !! НССН(ОН)СН ОРО' О !! 1СН ССН ОРО2 ГО; СН,СНСН,ОРО2 Триозофосфатизомераза СН ОН;О О ОСН,СНСН, ОН (90 ХНАо Лизоцим НгСН,СО-1!е-тРНКис 1!е-тРНК " Изолейцил-тРНК-синте- таза «! Нагьпапп и. С., В(ссеенп Ыернуа.
цеа. Ссппппп., 33, 393 ((95ЗН Н(а(еу 3. Ой МН. у. с., н !. А., о'с и н. ь., ма(йге, й б., 222,"(3! пмо); тье * н. 9(., мсн!. тУ Я. Р., Знатен и., Ма(ПГЕ, !.Снб., 222, 435 ((9б9Н Зайи О. У.. МаГСЬан( ЦГ.. В(оеист. Ыср ауа. Неа. Сспппнп..
5(, ЗГЗ ((923!. кинвтичвскиа матоды и механизм даиствия авимвнтов 249 честве таких реагентов используются диазосоединения или азиды, при фотолизе которых образуются соответственно высокореакционноспособные карбены или нитрены: йс — г Нс (7.26) 'сны, ~сн «в Ц вЂ” Ыз — Н вЂ” Ыг (7.27) Фоточувствительные аффинные метки оказались очень полезными при картировании аминокислотных остатков в активных центрах ферментов и в центрах связывания белков (например, антител).
Для кинетических исследований более удобны обычные аффинные метки, посколькуониспецифичныв отношении оснбвных и нуклеофильных групп, которым в катализе принадлежит главная роль, и позволяют получить информацию о рК, модифицируемых групп. В настоящее время синтезированы сотни аффинных меток; в основе большинства из них лежат галоидметилкетоны или эпок- сиды. Перечень меток ежегодно приводится в периодических сообщениях для специалистов «Аминокислоты, пептиды и белки», издаваемых Химическим обществом Великобритании. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1.
Наг((еу В. Б., Кньу В. А., В!осьет. У., 56, 288 (1954). 2. ОиЦгеила Н., Р!всивв. Регв6ву Бос., 20, 167 (1955). 3. Ои!(геилг( Н., Б(иггеоат У. М., В1осьет. У., 63, 656 (1956). 4. Н(тое А., Вгалгн К. б., ОеБа Е. У., Не«я б. Р., Е Ь|о1. СЬет., 244, 3483 (1969). 5. Вагант Т. Е., Оибгеилк Н., В1осьегп. У., 1О1, 411 (1966). 6. Веглаагг( Б. А., Оибгеипа Н., Ргос.
йе1п. Асей. Бс(., ().5.А., 53, 1238 (1965). 7. МсСолл У. Ки Е, Нгтое А., Вгалш К. б., Не»я б. Р., У. Ь|о1. Свет., 246, 2918 (1971). 8. Велаег М. Е., Бсаопьаит О. Во 2еглег В., Я. Ат. сьев. 5ос., 84, 2540 (1962). 9, Сар!ош М., Уелсуя %7. Р., В(оснега!в(гу, 1, 883 (1962). 1О. Веглаагг( Б. А., Еаи Б. У., Нопег Н., В(осьет!в(гу, 4, 1108 (1965). 11. Ое Уегяеу У., Кеоиу)г О.
Т., Бгооря У. К., 2егпег В., Еиг. У„В!осьет., 42, 237 (1974). 12. Мшег С. О., Велг(ег М. Е., У. Агп. сьегп. Бос., 90, 6850 (1968). 13. Реты А. В., В!от О. М., Рая!ген У., В1осьеппв(гу, 12, 2035 (1973). 14. Раямее У., Регяы А. У(., В(осьет(в(гу, 12, 2025 (1973). 15, Нелг(егяоп В., Л то!ес. В(о1., 54, 341 (1970). 16.
Уаляел Е. Р„Ни(У(лу М, О., Вадя А. К., Л Ыо!. Сьет., 179, 201 (1949). 17. Бс(га((ег Н. К., Мау Б. С., Биттеяоп 57. Н., У. Ыо!. СЬегп., 202, 67 (1953). !8 Ои((геилг( Н., Наттолг( В. В., В(осьет. У., 73, 526 (1959), 19. Оагеп А., Еео(лгаа! С., Вгасьегп, Ь|орьув. Ас(е, 38, 470 (1960). 20.
Нерре! Е. А., Нагалеяя О. В., Нцтое В. У., Л Ыо1. СЬет., 237, 841 (1962). 21 А!абаде Пг. Н., Вагтал Т. Е,, би!Угеилг( Н., В(осьет. У., 92, 23С (1964). 250 ГЛАВА 1 22. НиП Вт. Е., Зуава В. О., В)осЬетьв(гу, 15, 1535 (1976). 23. НиП ВГ. Е., На!Хотй 5. Е., Ои((теилй Н., ЗуИез В. Р., ВюсЬетЫНу, 15, !547 (1976). 24, Ералй Н. М., 8ть!зол Х. В„Л. Ььо!. СЬегп, 238, 1718 (1963). 25. Ералй Н. М., ЯГь!зол Х. В., Л Ыо!. СЬетп., 240, 1104 (!965). 26.
Велйет М. Е., С!етель О. Е., Оил(ег С. Х!., Кезйу Р Х., Л. Ат. сЬет. Зос., 86, 3697 (1964). 27. Березин Н. В., Казанская Н. Ф., Кяесоз А. А., РЕВЗ Ье((в., 15, 121 (1971), 28. Блуз!тот Е., ВюсЬип. Ьюриув. Ас1а, 54, 179 (!961); 56, 605 (1962). 29. Зсйватге Х. Н., Еьрталл Р., Ргос. па1п. Асад. Зс(., (Х. 5. А., 47, !996 (1961). ЗО, Вштеп Н., ВиПег К., 97ь!зол Х. В., В1осЬепив(гу, 8, 1042 (1969). 3!. 5луйег 5. Е., Эуь!яол Х. В., В(осЬет(в!гу, 11, 3220 (1972). 32, В!осИ Вт,, Зсуйесйлуег М.
Х., Л. Ьюь. СЬет., 248, 5794 (1973). ЗЗ. СМеЬовзМ Х. Р., АгтПауе !. М., Таза Р. Р., Со!етал Х. Е., Л. Ььо1. СЬет., 251, 1207 (!976). 34. СИарре(е!.Тогйо О., Хва!яиЬо М., Еагйилйяу! Мн ВюсЬегп!з1гу, 13, 3754 (1974). 35. КПяаеьтег О. 5., Аке!той В., Л. Ыо1. СЬеьп., 227, 879 (!957). 36. ОзгтовяМ ЯГ., Ватлшй Е. А., ВюсЬет(в!гу, 12, 3893 (1973). 37. УуаПел(е!з К., Кше О., В1осЬегп. 2., 335, 559 (1962).
ЗВ. (раПел(е!я К., Маудогга О. Р., Ада, СагЬоЬуд. СЬегп., 16, 239 (1961). 39. КозИ!алй О. Е., Хт., !п; МсЕ!гоу ь(т. В., Сь(авз )г. (едв.), Месиап(впьв о! ептупье асВоп, р. 608, ЛоЬпв НорЫпв Ргезв, ВаЕдпюге (1954). 40. Пир!еу Х. А., Оп!ее Уи Ргос. па1п. Асад. Зс(., (Х.
5. А., 57, 496 (1967). 41. РоПоса Х. Х., С!иртал О. Ми ЗИатол Ф., АгсЬв ВюсЬет. В!орЬув., 120, 235 (1967). 42 5(оИез Т. М., (РВзол Х. В., ВьосЬепь)в1гу, 11, 1061 (1972). 43. 5!ллоП М. Е., УПа(епе О. Е., ВюсЬепь. Л., !ЗЗ, 81 (1973). 44. Зьлло!! М. Е., Зоисашй Х. Х. Е., ВюсЬет. Л., 133, 89 (1973). 45. 5!ллоП М. Е., !РПИегя 5. О., ВьосЬет. Л„143, 751 (1974), 46, Носу!алй М.
В., ВьосЫьп. ЫорЬув. Ас(а, 16, 288 (!955), 47. Вегу Р., Р., Л. Ььо!, СЬев., 222, 1025 (1956). 48. Носу!алй М. В., КеПег Е, В„Затеял!И Р. С., Л. Ььо!, СЬет., 218, 345 (1956). 49. 5оП О., ЗсЫтте! Р. Н., ТЬе Ептутев, 1О, 489 (1974). 50. Уатт!я А., Вегу Р., Ргос. па(п. Асад. Зс1., (Х. 5. А., 52, 330 (1964). 51. Ва!йгзт А. У., Веги Р., Л. Ььо!. СЬет., 241, 839 (1966).
52. Ео(!Х(е!й Н. Б., Ргод. (4ис(. АсЫ. )(св. (В Мо!. Вьоь.), 12, 87 (1972), 53, РегзИ! А. Н,, Кае!Илес М. М., ВюсЬегп(в(гу, 15, 818 (1976). 54. Регзп! А. Я., КаеьИлет М. М., В(осЬет(в!гу, 15, 3342 (1976). 55. Еовеу 5., 5!ау(ет Н, 5., Угеейя А. О., Вааег Й., Л. пю!. В1о(., 42, 1 (1969).
56. (уеЬет А., Наззе!Ьас!ь 57., В(осЫпь. ЬюрЬув. Ас(а, 15, 237 (1954). 57. Толотита У., КПауава 5., В1осЬип. ЬюрЬув. Ас(а, 28, !5 (1957). 58. Еутл Н. ((т., Тау!ог Е. )Р., ВюсЬеьп1в(гу, 9, 2975 (1970). 59. Тау!ог Е. )Р., Еутл Н. Я'., Моп О., В!оспегп(в!гу, Э, 2984 (1970). 60. Еутл Н. Вт., Тау1ог Е. )Р., В!осЬет(в(гу, 10, 4617 (1971).
61. ТгелгИат О. Н., Ватййеу Н. О., Есс!ее!оп Х. Р., ОГеейз А. О., ВюсЬет. Л., 126, 635 (1972). 62, ВаузИав С. Н., Есс!айол Х, Р., Ттел!Иат О. К., уа!ез О. %7., Ооойу Я 5,, Со1д ЗрНпд НагЬ. Яутпр. Оиап!. В(о!., 37, 127 (1972). 63. ВауяИав С. Н., Тгел!Иат О.
Х!., ВюсЬет. Л., 133, 323 (1973) . 64. ВаузИав С. )7., Тгел!Иат Р Аь., ВюсЬет. Л., 141, 331 (1974). 65. ВаузИав С. Х!., Есс!езгол Х. Р., ЕсИзяет Р., боойу Я. 5., Оиг(теилй Н, Тгел!Иат О. Н„В(осЬет, Л., 141, 35! (!974). 66.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
