А.И. Нетрусов, М.А. Егоров - Практикум по микробиологии (1125598), страница 59
Текст из файла (страница 59)
Количество актиномицетов в почве очень вели ко и люжет достигать миллиона колониеобразующих единиц (КОЕ) на 1 г сухой почвы. Некоторые представители являются важными компонентами нормальной микрофлоры кишечника, кожи и слизистых оболочек человека и животных. Так, виды рода Асг!логлусез считаются естественными обитателями полости рта человека. Однако помимо сапротрофных форм и комменсалов, среди актиномицетов встречается достаточно большое количество патогенных форм. Среды для выделения актиномицетов.
Используют различные среды, содержащие органические вещества растительного и животного происхождения, например МПА, сусло-агар„картофельный агар, а также синтетические среды. Оптимальная температура для роста мезофильных почвенных актиномицетов составляет 23 — 30 С, а диапазон рН вЂ” 4,5 — 9,0 при оптимуме рН б,)! — 7,5. Ниже приведены составы 5 сред, на которых выявляются различные почвенные актиномицеты, в особенности те, что принадлежат к роду уггерГстусек Среда Х: крахмал — 20 г; КНРОе — 0,5 г; МКЯ04 7НзΠ— 0,5 г; КХОз — 1,0 г; )ЧаС!— 0,5 г; Ге$04 — 0,01 г; агар — 30 г; вода — !000 мл; рН 7,2 — 7,4. Среда 2: пелтон — 1 г; глюкоза — 5 г; Мя80,.
7Н,Π— 0,4 г; КзНРО4 — ' 0,4 г; агар— 30 г; процеженный отвар картофеля — 100 лп (20 г картофеля варят в !00 мл воды, фильтруют и доводят водой объем до 100 мл); вода — до 1000 мл; рН 7,2 — 7,4. Среда дн гороховая мука — !О г; глюкоза — !О г; ХаС! — 5 г; СаСОг — 1 г; агар — 30 г; вода — до!000 мл; рН 7,2 — 7,4. Среда 4: мясной экстракт — 50 мл; пептон — 4 г; )чаС! — 2,5 г; дрожжевой экстракт— 5 мл; глюкоза — 10 г: агар — 30 г; вода — до 1000 мл; рН 7,2 — 7,4. Среда 5: крахмал — 10 г; дрожжевой экстракт — 5 г; кукурузный экстракт — 10 г; НаС! — 2 г; агар — 30 г; вода — до 1000 мл; рН 7,2 — 7,4. Наиболее распространенной средой для учета стрептомицетов в почве является крахмала-аммиачная среда: (МНд)250~ — 2 г; К2НРОм Мя504 7НгО и ХаС! по 1 г; СаСОз — 3 г; крахмал — 10 г; агар — 20 г; вода — 1000 мл. 200 При засеве питательных сред разведение делают в зависимости от предполагаемого количества актиномицетов в исследуемом субстрате.
Часто готовят взвесь из расчета 1 г почвы на 10 мл воды, а посев производят обычно из 2 — 4 разве- лений, т.е. 1: 100, 1: 1000, 1: 10000. При этом на поверхность среды в чашки Петри наносят 0,05 мл взвеси и растирают шпателем по поверхности. Засеянные чашки культивируют при температуре 25 — 28 'С в течение 7 — 10 сут. Колонии стрептомицетов и некоторых других актиномицетов хорошо распознаются невооруженным глазом. Большей частью они окрашены в разные цвета — бурый, черный, желтый, красный и т.д. Колонии многих стрептомицетов покрыты пушистым, бархатистым или мучнистым налетом и практически не снимаются с поверхности агара бактериологической петлей.
Для подтверждения принадлежности выделенных бактерий классу Асйлобас1ег(а необходимо исследовать их морфолопгю, физиолого-биохимические и хемотаксономические особенности, а если это необходимо, провести молекулярно-генетические тесты. 14.5. УКСУСНОКИСЛЫЕ БАКТЕРИИ Накопительнук> культуру уксусн ока ел ых бактерий получить достаточно просто. Во-первых, они способны выдерживать высокие (до 10%) концентрации спирта, который используют в качестве окисляемого субстрата. Во-вторых, они чснее других бактерий чувствительны к уксусной кислоте, которую образуют пз спирта при дыхании.
Для получения накопительной культуры уксуснокислых бактерий среду, содержащую 40 мл этилового спирта и 10 г дрожжевого экстракта в 1 л воды (рН доводят до 6,0), инокулирук>т плодами, цветками, листьями плодовых растений. Пиво и вина при нарушении технологии их хранения также служат прекрасным субстрагом для активного развития и получения накопительной культуры уксуснокислых бактерий. Так, легко получить накопительную культуру уксуснокислых бактерий в колбе, содержащей 30 — 50 мл пива, слегка подкисленного уксусной кислотой (можно использовать 5 — 10 мл 9%-го столового уксуса).
Через двое суток инкубации на поверхности пива появится сероватооелая пленка уксуснокислых бактерий. Их видовой состав будет зависеть от температуры инкубации: при 25 — 30'С уксуснокислые бактерии будут представлены видом Асе1обас~ег раз!еиг1аииз, при 20 — 22 С преимущественное развитие получат А. асей и А. ху1Ьигл. Выделение уксуснокислых бактерий в чистую культуру проводят на мясопептонном агаре с добавлением 2 % глюкозы или на сусло-агаре, в который после стерилизации вносят 3% этилового спирта.
14.6. МЕТИЛОТРОФНЫЕ БАКТЕРИИ Бактерии, выделяемые а аэробных условиях на простых минеральных срелах с метанолом в качестве единственного источника углерода и энергии для роста, относят к семейству МегЬу1оЬас1ег(пш. Это розовые факультативные иетилотрофные грамотрипательные подвижные палочки, способные к росту 201 на средах с метанолом или метиламином, так же как и на средах с полиуглеродными субстратами (сукцинатом, лактатом, фруктозой), хотя обычно на богатых средах (МПА) они не развиваются. Культуры таких микроорганизмов могут быть выделены практически из любых местообитании: воздуха, почвы, воды — так как в любом из таких мест может находиться метанол — продукт природной биодеградации пектинов и лигнинов.
Метилобактерии прекрасно переживают перенос с частичками пыли по воздуху и их выделяют из большого количества часто необычных мест: из осадков озер, поверхности веток и листьев деревьев, зерен риса, воздуха больниц, даже из кремов для липа и с поверхности компьютерных чипов. В силу своей способности метаболизировать различные продукты разложения отмерших растений метанол, метилированные амины и различные другие метилированные субстраты играют важную экологическую роль в глобальном цикле углерода. Способность переживать высушивание и расти на средах с минимальныь!и концентрациями углерода и азота делают их идеальными кандидатами на выживание в стрессовых условиях.
Обнаружены также внутри- и внеклеточные ассоциации метилобактерий и некоторых растений, особенно с мхами (печеночники), плаунами и лишайниками, хотя прямые симбиозы и обмен органическим веществом между организмами пока не доказаны. Метилобактерии сравнительно легко выделяются из проб окружающей среды (см. также приложение 4). Обычная дяя роста метилобактерий среда с метанолом (ММБ) содержит (г/л): К,НРО4 — 1,2; КН,РО, — 0,62; СаС!з 6НзΠ— 0,05~ МАЗО, 7НзО— 0,20; ИаС! — 0,10. Микроэлементы (мкг/л, конечная концентрация в среде): ГеС1, 6НзО— 1000,0; (ХН4)зВО~ — 0,5; Сп5О~'5Н~Π— 5„0; МпБО4' 51!зΠ— 10,0; 1чазМоОт 2НзО— 10,0; НзВО, — 10„0; ЪБО4. 7НгΠ— 70,0; СоС1, 6НтΠ— 5,0.
Стерилизация осуществляется при 1 ати. В стерильную среду добавляют стерильный (фильтрация) метанол до О,! — 0,2%, рН среды 7,0. В агаризованную среду добавляют 0,5 — 2,0% очищенного агара (выщелоченного). Метилобактерии не требуют витаминов.
Культуры развиваются при 5 — 37'С, но лучше при 30 С, обычно необходимо 2— 3 суг для появления видимых окрапгенных колоний, а к 7-м сут колонии'могут достигать 1 — 3 мм в диаметре. Колонии появляются быстрее и их пигментация заметнее на глилероллелеюпнож агире (г/л): глицерол — 10,0; пелтон — 10,0; агар — !5,0. Стерилизация осугдествляется при 1 ати, рН 7,0.
В случае появления на чашках больших количеств грибов при выделении метилобактерий из некоторых местообитаний рекомендуют добавлять 20 мкг/мд циклогексимида. Выделенные метилобактерии обычно представлены палочками (1 — 8 мкм), одиночными или формирующими розетки, часто они разветвлены или плейоморфны, особенно в старых культурах. Все штаммы подвижны благодаря наличию полярных, субполярных или латеральных жгутиков.
Часто клетки содержат большие, окрашиваемые суданом включения (поли-б-оксибутират), а также гранулы волютина. Подавляющее большинство штаммов граммотрицательны, некоторые — грамвариабельны. Пигменты, образуемые метилобактериями, не диффундируют в агар, не флуоресцируют и, возможно, относятся к каротиноидам.
![](https://s.studizba.com/z.php?f=/templates/si/i/noavatar.png&w=100&h=100&t=1"){kind=avatar}
